目的:观察磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3(PIK3R3)对人肺腺癌细胞增殖及细胞周期的影响。方法:通过分别转染质粒或短发卡RNA(shRNA)，将细胞分为以下6组：A549细胞，转染PIK3R3基因重组质粒组(PIK3R3组)、阴性转染对照组(Vector组)、空白对照组(Blank组)；PC-9细胞，转染shRNA组(si-PIK3R3组)、阴性转染对照组(si-scramble组)、空白对照组(Blank组)。以蛋白质印迹法(Western blot)检测PIK3R3对细胞周期蛋白激酶p21、p27及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的作用，以细胞计数试剂盒(CCK-8)法及溴脱氧核苷尿嘧啶/碘化丙锭(BrdU/PI)法检测细胞增殖活性，以流式细胞术分析PIK3R3对细胞周期的影响。组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 t检验。 结果:与空白对照组和阴性对照组比较，转染PIK3R3基因重组质粒组PIK3R3的蛋白表达量明显增加( t＝17.780， P<0.05)、细胞生长加速，细胞增殖活性明显增强( t＝13.880， P<0.05)、S期细胞比例增多为(50.23±2.12)%，细胞周期调控蛋白p21、p27表达升高，Cyclin D1表达降低，差异均有统计学意义( t＝38.590， P<0.05)。而转染PIK3R3的shRNA组可明显出现与上述相反结果，S期细胞比例减少至(19.32±2.16)%。 结论:PIK3R3可促进人肺癌细胞的增殖，并可能是通过调节细胞周期发挥作用。

目的:分析大骨节病（KBD）患者沉默信息调节因子2相关酶类1（SIRT1）的表达及其与软骨细胞凋亡的关系。方法:从青海省KBD病区贵德县选取20例KBD患者作为KBD组，同时在病区选取年龄和性别匹配的40例健康受试者作为对照组。采集研究对象的空腹肘静脉血，采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测外周血SIRT1及硒蛋白基因[谷胱甘肽过氧化酶（GPX）2、GPX3、硫氧还蛋白还原酶（TXNRD）1、TXNRD3、碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅰ（DIO1）、硒磷酸合成酶2（SPS2）]mRNA水平；并采用曲线拟合法进行KBD患者外周血SIRT1与硒蛋白基因表达关联分析。同时，体外培养人正常软骨细胞，分为对照组（未经任何处理）、单纯白藜芦醇（RES）组（验证RES对SIRT1的激活作用）、叔丁基过氧化氢（tBHP）损伤组（软骨细胞氧化损伤模型）和RES保护组（RES预保护后进行tBHP损伤），采用real-time PCR检测各组细胞SIRT1，硒蛋白基因及凋亡相关基因[B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、BCL2相关X蛋白（BAX）、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤抑制基因P53]mRNA水平。结果:人群研究中，KBD组外周血SIRT1 mRNA水平（1.12 ± 0.38）低于对照组（1.87 ± 0.97），差异有统计学意义（ t = 3.31， P = 0.002）。经曲线拟合分析，KBD组外周血GPX3、TXNRD1和TXNRD3 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均有所升高（ R2 = 0.48、0.66、0.95，均 P < 0.001）；DIO1 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高呈现先下降后上升的趋势（ R2 = 0.51， P = 0.024）；GPX2、SPS2 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均未见显著变化趋势（ R2 = 0.16、0.12， P = 0.064、0.114）。细胞实验中，与对照组（1.00 ± 0.10）比较，单纯RES组SIRT1 mRNA水平（1.79 ± 0.07）较高（ P < 0.05）。与tBHP损伤组比较，RES保护组硒蛋白基因GPX3、TXNRD1、TXNRD3、DIO1 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）；凋亡相关基因BAX、P53 mRNA水平及BAX/BCL2比值均较低，BCL2、NF-κB p65 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）。 结论:KBD患者SIRT1低表达；RES激活SIRT1后可能通过上调硒蛋白基因表达来增强软骨细胞抗氧化能力，从而抑制软骨细胞凋亡。

随着甲状腺彩色多普勒超声被纳入常规体检项目，甲状腺良恶性病变的阳性检出率逐年走高，甲状腺术后患者成为一个越来越庞大的群体，但外源性补充甲状腺激素如何替代缺失甲状腺方面的研究尚不完善。脱碘酶作为甲状腺激素激活和失活的开关，对维稳人体的内环境具有重要作用，这些酶的表达在个体中会随着每个器官的不同需求而出现变化。以往我们在基础医学方面对脱碘酶做出很多详尽描述，但在临床方面的作用原理相对缺失。本文通过查阅文献对脱碘酶的作用机制作一综述，拟探讨脱碘酶在甲状腺术后外源性补充甲状腺激素中的基本原理。

目的:探究PE_PGRS60蛋白在结核分枝杆菌感染致病中的潜在作用机制。方法:用克隆并纯化的PE_PGRS60蛋白刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞，qRT-PCR和Western blot检测环氧合酶2(cyclooxygenase 2, COX2) mRNA和蛋白质表达。筛选可能调控COX2表达的信号通路，并用ELISA检测PE_PGRS60诱导的炎性细胞因子表达，乳酸脱氢酶试验和碘化丙啶(PI)染色，流式细胞术观察细胞死亡情况。Western blot检测活动性肺结核患者的外周血单个核细胞(PBMC)中COX2表达情况。结果:克隆纯化的结核分枝杆菌PE_PGRS60蛋白促进RAW264.7细胞中COX2的显著表达，并活化了MAPK家族的3个主要成员即细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase, ERK)、p38和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)，但只有JNK的抑制剂JNK-IN-7可阻断PE_PGRS60诱导的COX2上调。后续研究发现，COX2在活动性肺结核患者PBMC中的表达也升高。COX2抑制剂塞来昔布可有效阻断PE_PGRS60诱导的炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6表达，并促进巨噬细胞死亡。结论:PE_PGRS60可通过激活JNK/COX2信号轴，促进巨噬细胞释放炎症因子，在COX2的阻止下仍有部分巨噬细胞发生死亡。

目的:探究碘化钾诱导甲状腺滤泡细胞焦亡的分子机制。方法:ELISA检测桥本甲状腺炎合并甲状腺癌组织中焦亡指标白细胞介素(interleukin, IL)-1β及IL-18的含量，以癌旁桥本甲状腺炎组织为对照；Western印迹检测焦亡标志性蛋白焦孔素(gasdermin, GSDM)的活化情况。碘化钾作用于甲状腺滤泡细胞，检测细胞焦亡IL-1β、IL-18、乳酸脱氢酶(LDH)的分泌及GSDM蛋白的活化及分子机制；转录组芯片分析高浓度碘化钾诱导甲状腺滤泡细胞差异性表达的分子及其在焦亡中的作用机制。结果:桥本甲状腺炎合并甲状腺癌组织中IL-1β和IL-18细胞因子含量较同一患者癌旁桥本甲状腺炎组织显著升高( P<0.01)，且焦亡标志性蛋白GSDMD的活化显著，而GSDME无显著活化改变。高浓度碘化钾作用于甲状腺滤泡细胞后，通过激活核因子-κB (NF-κB)/NLRP3信号轴诱导IL-1β、IL-18、LDH的分泌( P<0.01)和GSDMD活化，使甲状腺滤泡细胞发生焦亡。转录组芯片分析发现，甲状腺滤泡细胞受高浓度碘化钾刺激后PARP1蛋白表达显著上调，并通过调控NF-κB转录因子的活性促进细胞焦亡。 结论:本研究发现高浓度碘化钾通过促进PARP1蛋白表达，诱导甲状腺滤泡细胞NF-κB/NLRP3炎症小体的活化，从而诱导甲状腺滤泡细胞发生炎症性焦亡。

目的:探讨大电导钙依赖性钾通道（BKCa）参与脓毒症发病的机制。方法:收集脓毒症患者（28例）、普通感染者（25例）和健康体检者（25例）血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BKCa水平；并分析脓毒症患者血清BKCa水平与急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）的相关性。培养RAW 264.7细胞，用脂多糖（LPS）刺激，部分实验以尼日尼亚菌素（Nigericin）作为第二刺激信号构建脓毒症细胞模型；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）测定不同浓度LPS（0、50、100、1 000 μg/L）刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达。RAW 264.7细胞转染BKCa的小干扰RNA（siRNA-BKCa），用Western blotting测定细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1前体（pro-caspase-1）、白细胞介素-1β前体（pro-IL-1β），细胞培养液中caspase-1 p20、IL-1β p17，以及NOD样受体蛋白3（NLRP3）、核转录因子-κB（NF-κB）水平。碘化丙啶（PI）染色后荧光显微镜下观察凋亡情况，测定乳酸脱氢酶（LDH）释放率，Western blotting测定细胞凋亡蛋白Gasdermin D（GSDMD）表达以评估沉默BKCa对细胞焦亡的影响。结果:脓毒症患者血清BKCa明显高于普通感染者和健康体检者（ng/L：165.2±25.9比102.5±25.9、98.8±20.0，均 P<0.05），且脓毒症患者血清BKCa水平与APACHEⅡ评分呈显著正相关（ r＝0.453， P＝0.013）。用LPS构建脓毒症细胞模型，显示LPS呈浓度依赖地促进BKCα的mRNA和蛋白表达，1 000 μg/L刺激后细胞BKCa的mRNA和蛋白表达水平均较空白组（0 μg/L）明显增加〔BKCa mRNA（2 -ΔΔCt）：3.00±0.36比1.00±0.16，BKCa/β-actin：1.30±0.16比0.37±0.09，均 P<0.05〕。与对照组比较，模型组细胞caspase-1 p20/pro-caspase-1比值、IL-1βp17/pro-IL-1β比值均明显升高（caspase-1 p20/pro-caspase-1比值：0.83±0.12比0.27±0.05，IL-1βp17/pro-IL-1β比值：0.77±0.12比0.23±0.12，均 P<0.05）；但转染siRNA-BKCa后二者均较模型组明显下降（caspase-1 p20/pro-caspase-1比值：0.23±0.12比0.83±0.12，IL-1βp17/pro-IL-1β比值：0.13±0.05比0.77±0.12，均 P<0.05）。与对照组比较，镜下观察模型组凋亡细胞明显增多，LDH释放率、GSDMD表达明显增加〔LDH释放率：（30.60±8.40）%比（15.20±7.10）%，GSDMD-N/GSDMD-FL：2.10±0.16比1.00±0.16，均 P<0.05〕；但转染siRNA-BKCa后上述指标均较模型组明显下降〔LDH释放率：（15.60±7.30）%比（30.60±8.40）%，GSDMD-N/GSDMD-FL：1.13±0.17比2.10±0.16，均 P<0.05〕。脓毒症细胞NLRP3的mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显增加〔NLRP3 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.06±0.17比1.00±0.24，NLRP3/GAPDH：0.46±0.05比0.15±0.04，均 P<0.05〕；但转染siRNA-BKCa后NLRP3表达较模型组明显下降〔NLRP3 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.57±0.09比2.06±0.17，NLRP3/GAPDH：0.19±0.02比0.46±0.05，均 P<0.05〕。与对照组比较，脓毒症细胞NF-κB p65核转移明显增加（NF-κB p65/Histone：0.73±0.12比0.23±0.09， P<0.05）；而转染siRNA-BKCa后细胞核中NF-κB p65表达明显下降（NF-κB p65/Histone：0.20±0.03比0.73±0.12， P<0.05）。 结论:BKCa参与脓毒症发病，其可能机制是激活NF-κB/NLRP3/caspase-1信号通路诱导炎症因子生成和细胞焦亡。

脂毒性与甲状腺功能减退(甲减)有着密切联系，脂毒性诱导甲减的机制尚处于探索阶段。目前的研究发现，炎性因子可下调甲状腺滤泡上皮细胞碘摄取及激素合成；组织中脱碘酶的表达和活性变化可影响T 4的转化；氧化应激过度激活可损伤甲状腺滤泡上皮细胞特异性蛋白表达。此外，赖氨酸琥珀酰化修饰异常及内质网应激(ERS)激活在脂毒性诱导甲状腺功能损伤中的作用成为研究热点。对脂毒性诱导甲减的机制进行深入研究将为脂毒性致全身损伤提供理论依据。

目的:探究不同妊娠时期棕色脂肪组织(brown adipose tissue，BAT)的基因表达及代谢能力变化。方法:建立C57BL/6J小鼠正常妊娠动物模型，以同周龄未妊娠小鼠为对照组，观察妊娠各时期BAT组织形态变化，检测产热标志物解偶联蛋白1(UCP1)表达，揭示脂肪棕色化及线粒体标志基因的mRNA水平变化；此外选取妊娠早期和晚期小鼠BAT进行转录组测序(RNA sequencing, RNA-seq)，筛选随妊娠进程的差异表达基因，并开展基因本体(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)分析。结果:随妊娠进展，BAT脂滴显著增大，产热标志蛋白UCP1表达下降( P<0.01)，脂肪棕色化标志基因Ucp1、2型脱碘酶(Dio2)、过氧化物酶增殖体激活受体γ辅激活因子1α(Pgc1α)以及线粒体标志基因细胞色素C(CytC)均显著下调( P<0.001)，以妊娠晚期组减弱最为显著。RNA-seq共筛选出差异表达基因1 298个，其中906个基因在妊娠晚期上调、392个基因下调，GO及KEGG通路分析显示差异表达基因在脂质代谢、性类固醇激素、炎症因子等多种生物调节功能通路富集。 结论:小鼠妊娠晚期BAT出现脂滴变大、产热活性与代谢能力降低现象，BAT基因表达在妊娠不同时期存在显著差异，因此BAT代谢能力降低可能是引发妊娠期代谢异常的重要原因。

1例68岁女性浸润性尿路上皮癌患者术后接受免疫治疗（维迪西妥单抗120 mg+特瑞普利单抗240 mg静脉滴注、第1天，14 d为1个周期）。首次用药后19 d，患者诉腰部肌肉酸痛，实验室检查示肌酸激酶（CK）1 079 U/L，CK-MB 33 U/L。暂停第2个周期免疫治疗，并予泼尼松20 mg口服、1次/d。5 d后，患者出现胸闷，实验室检查示CK 3 366 U/L，CK-MB 91 U/L，乳酸脱氢酶518 U/L，肌红蛋白1 282 μg/L，高敏肌钙蛋白T 0.068 μg/L，氨基末端脑利钠肽前体148 ng/L。结合心脏彩色多普勒超声检查结果，考虑为维迪西妥单抗和特瑞普利单抗联用所致心肌炎，将泼尼松换为甲泼尼龙160 mg静脉滴注、1次/d。患者上述实验室检查指标逐渐下降，但心电图检查示异位心律，给予胺碘酮等治疗。甲泼尼龙静脉滴注11 d后，改为甲泼尼龙片20 mg口服、1次/d（逐渐减量并停用）。停用激素后4 d复查，患者实验室指标和心电图未见异常。

目的:评价7，8-二羟基黄酮（7，8-dihydroxyflavone, 7，8-DHF）对过氧化氢（hydrogen peroxide, H 2O 2）引起PC12细胞损伤的影响，并探究其机制。 方法:采用随机数字表法将PC12细胞分为4组（每组4皿）：对照组（C组）、7，8-DHF组（D组）、H 2O 2组（H组）、7，8-DHF+H 2O 2组（D+H组）。C组加入PBS缓冲液，D组加入25 μmol/L 7，8-DHF，H组和D+H组均加入200 μmol/L H 2O 2，D+H组在加入H 2O 2前采用25 μmol/L 7，8-DHF预处理1 h。各组细胞孵育24 h后采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）法检测细胞活力，2，4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）释放率，Hoechst染色法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-fluorescein isothiocyanate, FITC）/碘化丙啶（propidium iodide, PI）双染法结合流式细胞仪观察并分析细胞凋亡情况，实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, RT-qPCR）法测定酸敏感离子通道3（acid-sensing ion channel 3, ASIC3）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）/B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（B-cell lymphoma-2 related X protein, Bax）的mRNA表达，Western blot法测定ASIC3、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3, cleaved caspase-3）蛋白水平。 结果:与C组比较：H组PC12细胞数量和细胞活力明显降低，LDH释放率及细胞凋亡率明显升高，ASIC3 mRNA表达和蛋白水平均上调，cleaved caspase-3蛋白水平上调，Bcl-2/Bax mRNA比值和蛋白比值均降低（ P<0.05）；D组和D+H组上述指标差异无统计学意义（ P>0.05）。与H组比较，D+H组细胞形态接近正常，细胞数量和细胞活力明显升高，LDH释放率及细胞凋亡率明显降低，ASIC3 mRNA表达和蛋白水平均下调，cleaved caspase-3蛋白表达下调，Bcl-2/Bax mRNA比值和蛋白比值均升高（ P<0.05）。 结论:7，8-DHF可以减轻H 2O 2引起的PC12细胞损伤，其机制可能与抑制ASIC3信号从而减轻细胞凋亡有关。