目的:探究落新妇苷(AST)调节低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和血管生成拟态(VM)的影响.方法:用不同浓度的AST(0、5、25、50、100、150、200、300 μmol/L)处理乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231,采用CKK-8法检测细胞活力.将MCF-7、MDA-MB-231细胞分为对照组、AST低剂量(AST-L)组、AST中剂量(AST-M)、AST高剂量(AST-H)组、AST-H+DMOG(HIF-1α/VEGF通路激活剂)组,EdU法检测AST处理对乳腺癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测其对细胞迁移、侵袭能力的影响,Matrigel管型形成实验检测其对细胞VM形成的影响,WB法检测对细胞中HIF-1α、VEGF、VE-cadherin、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2表达的影响.结果:与0 μmol/L AST相比,5、25、50、100、150、200、300 μmol/L AST处理的细胞活力显著下降,呈剂量依赖性(P<0.05).与对照组相比,AST-L、AST-M、AST-H组细胞EdU阳性率、细胞迁移数、细胞侵袭数、VM管腔数目、HIF-1α、VEGF、VE-cadherin、N-cadherin、MMP-2 表达均显著下降,而细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达显著升高(均P<0.05);与AST-H组相比,AST-H+DMOG组细胞EdU阳性率、细胞迁移数、细胞侵袭数、VM管腔数目、HIF-1α、VEGF、VE-cadherin、N-cadherin、MMP-2表达均显著升高,而细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达均显著下降(均P<0.05).结论:AST能抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和VM形成,促进凋亡,其作用机制可能与抑制HIF-1α/VEGF信号通路有关.

目的:建立护肝解毒汤标准煎液的指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为其标准煎液及制剂的质量评价研究提供参考.方法:采用HPLC法结合中药色谱指纹图谱相似度评价系统,对15批护肝解毒汤标准煎液进行指纹图谱、相似度分析及共有峰的指认,并建立煎液中5种指标性成分的同时检测方法,计算各成分的转移率.结果:15批标准煎液指纹图谱相似度＞0.90,有22个共有峰,对照品比对出绿原酸、葛根素、芍药苷、甘草素、落新妇苷、黄藤苷、盐酸小檗碱、五味子醇甲、黄柏酮、梣酮10个成分,15批标准煎液中绿原酸、葛根素、落新妇苷、盐酸小檗碱、五味子醇甲的转移率分别为48.26％～63.80％、20.30％～31.50％、28.24％～39.11％、2.89％～5.60％、13.51％～21.85％.结论:采用指纹图谱、出膏率及指标性成分含量测定相结合的模式,对护肝解毒汤标准煎液的量值传递过程进行分析,可初步拟定护肝解毒汤标准煎液的质量标准,为其后续新药开发及相关制剂的质量控制提供依据.

目的 建立加味二妙颗粒指纹图谱以及多成分含量测定方法,为其质量控制提供参考.方法 采用HPLC-Q-TOF/MS分析加味二妙颗粒中的化学成分.色谱柱为Wondasil C18 Superb(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为乙腈-体积分数0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,对10 批加味二妙颗粒进行指纹图谱和4 种指标性成分含量测定.结果 HPLC-Q-TOF/MS技术共鉴定出加味二妙颗粒中144 个化合物,指纹图谱中标定了15 个共有峰,并通过对照品比对指认出(R,S)-告依春、去乙酰车叶草苷酸甲酯、盐酸黄柏碱、橙皮苷等9 个峰,加味二妙颗粒指纹图谱的相似度均>0.95;测定(R,S)-告依春、落新妇苷、橙皮苷和小檗碱 4 个指标性成分含量,质量分数分别为 0.021 1～0.056 8 mg·g-1、0.200 9～0.552 3 mg·g-1、0.274 1～0.719 1 mg·g-1、0.237 1～0.704 9 mg·g-1.结论 建立的加味二妙颗粒指纹图谱和多成分含量测定方法能够全面反映加味二妙颗粒的质量特征,亦为建立其制剂质量标准提供了依据.

目的:观察防粘汤对宫腔粘连模型大鼠炎症因子、T细胞亚群及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路关键分子蛋白表达的影响,探讨防粘汤对宫腔粘连的治疗作用.方法:首先使用HPLC法分析防粘汤各药物主要有效成分,将76只SD大鼠随机分为正常组和造模组,采用机械刮宫及感染双重损伤建立宫腔粘连大鼠模型,造模成功后,将造模组动物随机分为模型组、雌激素组及防粘汤低、中、高剂量(4.14 g·kg-1·d-1、8.28 g·kg-1·d-1、16.56 g·kg-1·d-1)组.每天1次,连续灌胃给药21 d后处死大鼠,收集其血清、脾脏、肝脏及双侧子宫组织,采用HE及Masson染色观察其组织病理学变化;HE染色观察肝脏组织病理变化;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6及TGF-β1的表达;Western Blot法检测子宫组织中PI3 K、p-Akt及Akt蛋白的表达;流式细胞仪检测大鼠脾淋巴细胞CD4+、CD8+亚群的变化.结果:防粘汤中含有金丝桃苷、甘草苷、落新妇苷、阿魏酸、丹酚酸B及淫羊藿苷.与正常组相比,模型组大鼠子宫组织明显肿胀、短缩,质硬,无弹性,子宫内膜菲薄,结构被破坏,腺体数量少,有大量炎性细胞浸润,胶原纤维增生明显;血清TNF-α、IL-6及TGF-β1表达显著升高(P<0.05,P<0.01);子宫组织中PI3 K、Akt、p-Akt蛋白表达明显增多(P<0.01);CD4+细胞比例下降而CD8+细胞比例上升,CD4+/CD8+比值降低(P<0.05,P<0.01).与模型组相比,防粘汤中、高剂量组大鼠子宫形态改善明显,炎症渗出明显减少,子宫内膜腺体数量增多,纤维化面积减少;血清TNF-α、IL-6及TGF-β1水平明显降低(P<0.05,P<0.01);子宫组织中PI3 K、Akt、p-Akt蛋白表达显著减少(P<0.05,P<0.01);CD4+/CD8+比值升高(P<0.01).结论:防粘汤能促进宫腔粘连大鼠子宫内膜组织修复,减少炎性浸润,改善免疫调节,抑制PI3 K/Akt信号通路中关键蛋白的表达,延缓子宫内膜纤维化.

目的:采用HPLC法建立化湿泄浊祛瘀汤配方颗粒指纹图谱,为其质量标准建立提供依据.方法:采用Ultimate AQ C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以水-乙腈为流动相,梯度洗脱;流速为 1.0 mL/min;检测波长为330 nm;柱温为 40℃;进样量为 20 μL.结果:建立了化湿泄浊祛瘀汤配方颗粒的HPLC指纹图谱,标定了 63 个共有峰,并指认了其中6个成分,分别为隐丹参酮、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、苍术素、落新妇苷、大车前苷,10 批化湿泄浊祛瘀汤配方颗粒指纹图谱与对照图谱的相似度为0.842～0.998.聚类分析和主成分分析均将 10 批样品分为 2 类.结论:该研究建立的化湿泄浊祛瘀汤配方颗粒HPLC指纹图谱方法简便,结果可靠,可为其质量控制和评价提供参考.

目的:建立菝葜标准汤剂 HPLC特征图谱及成分含量测定方法.方法:建立 16 批菝葜标准汤剂的HPLC特征图谱,并进行相似度评价、聚类分析及主成分分析,对其中 3 个成分含量进行测定,计算转移率和出膏率.结果:建立的 16 批菝葜标准汤剂HPLC特征图谱标定了 14 个共有峰,指认出 7 个成分,标准汤剂样品与对照图谱的相似度为 0.939～0.997;聚类分析和主成分分析结果基本一致,均将样品分为 3 大类.16 批菝葜标准汤剂的出膏率为 9.14%～13.60%,绿原酸、落新妇苷及白藜芦醇的含量分别为 9.98～21.91 mg/g、1.92～5.34 mg/g、0.10～0.93 mg/g;转移率分别为 16.12%～59.19%、6.69%～33.70%、8.70%～63.96%.结论:该研究建立的特征图谱和含量测定方法稳定、可行,可用于菝葜标准汤剂的质量评价.

目的:对不同批次洗消液进行综合质量评价.方法:采用HPLC-QAMS法建立15批洗消液中落新妇苷、黄杞苷、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、黄柏酮、苦参碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱和地肤子皂苷Ic的含量测定方法,采用化学计量学和熵权TOPSIS法对洗消液的整体质量进行综合评价.结果:10种成分的线性范围分别为 1.88～94.00、1.09～54.50、1.47～73.50、0.74～37.00、0.26～13.00、1.30～65.00、0.82～41.00、0.53～26.50、4.15～207.50、3.26～163.00μg/mL(r＞0.999 0),精密度、重复性、稳定性试验的RSD均＜2.0％;平均加样回收率(n=9)在96.74％～100.11％之间(RSD＜2.0％).聚类分析和主成分分析识别方法将15批样品分为3类;正交偏最小二乘法-判别分析发掘出氧化苦参碱、落新妇苷、羟基-α-山椒素、地肤子皂苷I c和黄柏酮在内的5个主要差异成分.熵权TOPSIS分析结果表明,S14质量最佳,S10质量较次.结论:所建立的方法可用于洗消液质量的综合评价.

目的 研究过岗龙(榼藤子Entada phaseoloides干燥藤茎)的化学成分.方法 应用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备型HPLC等色谱技术进行系统分离纯化,并通过核磁共振波谱、质谱等技术鉴定单体化合物的结构.结果 从过岗龙75％乙醇提取物中共分离得到17个化合物,分别鉴定为3-氧-泰国树脂酸(1)、6β-羟基-3-氧代齐墩果-12-烯-28酸(2)、泰国树脂酸(3)、苏门答腊树脂酸(4)、3β,6β-二羟基齐墩果-11,13(18)-二烯-28-酸(5)、(Z)-4-[3'-(β-D-glucopyranosyloxy)butylidene]-3,5,5-trimethyl-2-cyclohexen-l-one(6)、异落新妇苷(7)、黄杞苷(8)、槲皮苷(9)、3-O-α-L-鼠李糖-儿茶素(10)、(-)-epicatechin-3-O-p-hydroxybenzoate(11)、lysidicichin(12)、异补骨脂查耳酮(13)、4-羟基-3-甲氧基苯酚-1-O-β-D-(6'-O-没食子酰基)葡萄糖苷(14)、1,6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄吡喃糖(15)、苯甲酸(16)和没食子酸甲酯(17).结论 所有化合物均为首次从过岗龙中分离得到,为中药过岗龙的开发利用提供了一定的物质基础.

目的 建立不同来源的菝葜高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,结合多模式化学计量学分析菝葜饮片的质量.方法 建立18批菝葜HPLC指纹图谱,结合相似度评价、聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘-判别分析对不同来源的菝葜进行评价.结果 指纹图谱标定了 13个共有峰,指认出5个成分,分别为绿原酸、落新妇苷、槲皮苷、黄杞苷及白藜芦醇;相似度评价结果,18批样品除YP3以外,其余相似度均大于0.9;结合多模式化学计量学分析可以将18批样品分为三类,并筛选出6个可能导致菝葜质量差异的标志物.结论 本研究建立的指纹图谱方法简便、重复性好,结合多模式化学计量学分析可用于评价不同来源的菝葜质量.

[目的]基于网络药理预测祛浊通痹方(Quzhuo Tongbi,QZTB)治疗肥胖的有效成分和潜在机制,并采用肥胖模型小鼠验证其效果.[方法]利用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)筛选QZTB有效成分及靶点,检索DrugBank、人类基因组注释数据库(Human Genome Annotation Database,GeneCards)和在线人类孟德尔遗传(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)数据库收集肥胖的相关靶点,利用Venny 2.1在线平台筛选QZTB治疗肥胖的交集靶点,并制作韦恩图,根据STRING 11.5数据库构建蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络图,借助网络拓扑分析(Cytoscape network centrality analysis,CytoNCA)插件筛选QZTB治疗肥胖的核心靶点.利用Cytoscape 3.8.2软件建立"中药-成分-靶点-疾病"模型,筛选QZTB治疗肥胖的有效成分,并基于Metascape在线数据库对交集靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomics,KEGG)通路富集分析,通过Python对结果进行可视化.将C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组和QZTB组,通过高脂饲料诱导肥胖模型,灌胃给药10周后分离肝脏组织进行病理学检查,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)法检测肝组织丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(serine/threonine protein kinase 1,AKT1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的mRNA表达水平.[结果]通过靶点交集和PPI网络,筛选出QZTB治疗肥胖的重要靶点31个,其中AKT1、TNF-α和IL-6为核心靶点.槲皮素、落新妇苷、柚皮素和小檗碱可能是QZTB防治肥胖的关键成分.GO功能富集分析主要作用于细胞迁移的正调控、细胞对化学应激的反应生物过程、膜筏细胞成分和转录因子结合等分子功能途径,KEGG通路富集分析提示主要涉及晚期糖基化终产物及受体(advanced glycation end products-receptor for advanced glycation end products,AGE-RAGE)信号通路、脂质与动脉粥样硬化和胰岛素抵抗等通路.与模型组比较,QZTB可以明显改善雄性肥胖小鼠肝组织病变,明显升高AKT1的mRNA表达水平(P<0.01),显著降低TNF-α和IL-6的mRNA表达水平(P<0.01,P<0.001).[结论]QZTB可通过槲皮素、落新妇苷、柚皮素和小檗碱等活性成分,调控AKT1、TNF-α和IL-6等靶点表达,从而达到治疗肥胖的效果,为进一步探究临床治疗肥胖型痛风提供了科学依据.