目的:探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）的氧连乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰介导的核因子（NF）-κB信号通路对心肌细胞损伤的调节作用。方法:为了分析O-GlcNAc糖基转移酶（OGT）对SIRT1功能的影响，将H9c2细胞分为正常葡萄糖（NG）组、高糖（HG，30 mmol/L）组、HG+对照小干扰RNA（HG+siNC）组、HG+OGT siRNA（HG+siOGT）组、HG+对照质粒（HG+vector）组、HG+OGT过表达质粒（HG+OGT）组，每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc糖基化对SIRT1蛋白功能的影响，将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+二甲基亚砜（HG+DMSO）组、HG+OGT抑制剂（HG+Ac-5SGlcNAc）组和HG+OGA抑制剂（HG+NButGT）组，每组6个复孔。为了分析O-GlcNAc修饰位点突变对SIRT1功能的影响，将H9c2细胞分为NG组、HG组、HG+Vector组、HG+SIRT1 WT组和HG+SIRT1 S549A组，每组6个复孔。采用Western blotting检测细胞中SIRT1蛋白表达和O-GlcNAc糖基化修饰水平，以及NF-κB信号通路表达水平，使用2′，7′-二氯荧光素和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测试剂盒检测细胞活性氧（ROS）和凋亡水平，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α（TNF-α）］水平。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与NG组相比，HG组H9c2细胞中SIRT1蛋白降低（ P<0.001），OGT的表达水平升高（ P<0.001），同时H9c2细胞ROS和凋亡水平增加（ P<0.05），NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活（ P<0.05）；与HG+siNC组和HG+DMSO组比较，HG+siOGT组和HG+Ac-5SGlcNAc组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平均降低（ P<0.001），细胞内ROS和凋亡水平降低（ P<0.05），NF-κB信号通路介导的炎症反应被抑制（ P<0.05）；与HG+Vector组和HG+DMSO组比较，HG+OGT组和HG+NButGT组H9c2细胞中SIRT1的O-GlcNAc修饰水平增加（ P<0.05），细胞ROS和凋亡水平增加（ P<0.05），NF-κB信号通路介导的炎症反应被激活（ P<0.05）。与HG+SIRT1 WT组比较，HG+SIRT1 S549A组中H9c2细胞增殖能力降低（ P<0.01），细胞ROS和凋亡水平均增加（ P<0.01），NF-κB信号通路水平增加（ P<0.001）。 结论:高浓度葡萄糖通过增加SIRT1蛋白的O-GlcNAc糖基化修饰水平，抑制SIRT1的蛋白水平和功能，并导致细胞内NF-κB信号通路的激活，增加高糖诱导的细胞炎症反应，促进心肌细胞损伤。

目的:探讨尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸转移酶1A1（ UGT1A1）基因突变与儿童高间接胆红素血症表型的相关性。 方法:回顾性分析2013年7月至2019年11月于南京医科大学附属儿童医院消化科就诊的16例高间接胆红素血症患儿，分为Gilbert综合征(GS)、Crigler-Najjar综合征II型(CNS-II)及 UGT1A1基因突变无法解释的高间接胆红素血症组，比较其一般临床资料、基因突变位点信息的差别，并通过 t检验分析探讨基因突变谱与胆红素水平的关系。 结果:16例高间接胆红素血症的患者中，10例为GS，3例为CNS-II, 3例为 UGT1A1基因突变无法解释的高间接胆红素血症。共检测到6个变异类型，其中c.211G?>?A占37.5%(6/16)，c.1456T?>?G占62.5%(10/16), TATA占37.5% (6/16)；与GS相比，CNS发病较早，且血清总胆红素（ t ?=?5.539， P ??0.05)和发病年龄( t ?=?0.361， P ?>?0.05)差异无统计学意义。 UGT1A1基因变异的数量与血清胆红素水平之间无相关性，c.1456T?>?G纯合突变儿童的血清胆红素水平最高。 结论:儿童 UGT1A1基因常见致病变异依次为c.1456T?>?G、c.211G?>?A、TATA，说明这些位点突变与儿童高间接胆红素血症的发生相关，对于儿童高间接胆红素血症病因分析，具有重要指导意义。

目的:鉴定并筛选胆管癌差异性甲基化基因以预测胆管癌患者的预后。方法:选择2019年10月至2020年5月福建省立医院8例胆管癌患者胆管癌组织及癌旁组织进行850K甲基化测序分析，获取差异性甲基化基因。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中下载2018年36例患者胆管癌全基因组甲基化数据及临床信息，从基因表达综合（GEO）数据库下载2012年胆管癌甲基化数据（GSE32879），从GEPIA2数据库下载2018年TCGA数据库胆管癌总生存（OS）及无病生存（DFS）差异生存基因组数据。联合送检样本850K甲基化测序分析的差异甲基化位点（DMP）和差异甲基化区域（DMR）结果、TCGA和GEO数据库中甲基化基因以及胆管癌生存基因，在Sangerbox VENN工具中进行多数据集合分析，交集筛选得出共同差异性甲基化基因。在Sangerbox中运用最小 P值法确定基因表达的临界值，分为差异性甲基化基因高、低表达组，比较两组胆管癌患者OS、DFS、疾病特异性生存（DSS）、无病间隔（DFI）、无进展间隔（PFI）。进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。 结果:8例患者的胆管癌组织与癌旁组织850K甲基化测序共鉴定出121 954个DMP，DMR中共鉴定出差异性甲基化基因1 399个；交集鉴定得出共同预后相关基因氨基葡萄糖（N-乙酰）转移酶1（GCNT1）和神经营养受体酪氨酸激酶3（NTRK3）。GCNT1在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P=0.040）；NTRK3在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异无统计学意义（ P=0.790）。采用最小 P值法，以GCNT1及NTRK3联合表达情况预测胆管癌患者预后，按两基因表达量总和排序，以排序的30%为临界值时，胆管癌高表达组及低表达组间DFS差异最为显著（ P<0.001）；两组间OS差异无统计学意义（ P=0.065）。GO功能分析结果显示，GCNT1与蛋白质糖基化、大分子糖基化、糖化、糖蛋白生物合成过程、糖蛋白代谢过程、转移酶活性和转移糖基、蛋白质O-聚糖基化、O-聚糖加工等有关；NTRK3与神经营养素信号通路、Ras信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制、ErbB信号通路、磷脂酶D信号通路、癌症中枢碳代谢、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等有关。KEGG分析结果显示，GCNT1主要与黏蛋白型O-聚糖生物合成、代谢途径等系统功能相关联，NTRK3主要与细胞表面受体通路、细胞内信号转导、刺激反应的正向调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、酶联受体蛋白信号通路、MAPK信号通路级联及调节、蛋白质磷酸化信号转导等系统功能相关联。 结论:胆管癌差异性甲基化基因GCTNT1、NTRK3表达对胆管癌患者预后有一定预测作用。

人偏肺病毒(human metapneumovirus, hMPV)是导致婴儿、老年人和免疫缺陷患者急性下呼吸道感染的重要原因。微阵列数据的通路分析表明，影响hMPV感染呼吸道上皮细胞的20%基因与代谢有关。研究发现，在hMPV感染后，人呼吸道上皮细胞中糖酵解途径酶己糖激酶2、丙酮酸激酶M2和乳酸脱氢酶A的水平，以及属于己糖胺生物合成和糖基化途径的酶的水平均显著上调。另一方面，属于三羧酸循环的大多数酶的表达显著减少，己糖激酶2和糖基化酶O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的抑制导致hMPV滴度显著降低。研究表明hMPV感染引起的代谢变化在病毒生命周期中起主要作用，可作为潜在的抗病毒靶点。

目的:评估O-N-乙酰葡糖胺（O-N-acetyl-glucosamine, O-GlcNAc）糖基化修饰转移酶（O-GlcNAc transferase, OGT）介导的受体相互作用蛋白（receptor interacting protein kinase, RIPK) 3糖基化在七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌缺血再灌注（ischemia reperfusion, IR）损伤中的作用。方法:取Langendorff离体灌注模型制备成功的大鼠心脏45个，采用随机数字表法分为5组（每组9个）：假手术组（SHAM组）、IR组、七氟醚后处理组（SPC组）、SPC+溶剂组[SPC+二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide, DMSO）组]和SPC+OGT抑制剂组（SPC+OSMI-1组）。建模完成后各组均平稳30 min，之后SHAM组给予K-H液持续灌注150 min，其余各组大鼠心脏均经历停止灌注30 min后恢复灌注2 h的过程；SPC组、SPC+DMSO组和SPC+OSMI-1组均于再灌注初给予含2.4%七氟醚的K-H液持续灌注15 min；此外，在术前准备的K-H液中，SPC+DMSO组给予50 μmol/L DMSO, SPC+OSMI-1组给予50 μmol/L OSMI-1。连续监测各组大鼠缺血前即刻（T 0）、再灌注30 min (T 1）、再灌注60 min (T 2）、再灌注90 min (T 3）、再灌注2 h (T 4）的左室峰压（left ventricular peak pressure, LVSP）、左室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP）、心率、左室压力升高最大速率（maximum rate of rise of left ventricular pressure, +dp/dt max）与左室压力降低最大速率（maximum rate of drop of left ventricular pressure,-dp/dt max）；在再灌注末，采用1%氯化三苯基四氮唑 （triphenyl tetrazolium chloride, TTC）染色检测各组大鼠心肌梗死范围；采用ELISA法检测各组大鼠冠状动脉漏出液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）浓度；Western blot法检测各组大鼠心脏O-GlcNAc、OGT、O-糖基化糖苷酶（O-GlcNAcase, OGA）、磷酸化受体相互作用蛋白1 (phosphorylated RIPK1, p-RIPK1）、磷酸化RIPK3 (phosphorylated RIPK3, p-RIPK3）和磷酸化混合系激酶结构域样蛋白（phosphorylated mixed lineage kinase domain-like protein, p-MLKL）蛋白水平。 结果:与T 0比较，IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低（ P<0.05），LVEDP升高（ P<0.05）；与SHAM组比较，IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低（ P<0.05），LVEDP升高（ P<0.05）；与IR组比较，SPC组和SPC+DMSO组T 1~T 4时心率、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max升高（ P<0.05），LVEDP降低（ P<0.05）。与SHAM组比较：IR组、SPC组、SPC+DMSO组、SPC+OSMI-1组心肌梗死范围和LDH浓度增加（ P<0.05），OGT和OGA蛋白水平升高（ P<0.05），p-RIPK1蛋白水平升高（ P<0.05）；IR组、SPC组、SPC+DMSO组O-GlcNAc蛋白水平升高（ P<0.05）；IR组、SPC+OSMI-1组p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平升高（ P<0.05）。与IR组比较，SPC组、SPC+DMSO组心肌梗死范围和LDH浓度减少（ P<0.05），O-GlcNAc、OGT蛋白水平升高（ P<0.05），p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平降低（ P<0.05）。与SPC组比较，SPC+OSMI-1组心肌梗死范围和LDH浓度增加（ P<0.05），O-GlcNAc、OGT蛋白水平降低（ P<0.05），p-RIPK3、p-MLKL蛋白水平升高（ P<0.05）。 结论:七氟醚后处理可降低离体大鼠心肌IR损伤，其机制与激活OGT介导的RIPK3糖基化有关。

目的:结合应用加权基因共表达网络分析(WGCNA)和差异基因表达分析2种方法筛选结肠癌mRNA表达谱中的差异共表达基因，并分析差异共表达基因与预后的关系。方法:基于生物信息学方法从癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达综合(GEO)数据库分别下载TCGA结肠腺癌数据集的转录组学数据和GSE68468数据集的芯片表达谱数据，筛选出两者在正常组织与结肠癌组织之间的差异表达基因(DEG)和最显著相关的加权基因模块，通过差异基因和加权基因取交集筛选出结肠癌相关差异共表达基因。构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI )网络，利用最大派系中心度(MCC)计算方法筛选出MCC评分排名前10位的核心差异共表达基因，使用TCGA结肠腺癌数据集验证核心基因在正常组织和结肠癌组织中的表达，采用Kaplan-Meier生存分析探索核心基因与患者总生存期和无病生存期之间的关系。使用人类蛋白质图谱(HPA)数据库，对生存相关的差异共表达基因进行免疫组织化学染色验证。结果:TCGA结肠腺癌数据集中DEG共3 481个，GSE68468数据集中DEG共7 275个，共获得237个差异共表达基因。使用PPI网络的MCC计算方法得到10个核心的差异共表达基因，分别为氯离子通道附件1( CLCA1)、 MAPK3、胰高血糖素( GCG)、溶质载体家族26成员3( SLC26 A3)、核受体亚家族1组H成员4( NR1 H4)、脂肪酸结合蛋白1( FABP1)、鸟苷酸环化酶激活因子2A( GUCA2 A)、二磷酸尿苷葡糖醛酸糖基转移酶家族2成员A3( UGT2 A3)、肉碱棕榈酰转移酶2( CPT2)和跨膜4域A12( MS4 A12)。与正常组织相比，TCGA结肠腺癌数据集结肠癌组织的 CLCA1、 GCG、 SLC26 A3、 NR1 H4、 FABP1、 GUCA2 A、 UGT2 A3、 CPT2和 MS4 A12 9个核心基因均下调( P均<0.05)，其中 CLCA1高表达结肠癌患者的总生存期和无病生存期均长于低表达组( P均<0.05)，免疫组织化学染色结果在蛋白质水平也验证了结果的准确性。 结论:CLCA1可能在结肠癌的发展中起关键作用，可作为进一步诊断和治疗的潜在生物标志物。

目的:观察精子发生和中心粒相关1(SPATC1)在头颈鳞癌组织及细胞系中的表达，探寻可能的调控机制。方法:利用生物信息学技术筛选出SPATC1；用免疫组织化学和蛋白印迹实验分别检测SPATC1在头颈鳞癌组织及细胞中的表达，Kaplan-Meier法分析SPATC1在头颈鳞癌组织表达与患者预后的相关性；使用小干扰RNA(siRNA)下调SPATC1和氧连接乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)的表达，使用外源表达质粒上调SPATC1和OGT的表达，筛选构建稳定的细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和流式细胞术分析分别研究SPATC1和OGT表达水平变化对细胞增殖及凋亡的影响；成对资料采用Student’s t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用LSD- t检验)。使用Pearson相关系数评价OGT基因与SPATC1表达的相关性。 结果:HNSCC组织及细胞系中的SPTC1表达显著升高(组织0.809±0.438，细胞0.809±0.306， P<0.01)，SPATC1高表达组患者的总生存率明显低于SPATC1低表达组( χ2＝7.713， P<0.01)；细胞转染中，SPATC1表达上调导致细胞增殖明显增加(Fadu细胞和SCC154 F＝202.006， F＝230.678， P均<0.05；LSD- t检验 P均<0.05)，同时细胞凋亡减少(Fadu细胞和SCC154 F＝2855.197， F＝1130.925， P均<0.05)。而SPATC1下调导致相反的结果( P均<0.05)。OGT mRNA表达水平变化与肿瘤细胞SPATC1 mRNA及蛋白表达水平呈正相关(OGT mRNA与SPATC1 mRNA相关性：Fadu r＝0.742，SCC154 r＝0.645；OGT mRNA与SPATC1蛋白相关性：Fadu r＝0.790，SCC154 r＝0.687， P<0.05)。 结论:SPATC1在HNSCC中高表达，可以促进HNSCC肿瘤细胞增殖，减少其凋亡。SPATC1受O-GlcNAc糖基化修饰调控，与OGT关系密切。

目的:评价氧连氮-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)转移酶(OGT)在甲烷减轻大鼠脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤中的作用及其与Nrf2表达的关系。方法:原代培养的大鼠脊髓神经元，以1×10 5个/ml密度接种于6孔板，采用随机数字表法分为4组( n＝60)：对照组(C组)、氧糖缺失-复氧复糖组(OGD/R组)、甲烷组(M组)和甲烷＋OGT抑制剂四氧嘧啶组(MA组)。采用无糖-无血清Earle平衡盐液，在37 ℃、5%CO 2-95%N 2缺氧培养箱中孵育2 h，然后正常培养的方法制备脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤模型。M组于复氧复糖时在培养液中加入200 μl甲烷饱和生理盐水(甲烷终浓度1.8 mmol/L)；MA组于M组复氧复糖后10 min在培养液中加入8 mmol/L四氧嘧啶。复氧复糖12 h时，测定神经元存活率、LDH漏出率和凋亡率；采用染色质免疫沉淀和实时荧光定量PCR(qPCR)法检测Nrf2基因启动子区OGT和H3K4me3表达水平；提取核蛋白，采用免疫沉淀和Western blot法测定H3K4甲基转移酶复合物调节亚基RBBP5的O-GlcNAc糖基化水平；采用邻位连接法检测H3K4甲基转移酶复合物催化亚基MLL1与组蛋白H3空间邻近水平；采用Western blot和qPCR法测定Nrf2及其mRNA的表达；采用ELISA法测定上清液SOD、过氧化氢酶(CAT)活性和MDA浓度。 结果:与C组比较，OGD/R组和M组神经元存活率降低，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度升高( P<0.01)；与OGD/R组比较，M组神经元存活率升高，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度降低，Nrf2启动子区OGT和H3K4me3表达上调，RBBP5亚基O-GlcNAc糖基化、MLL1亚基与组蛋白H3空间邻近水平增高，Nrf2及其mRNA表达上调，上清液SOD和CAT活性升高( P<0.01)；与M组比较，MA组神经元存活率降低，LDH漏出率、凋亡率和上清液MDA浓度升高，Nrf2启动子区OGT和H3K4me3表达下调，RBBP5亚基O-GlcNAc糖基化、MLL1亚基与组蛋白H3空间邻近水平降低，Nrf2及其mRNA表达下调，SOD和CAT活性下降( P<0.05或0.01)。 结论:OGT参与了甲烷减轻大鼠脊髓神经元氧糖缺失-复氧复糖损伤的过程，与上调Nrf2表达有关。

目的:探讨β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶5(B3GNT5)对神经母细胞瘤(NB)细胞侵袭迁移的影响及作用机制。方法:利用公共数据库分析B3GNT5与NB患者高/低风险、MYCN扩增及预后的关系。收集武汉儿童医院普外科7例NB和2例节神经细胞瘤组织标本，采用免疫组织化学、实时定量荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测组织和NB细胞系中B3GNT5的表达。构建B3GNT5干扰和过表达的SK-N-BE和SH-SY-5Y细胞系，Transwell检测对细胞迁移侵袭的影响，Western blot检测转移相关蛋白。应用质谱技术、免疫共沉淀、靶基因干扰实验探讨潜在分子机制。两组间比较采用 t检验。 结果:数据库分析显示B3GNT5表达与NB患儿总体生存率和无事件生存率呈负相关[风险比( HR)＝13.480、3.900， P<0.01]；高危组和MYCN扩增组中的表达显著高于低危组和MYCN非扩增组(10.040±1.206比9.206±0.893、10.960±0.705比9.166±0.933， t＝8.816、14.900， P<0.01)。B3GNT5干扰组SK-N-BE细胞迁移(78.980±6.591)和侵袭(39.830±7.310)的数量低于对照组(131.000±6.607、72.000±6.117， t＝23.720、14.320， P<0.01)。B3GNT5与膜联蛋白A2结合，B3GNT5干扰组膜联蛋白A2糖基化水平低于对照组(0.217±0.076比0.470±0.071， t＝4.192， P<0.05)。干扰膜联蛋白A2，B3GNT5过表达的SK-N-BE细胞迁移(91.780±6.873)和侵袭(99.110±7.435)的数量低于对照组(188.900±7.727、197.200±8.363， t＝39.860、36.730， P<0.01)。 结论:B3GNT5靶向促进膜联蛋白A2糖基化修饰介导NB细胞侵袭迁移。

目的:研究UDP-葡萄糖醛酸糖基转移酶（UGT）家族成员UGT2A3的差异表达在结直肠癌（CRC）发生中的作用及调控机制。方法:从高通量基因表达（GEO）数据库和癌症基因组图集（TCGA）中共下载了9个CRC数据集。采用R语言分析UGT2A3在CRC组织和癌旁正常组织中的差异表达情况。在TCGA中根据UGT2A3的表达水平，在所有样本、正常组织、癌组织样本中分别选取表达最高和最低的前20例样本，比较免疫细胞丰度和免疫富集评分；筛选差异表达基因和差异表达miRNA，并进行差异表达基因的通路富集分析。结果:UGT2A3在所有9个数据集的CRC组织中均明显下调。与UGT2A3高表达组相比，UGT2A3低表达组的ImmuneScore、EstimateScore和StromalScore得分明显较高，且免疫细胞丰度较高（记忆B细胞除外）。在正常组织中，UGT2A3的差异表达主要影响癌症相关通路，而在CRC组织中主要影响代谢途径。miR-194-2、miR-224和miR-551b在所有分组中均显著差异表达，其被认为是CRC中潜在的UGT2A3上游调控基因。结论:UGT2A3、miR-194-2、miR-224和miR-551b可作为CRC潜在的诊断生物标志物。