目的:探讨同型半胱氨酸（Hcy）代谢酶基因多态性与汉族多发性骨髓瘤（MM）预后不良的关系。方法:选取河北北方学院附属第一医院2018年2月至2020年3月收治的128例汉族MM患者（疾病组）和同期招募的120例汉族健康志愿者（对照组）为研究对象，两组均检测血浆Hcy水平及Hcy代谢酶基因多态性，包括亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T、MTHFR A1298C、蛋氨酸合成酶还原酶（MTRR）A66G、胱硫醚β合成酶（CBS） 844ins68、蛋氨酸合成酶（MS）A2756G。疾病组采用常规方法治疗，于治疗后跟踪随访1年并统计预后不良的发生情况，采用Logistic多元回归分析Hcy代谢酶基因多态性与疾病组预后不良的关系。结果:疾病组血浆Hcy水平高于对照组[（15.01 ± 2.98）μmol/L比（8.45 ± 1.69）μmol/L]，差异有统计学意义（ P<0.05）。疾病MTHFR C677T位点TT基因型频率和T等位基因频率分别为26.56%、29.30%，高于对照组的6.67%、16.25%，CT基因型频率为5.47%，低于对照组的19.17%，差异均有统计学意义（ P<0.05）。两组其余基因位点基因型分布和等位基因频率比较差异均无统计学意义（ P>0.05）。疾病组预后不良的发生率为49.22%（63/128），年龄、血小板计数和血清β 2微球蛋白、κ轻链、血浆Hcy水平及MTHFR C677T位点TT基因型均是疾病组预后不良的影响因素（ OR=7.286、0.545、6.841、6.284、8.117、8.440， P<0.05）。 结论:汉族MM患者血浆Hcy水平、MTHFR C677T位点TT基因型频率和T等位基因频率均高于健康人群，CT基因型频率低于健康人群，且汉族MM患者预后不良与血浆Hcy水平、MTHFR C677T位点TT基因型有关。

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T、A1298C及蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G基因多态性在男性无精子症患者中的分布情况.方法 选取于2020年1月至2023年8月就诊于新疆佳音医院不孕不育门诊的97名无精子症患者,所有患者进行睾丸组织活检并基因测序MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G基因的多态性.按照手术中是否找到精子将患者分为有精子组(n=70)和无精子组(n=27),比较两组患者的基本资料以及MTHFR C677T、A1298C及MTRRA66G基因型多态性的频率及等位基因频率分布.结果 两组患者间年龄、体质量指数(BMI)以及是否伴随精索静脉曲张的差异均无统计学意义(P＞0.05).MTHFR C677T包括CC、CT、TT三个基因型及C、T两个等位基因,A1298C包括AA、AC、CC三个基因型及A、C等位基因;MTRR A66G包括AA、AG、GG三个基因型,A、G两个等位基因.有精子组和无精子组患者的MTHFR基因677位点TT基因型频率分别为18.6％、18.5％,T等位基因频率分别为42.1％、40.7％;MTHFR基因1298位点CT基因型频率分别为4.3％、3.7％,C等位基因频率分别为20.7％、18.5％;MTRR基因66位点GG基因型频率分别为9.2％、8.0％,G等位基因频率分别为34.6％、40.0％;两组患者间MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G的基因型频率和等位基因频率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G基因多态性在无精子症患者中的分布无显著变化,MTHFR基因和MTRR基因的多态性对睾丸内是否能找到精子也无显著影响.

探讨二陈汤预防非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠的作用效果,并初步探究其可能机制,为二陈汤在临床上用于预防NASH提供科学数据.将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤低剂量组(ECD_L,6 g·kg-1)、二陈汤中剂量组(ECD_M,12 g·kg-1)、二陈汤高剂量组(ECD_H,24 g·kg-1),每组8只.正常组以蛋氨酸-胆碱补充(methionine and choline supplement,MCS)饲料饲养,其余各组均以蛋氨酸-胆碱缺乏(methionine and choline deficient,MCD)饲料饲养.各组动物均给予相应的饮食喂养,但药物干预组在MCD饲料喂养的基础上,分别给予低、中、高剂量的二陈汤(10 mL·kg-1·d-1)灌胃,连续6周,整个实验过程中小鼠可自由进食、饮水.给药结束后对其禁食不禁水12 h,使用20％乌拉坦腹腔注射麻醉小鼠,收集小鼠心脏血液和肝组织.血清用于检测谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransaminase,AST)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)的水平;肝脏组织分别用于苏木素-伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色检测肝脏病理变化,实时定量反转录 PCR(real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)分别用于检测核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)通路相关基因和蛋白的表达水平.结果显示,与正常组比较,模型组小鼠血清ALT、AST水平均显著升高;小鼠肝组织存在大量的脂肪空泡和明显的炎症细胞浸润;血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高,IL-10水平显著降低;肝组织脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、IL-1β mRNA 表达均显著上调,GPX4、Nrf2、NAD(P)H 醌氧化还原酶[NAD(P)H:quinine oxidoreductase,NQO1]mRNA表达均显著下调.与模型组比较,ECD_M组和ECD_H组小鼠血清ALT、AST水平显著降低,ECD_L组AST水平显著降低;肝组织脂肪空泡数量及炎性细胞浸润程度均有不同程度改善;血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低,IL-10水平仅ECD_H组显著升高;肝组织FASN、MCP-1、IL-1β mRNA表达均显著下调,GPX4、NQO1 mRNA表达均显著上调,ECD_M组、ECD_H组Nrf2 mRNA表达显著上调.Western blot结果显示,与模型组相比,各给药组Nrf2、GPX4蛋白表达水平显著升高,FASN蛋白表达水平显著降低;ECD_M组和ECD_H组NQO1蛋白表达水平显著升高.综上所述,二陈汤可减少NASH小鼠肝脏脂质堆积和氧化应激,肝脏炎症和肝损伤,其机制可能与激活Nrf2/GPX4通路有关.

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs+/-小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关.微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义.目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs+/-小鼠肝细胞自噬中的关键作用.方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs+/+)小鼠和单基因敲除(Cbs+/-)小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织.②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0 μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100 μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100 μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100 μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100 μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100 μmol/L同型半胱氨酸).采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性.结果与结论:①与Cbs+/+组比较,Cbs+/-组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.887 6)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.829 9)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤.

目的 主要探讨硒代蛋氨酸(SeMet)对 HCT116 结肠癌细胞凋亡、粘附、侵袭的影响及机制.方法 不同剂量(1.56,3.13,6.25,12.5,25,50,100 μmol/L)SeMet处理 HCT116 细胞 48h,每组 6 个复孔,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验测定半抑制率(IC50).接着细胞随机分为对照组及SeMet组,处理细胞 48h,每组 6 个复孔,Hoechst染色检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭情况;细胞粘附实验检测细胞粘附情况;Western blot实验检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、E-cadherin、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)蛋白含量及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的激活情况.结果 SeMet孵育HCT116 细胞IC50 为 17.07 μmol/L.SeMet组较对照组细胞凋亡率升高,细胞粘附、侵袭数目减少,Bcl-2、MMP-2、MMP-9、ICAM-1 及PI3K蛋白表达量降低,GSK-3β及AKT磷酸化水平降低,Bax及E-cadherin蛋白表达量升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 SeMet能诱导HCT116 细胞凋亡并抑制细胞粘附及侵袭,可能是通过抑制GSK-3 β/PI3K/AKT信号通路实现的.[营养学报,2023,45(5):436-440]

为探究人类肝细胞癌细胞的放疗敏感性与谷氨酰胺合成酶(GS)和自噬之间的关系.HepG2 细胞经X射线照射后,采用CCK-8、克隆集落形成实验来测量细胞经GS抑制剂(L-蛋氨酸亚磺酰亚胺,MSO)作用后的增殖能力.实时荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹实验(Western Blot,WB)用于检测MSO对GS表达的影响,GS活力检测试剂盒用于检测MSO对GS的活力抑制效率.单丹磺酰尸胺(MDC)染色以及WB实验技术用于检测细胞内的自噬情况,以确定IR及MSO对自噬的影响.结果表明,MSO引起细胞内GS表达增加,但是GS的活力被其显著抑制.此外,MSO可以降低放疗后细胞的增殖能力,并且抑制放疗诱导的自噬.结果表明MSO可通过抑制GS活力提高HepG2 细胞的放疗敏感性,这与其对自噬流的调节密切相关.

目的 探讨育龄期女性亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、蛋氨酸合成酶(MS)基因多态性与不良妊娠及子代出生缺陷的关系.方法 选取2014年9月至2016年9月本院收治的200例有不良妊娠结局病史妇女为研究对象,其中子代出生缺陷者52例,同期选取127例体检健康正常育龄期妇女作为对照,采集所有受试者外周血并提取DNA,利用限制性内切酶片段长度多态性PCR(PCR-RFLP)技术检测分析MTHFR、MS基因多态性,分析MTHFR基因C677T、A1298C多态性位点及MS基因A2756G多态性位点与不良妊娠及子代出生缺陷之间的关系.结果 不良妊娠组、出生缺陷组MTHFR C677T位点C/C型基因频率、C等位基因频率明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),C/T、T/T基因型频率及T等位基因频率明显高于对照组(P＜0.05);不良妊娠组、出生缺陷组MTHFR A1298C位点A/A型基因频率、A等位基因频率明显低于对照组(P＜0.05),A/C、C/C基因型频率及C等位基因频率明显高于对照组(P＜0.05);不良妊娠组、出生缺陷组CC/AA、CC/AC基因型频率明显低于对照组(P＜0.05),CT/AA、CT/CC、TT/AA、TT/AC基因型频率明显高于对照组(P＜0.05);不良妊娠组、出生缺陷组与对照组MS基因A2756G位点等位基因频率及基因型频率分布比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 叶酸代谢酶MTHFR基因多态性与不良妊娠及子代出生缺陷关系密切,MS基因多态性与不良妊娠及子代出生缺陷无关.

在过去的70年里,叶酸拮抗剂对恶性肿瘤、微生物和寄生虫的感染、慢性炎症等疾病的治疗起到了举足轻重的作用.具有更好性质和活性的新型叶酸拮抗剂的发现仍然吸引着学术界和工业界的广泛关注.蛋氨酸合成酶作为叶酸代谢的关键酶,其对维持人体内的叶酸平衡具有重要作用.如果蛋氨酸合成酶的活性受到抑制,就会从源头阻断叶酸循环杀死细胞.因此蛋氨酸合成酶可以作为潜在的抗肿瘤药物的靶点.本文对蛋氨酸合成酶抑制剂的研究进行综述.

目的 研究槲皮素对高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠甲基代谢相关酶活性的影响.方法 48只Wistar大鼠,按照血清Hcy水平将动物分成4组,分别为对照组(AIN-93饲料)、1％蛋氨酸组(1％ Met)、0.5％槲皮素组(0.5％Q)、1％蛋氨酸±0.5％槲皮素组(1％ Met±0.5％ Q),每组12只,雌雄各半,单笼饲养.用相应饲料喂养6周后,乙醚麻醉,球后静脉丛采血,离心取血清,处死后取肝脏.检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、S-腺苷蛋氨酸(SAM)、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)、血清和肝脏槲皮素及其甲基化产物含量以及肝脏儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、蛋氨酸合成酶(MS)、5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)、二氢叶酸还原酶(DHFR)活性.采用RT-PCR法检测肝脏COMT mRNA的表达情况.结果 1％ Met组血清Hcy水平显著升高;0.5％Q组血清SAM水平显著升高,肝脏COMT活性和mRNA表达显著降低;1％ Met±0.5％Q组血清Hcy水平与对照组无统计学差异,MS、MTHFR和SHMT活性显著增强.结论 槲皮素可增强HHcy大鼠肝脏MTHFR和SHMT的活性,这可能是槲皮素降低Hcy的重要靶点.

目的 研究5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T和A1298C位点,蛋氨酸合成酶(MS) A2756G位点,以及蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G位点的单核苷酸多态性(SNPs)和先天性心脏病(CHD)的关联.方法 采用病例-对照研究,限制相应条件于2016年1月-2017年4月在河北省儿童医院心脏外科收集了200名CHD患儿作为病例组,200名正常体检儿童作为对照组.通过聚合酶链式反应(PCR)后Sanger测序的分析方法检测两组儿童的MTHFR C677T和A1298C位点、MS A2756G位点以及MTRR A66G位点的基因型及其分布,分析上述4个SNP位点与整体CHD和单一以及多发畸形型CHD发病风险之间的关系.结果 MTHFRC677T位点等位基因T携带者相对于等位基因C携带者发生CHD的OR=2.47(95％ CI1.86～3.29,P＜0.001).与纯合子CC型比较,杂合子CT个体患CHD的OR =2.32(95％ CIl.35～3.98,P＜0.05),而突变型纯合子TT个体患CHD的风险是CC个体的5.37倍(95％ CI3.01 ～9.60,P＜0.001);MTHFR A1298C位点等位基因C携带者相比于等位基因A携带者发生CHD的OR=0.53(95％ CI0.36～0.77,P＜0.05).杂合子AC个体患病风险低于野生型纯合子AA个体(OR =0.41,95％ CI0.26～ 0.64,P＜0.001);在分类后的单一及多发畸形型CHD中,以上两个位点的等位基因频率及基因型频率依然具有统计学意义(P＜0.05).以上两位点的组合基因型分析显示:相比于携带双野生型CC/AA的个体,携带CT/AA个体的患病风险增加到了4.65倍(95％CI2.16～10.02),TT/AA型个体增加到了7.05倍(95％ CI3.37 ～ 14.79).统计结果表明MS A2756G和MTRR A66G位点对整体CHD以及对分类后的单一及多发畸形型CHD的发生均无影响(P＞0.05).结论 MTHFR C677T位点的突变型等位基因T可能为CHD的危险因素,A1298C位点的突变型等位基因C可能是CHD的保护因素,这两个位点对CHD的发生可能存在联合作用.