磁分离是从生物样本中富集特定目标物的常用方法.传统特异性磁分离方法一般通过将抗体与磁珠偶联获得免疫磁珠的方式用于特定目标物的捕获,但由于抗体有成本高、捕获目标物后不易释放等缺点,免疫磁珠难以满足众多研究领域对同时满足目标物大批量、高特异性富集的需求.核酸适配体同抗体一样具备目标物高特异性捕获的能力,相较抗体具有制备成本低、结构简单和化学稳定性高等优点,更适合用来大批量、高特异性富集特定目标物,因此在本研究中,本文利用石墨烯对单链和双链核酸的吸附能力不同的特性,以CD63适配体为例设计了一套可以将适配体展示于石墨烯表面并用于捕获、富集和释放目标物的方法.该设计主要包括2个单元,一是可以贴附于石墨烯表面并将CD63适配体展示于石墨烯外的双链寡核苷酸支架,二是采用与支架足部序列互补的单链寡核苷酸,将所捕获的目标物从石墨烯表面解吸附.本研究首先以氧化石墨烯(GO)纸为石墨烯界面,通过对支架或CD63蛋白等进行荧光标记,并对比支架释放前后及CD63蛋白捕获前后GO纸表面荧光强度变化表示其支架释放效果与CD63蛋白捕释情况,随后应用氨基修饰的石墨烯壳铁氮磁珠搭载CD63适配体双链支架,用于捕获细胞裂解液中CD63蛋白.结果表明,该支架可以将适配体展示于石墨烯表面捕获CD63蛋白并可以可控释放,使用挑选的改性石墨烯磁珠搭载该适配体双链支架,可以用于细胞裂解液中CD63蛋白的捕获.该方法有望实现多种蛋白质的特异性富集或通过捕获外泌体膜蛋白而富集外泌体等多种用途.

肝移植围手术期患者因肝脏代谢功能障碍，导致机体糖、蛋白质、脂肪等代谢紊乱进而引起的营养不良成为终末期肝病患者最常见并发症。营养支持是肝移植全过程中的重要内容，围手术期营养支持可改善患者术前营养状况，增加肝移植机会，降低术后病死率及改善预后。笔者回顾近期肝移植围手术期营养支持的干预措施，分析营养筛查和营养评估工具及其优缺点，强调早期营养状况的正确评估，给予合理、个性化肠内肠外营养支持方案，尤其对能量、蛋白质等营养素的需求，以及术后长期合理的营养支持、监测和饮食营养健康教育等的重要性，以期为改善肝移植患者的营养状况提供参考和建议，为构建标准化的肝移植围手术期营养支持方案提供循证依据。

目的:了解母乳库中捐赠母乳宏观营养素的含量及其影响因素。方法:采用便利抽样法，选取2016年6月—2018年6月上海地区母乳库中458名首次母乳捐赠者及其所捐赠的母乳为研究对象，测定捐赠母乳中的宏观营养素含量；采用多重线性回归分析捐赠母乳宏观营养素含量的影响因素。结果:458份捐赠母乳的宏观含量营养素中，蛋白质含量为（0.95±0.24）g/dl，脂肪含量为（4.03±1.25）g/dl，糖类含量为（7.44±0.38）g/dl，干物质为（12.75±3.16）g/dl，能量含量为（71.12±11.33）kcal/dl。多重线性回归分析结果显示，捐乳时间、婴儿性别是捐赠母乳中蛋白质含量的影响因素（ P<0.05）；捐乳时间、分娩方式、婴儿出生季节是捐赠母乳中糖类含量的影响因素（ P<0.05）；捐乳时间是捐赠母乳中能量含量的影响因素（ P<0.05）。 结论:本研究捐赠母乳中宏观营养素各成分含量均低于早产儿对宏观营养素的需求；捐赠母乳宏观营养素成分个体差异性较大，与乳母的捐乳时间、分娩方式及婴儿的性别、出生季节等相关。因此后期如何在捐赠母乳中添加母乳添加剂，进行目标性强化，以满足早产儿的生长发育需求，需要进一步研究。

味觉是人类重要感官，由增龄变化、舌癌手术、放化疗等引起的味觉功能障碍可影响人生活质量，味蕾再生需求逐渐得到关注。目前，关于味觉细胞发育及更新的基础研究为味蕾再生提供了理论基础；了解味蕾再生的分子机制有助于获悉准确的作用靶点；神经再生、组织工程、细胞因子疗法等新方法试图实现味蕾的功能性再生并加速其临床转化。本文围绕舌上皮味蕾再生机制及最新的组织工程学方法进行综述，以期为味觉损伤疾病的预防和治疗提供参考，为味蕾再生提供依据。

目的:探讨1例癫痫患者的遗传学病因，并为其提供遗传咨询。方法:选取2020年11月11日因有生育需求来山东大学附属生殖医院就诊的1例癫痫患者作为研究对象，收集患者的病史，通过全外显子组测序(WES)筛选候选变异，并进行Sanger测序验证。通过反转录-PCR及Sanger测序确定候选变异的致病性。结果:患者为35岁女性，发病时无发热，意识丧失且颞叶出现异常放电，以抽搐、昏厥为主。WES检测显示其 SCN9A基因存在c.2841+5G>A杂合变异，Sanger测序验证该位点。cDNA序列分析表明该变异导致 SCN9A基因第16和17外显子之间插入了154个碱基，导致蛋白质翻译提前终止，产生截短蛋白，影响SCN9A蛋白的正常功能。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关指南，判定为可能致病性变异(PVS1_Strong+PM2_Supporting)。 结论:SCN9A基因c.2841+5G>A变异可能是患者的遗传学病因。上述发现丰富了 SCN9A基因的变异谱，同时为患者的产前诊断和胚胎植入前遗传学检测奠定了基础。

细胞外囊泡(EVs)是一类由细胞旁分泌产生的亚细胞成分，能够向靶细胞递送蛋白质、核酸、脂质等多种生物活性分子来介导细胞间信号交流，调控靶细胞的生物学行为并使其发生相应的功能和表型改变，在生物医学领域具有巨大的潜在价值。然而非肿瘤细胞的EVs自然分泌量极低，难以达到临床的治疗剂量需求，并且随着供体细胞的衰老，EVs的分泌量急剧下降，其内容物的生物学功能也会发生难以控制的变化。因此，提高EVs分泌量并精确调控其生物学功能对于EVs在临床的应用推广具有重要意义。本文简要概述了细胞外囊泡的结构和形成过程，并对目前影响供体细胞生物学行为，促进EVs生成并强化所需生物学功能的方法及应用进行了详细阐述，望有助于给提高EVs的提取效率及EVs疗法在临床的应用推广提供新思路。

铜是一种重要的微量元素，参与氧化还原反应、铁氧代谢、结缔组织和神经肽的合成以及细胞信号转导等生理过程 [1]。心脏组织对铜的需求高于其他组织，铜离子稳态对于维持心肌收缩、激素合成、氧化应激保护等是必需的 [2]。铜离子稳态的失衡，无论是缺乏还是过量，都会损害心脏功能。铜离子缺乏会引起心肌细胞退化、坏死、纤维化，以及毛细血管基底层的碎片化和肌原纤维的排列紊乱，增加肥厚型心肌病和心力衰竭的发病风险 [3]。过量的铜离子会导致线粒体损伤、氧化应激、蛋白质功能障碍，激活一种特殊的细胞死亡途径，即铜死亡 [4]，增加心肌缺血再灌注损伤、心肌梗塞和心律失常发生的风险 [5]。本文综述了心血管系统中铜稳态和铜死亡的分子调节机制，以及其在心肌缺血、动脉粥样硬化、心力衰竭和肥厚型心肌病中的作用，并讨论了针对铜稳态失衡和铜死亡的潜在治疗靶点和策略，为心血管疾病的防治提供新的视角。

目的:通过蛋白重组技术低成本、快速制备高浓度人视黄醇结合蛋白4（hRBP4）参考物质，解决临床hRBP4高值参考物质难以获取的需求。方法:在美国国立生物技术信息中心NCB查找hRBP4的互补DNA序列，经大肠埃希菌密码子优化后人工合成，然后将DNA片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，以构建重组hRBP4表达载体。将重组质粒转化至 E. coli BL21感受肽中，优化诱导表达条件（如温度、转速和异丙基硫代半乳糖苷IPTG浓度等）、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化，获取纯化后的hRBP4重组蛋白。 结果:DNAMAN软件对比显示编码hRBP4蛋白的碱基序列完全正确，成功构建重组hRBP4原核表达质粒；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示亲和纯化产物中可清晰可见约相对分子质量26 000电泳条带；临床尿液和血清hRBP4常规检测系统均可检测到纯化的hRBP4蛋白，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系。结论:成功构建重组hRBP4高水平表达系统，重组hRBP4蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望在室间质量评价质控品和有证参考物质研制中发挥重要作用。

目的:探讨福瑞替尼对三阴性乳腺癌血管生成、肿瘤生长及跨膜蛋白肌醇需求酶1（IRE1）-细胞凋亡信号调节激酶1（ASK1）-c-Jun氨基端激酶（JNK）通路的影响。方法:取三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231，将其分为生理盐水（NS）组、低剂量福瑞替尼（LD）组、中剂量福瑞替尼（MD）组、高剂量福瑞替尼（HD）组，NS组加入100 μmol/L的生理盐水，LD组、MD组、HD组分别加入25、50、100 μmol/L的福瑞替尼。MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，细胞三维培养观察细胞形成拟态血管能力，蛋白质印迹法检测血管生成及IRE1-ASK1-JNK通路相关指标。将20只三阴性乳腺癌大鼠模型采用随机数字表法分为对照组、实验组，每组10只，对照组给予生理盐水灌胃，实验组给予100 μmol/L福瑞替尼灌胃，观察并记录两组大鼠肿瘤瘤体生长情况。结果:NS组、LD组、MD组、HD组的48 h细胞增殖率分别为（85.44±5.58）%、（73.24±4.95）%、（61.53±4.07）%、（50.23±2.97）%（ F=4.01， P=0.002），与NS组相比，LD组、MD组、HD组细胞增殖率显著降低，且呈剂量依赖性（均 P<0.05）；NS组、LD组、MD组、HD组的细胞凋亡率分别为（3.41±0.39）%、（18.75±1.94）%、（24.97±2.58）%、（38.62±3.27）%（ F=18.99， P<0.001），与NS组相比，LD组、MD组、HD组细胞凋亡率显著升高，且呈剂量依赖性（均 P<0.05）；NS组、LD组、MD组、HD组的拟态血管数目分别为19.58±2.11、15.67±2.02、11.57±1.73、5.20±1.23（ F=3.28， P=0.008），与NS组相比，LD组、MD组、HD组拟态血管数目显著降低，且呈剂量依赖性（均 P<0.05）；NS组、LD组、MD组、HD组的血管内皮生长因子（VEGF）蛋白相对表达量分别为2.36±0.21、1.79±0.17、1.48±0.14、0.94±0.10（ F=5.17， P<0.001），IRE1蛋白相对表达量分别为1.18±0.12、1.67±0.18、2.03±0.24、2.39±0.28（ F=5.55， P<0.001），ASK1蛋白相对表达量分别为1.09±0.11、1.46±0.13、1.81±0.18、2.33±0.21（ F=5.32， P<0.001），JNK蛋白表达分别为1.01±0.09、1.48±0.14、1.86±0.21、2.28±0.24（ F=6.92， P<0.001），与NS组相比，LD组、MD组、HD组细胞VEGF蛋白表达显著降低，IRE1、ASK1、JNK蛋白表达显著升高，且呈剂量依赖性（均 P<0.05）；与对照组相比，实验组瘤体质量、体积明显降低[（0.55±0.10）g比（1.37±0.15）g， t=14.38， P<0.001；（77.39±3.21）mm 3比（118.26±5.34）mm 3， t=20.74， P<0.001]，抑瘤率显著升高[（71.23±3.85）%比（32.56±3.08）%， t=24.80， P<0.001]。 结论:福瑞替尼对三阴性乳腺癌细胞活性具有抑制作用，可显著减少其血管生成，抑制肿瘤生长，可能与激活IRE1-ASK1-JNK通路相关。

目的:通过机器学习方法建立模型探讨胰腺及上消化道肿瘤手术精细化营养支持的策略。方法:回顾性分析2016年12月至2018年5月间北京协和医院基本外科120例行胰腺及上消化道肿瘤手术患者的临床资料。纳入患者年龄、身高、体重、体温、脉搏、呼吸频率、血红蛋白、白蛋白、血糖、能量摄入、蛋白质摄入等11项临床指标，以术后有无并发症为结局，采用支持向量机（SVM）交叉验证方法分别建立患者术后1、2、3 d并发症预测模型，绘制受试者工作特征曲线（ROC），计算曲线下面积（AUC）。纳入除蛋白质和能量摄入之外的9个变量进行SVM的逆运算，获取并发症发生率最低时的最适能量和蛋白质摄入区间。对其中50例患者的血清样品进行核磁共振氢谱（1H-NMR）波谱检测。运用偏最小二乘判别分析法（PLS-DA）获取患者术前1 d与术后1 d、术后1 d与术后3 d体内代谢物的变化，从人代谢组数据库（HMDB）获取相应的代谢物及代谢通路。结果:89例患者中52例术后发生并发症，无并发症组和并发症组患者各临床指标的差异均无统计学意义。患者术后1、2、3 d SVM并发症预测模型的AUC值分别为0.80、0.65和0.72，最适能量区间分别为20.7~41.5、103.7~124.4、112.0~132.7 kJ·kg -1·d -1，最适蛋白质区间分别为0.2~0.5、0.5~1.0、0.8~1.1 g·kg -1·d -1。基于1H-NMR代谢组学的PLS-DA模型得分图显示手术前后不同时间血液代谢产物出现显著变化。PLS-DA权重图离群值及HMDB筛选分析显示，术后1 d主要表现为糖异生增加，术后3 d主要表现为蛋白质分解增加。 结论:通过机器学习建模有助于获取胰腺及上消化道肿瘤手术后不同时点患者的最佳能量与蛋白质需求量区间，以此为依据可为适宜的个体化营养治疗提供方法学保证。