目的 探讨siRNA沉默DJ-1基因体内外对人胃癌MGC803细胞的影响机制.方法 构建沉默DJ-1基因MGC803细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆、细胞划痕和侵袭实验检测沉默DJ-1基因对MGC803细胞增殖、克隆形成、迁移与侵袭的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测DJ-1、PTEN、Akt、p-Akt、Snail、Vimentin、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)的表达;相差显微镜观察DJ-1沉默对MGC803细胞形态学的影响;裸鼠实验检测DJ-1沉默对MGC803细胞移植瘤的影响.结果 分别用4组si-DJ-1及si-NC质粒转染MGC803细胞,其中si-DJ-1A组DJ-1 mRNA与蛋白表达下调较为显著(P＜0.001),则后续选用si-DJ-1A作为稳定沉默DJ-1基因MGC803细胞.MTT法检测结果显示,24、48和72 h后,si-DJ-1组增殖活性分别较MGC803对照组和si-NC组降低,均P＜0.001.克隆形成实验显示,si-DJ-1组克隆形成数较对照组与si-NC组减少,P＜0.001.划痕实验结果显示,si-DJ-1组迁移距离[(199.21±14.74)μm]较对照组[(302.62±17.70)μm]和si-NC组[(304.49+13.55)μm]缩短,P＜0.001.侵袭实验显示,si-DJ-1组侵袭细胞数[(44.80±5.10)个]较对照组[(83.80±5.80)个]和 si-NC 组[(82.80±5.80)个]减少,P＜0.001.与对照组和 si-NC 组相比,si-DJ-1 组 DJ-1 mRNA(F=18.350,P=0.003)、Snail mRNA(F=26.320,P＜0.001)、Vimentin mRNA(F=44.379,P＜0.001)与 MMP-9 mRNA(F=57.450,P＜0.001)下调,而 E-cadherin mRNA(F=94.529,P＜0.001)与 TIMP3 mRNA(F=16.480,P=0.004)上调;si-DJ-1 组 DJ-1(F=6.393,P=0.004)、p-Akt(F=12.980,P=0.007)、Snail(F=381.000,P＜0.001)、Vimentin(F=99.750,P＜0.001)与 MMP-9(F=126.800,P＜0.001)蛋白下调,而 PTEN(F=36.880,P＜0.001)、E-cadherin(F=181.000,P＜0.001)与TIMP3(F=217.800,P＜0.001)上调.相差显微镜显示,si-DJ-1组纤维母细胞样长梭形细胞肿瘤干细胞减少,圆形与椭圆形细胞增多,异型性下降.体内实验表明,si-DJ-1组移植瘤生长速度较对照组减慢,si-DJ-1 组移植瘤质量[(0.51±0.05)g]较对照组[(0.90±0.16)g]减小,t=5.273,P＜0.001.si-DJ-1 组较对照组 DJ-1、Ki-67、Vimentin和CD-34阳性表达降低,而PTEN和E-cadherin表达增强.结论 DJ-1沉默可通过PTEN/Akt通路体内外抑制MGC803细胞增殖、迁移、侵袭与上皮细胞-间充质转化.

目的:考察蛋白DJ-1(DJ-1)/稳定核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)在精索静脉曲张相关性弱精症患者生精细胞氧化应激中的表达及意义.方法:收集本院2021年12月—2023年12月收治的120例确诊为精索静脉曲张相关性弱精症的男性患者临床资料,60例为新诊断患者纳入新诊断病例组,60例为接受维生素C联合维生素E治疗3个月的患者纳入病例治疗组;同期婚前健康检查健康男性40例为对照组.检测3组精液生精细胞形态、精液生精细胞的DJ-1、Nrf2蛋白及mRNA,外周血氧化应激[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)]、DJ-1、Nrf2.结果:3组年龄、体质指数、精液体积及精子尾部畸形率均无差异(P＞0.05);对照组、病例治疗组、新诊断病例组精子正常形态依次降低,精子头畸形率、体畸形率、头体环合畸形率依次增高,生精细胞DJ-1(0.35±0.11、0.71±0.16、0.89±0.12)、Nrf2 蛋白(0.31±0.09、0.62±0.14、0.78±0.13)及 mRNA 均依次增高,血清 MDA、DJ-1、Nrf2依次增高,SOD、GSH-Px依次降低(均P＜0.05).结论:激活DJ-1/Nrf2通路有助于增强精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞的抗氧化能力,保护细胞免受由氧化应激引起的损伤,DJ-1/Nrf2通路或是精索静脉曲张相关性弱精症的治疗的潜在分子靶点.

目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞HTB-182中的表达，采用串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术寻找DJ-1在HTB-182细胞系中的相互作用蛋白。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体，感染HTB-182细胞(DJ-1 siRNA组)，并设立慢病毒载体对照组(Control siRNA组)及空白对照组，采用Western blot法检测DJ-1蛋白表达水平，建立内源性的DJ-1蛋白表达沉默的si-DJ-1-HTB-182细胞。设计DJ-1的特异性引物，构建带有链霉素结合肽标签(SBP)、钙调蛋白结合肽标签(CBP)的DJ-1表达质粒pNTAP-DJ-1，用脂质体稳定转染细胞系DJ-1 siRNA HTB-182，G418筛选阳性克隆，Western blot进行验证，TAP-MS技术寻找DJ-1的相互作用蛋白。结果:DJ-1 siRNA干扰组中DJ-1的蛋白质表达明显低于空质粒(NC)组和空白对照(BC)组( P<0.05)；成功构建了稳定表达pNTAP-DJ-1质粒的HTB-182细胞系；TAP-MS筛选到DJ-1相互作用的三个蛋白质：细胞角蛋白1(Keratin 1)、细胞角蛋白10(Keratin 10)和NADPH氧化酶活化蛋白P47(P47 Px)。 结论:Keratin 1、Keratin 10和P47 Px可能是DJ-1蛋白的相互作用蛋白。

目的:观察Park7基因编码的DJ-1蛋白对小鼠视神经钳夹损伤（ONC）后视网膜神经节细胞（RGC）及视功能的影响。方法:健康雄性C57BL/6J小鼠37只和116只分别随机分为正常组、ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组和对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、绿色荧光蛋白（GFP）-ONC组。ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组小鼠分别于建立ONC模型后2、5、7 d处死取材，进行后续实验。Park7组、Park7-ONC组小鼠玻璃体腔注射敲低Park7基因的重组腺相关病毒（rAAV）1 μl，GFP-ONC组小鼠玻璃体腔注射仅带有GFP的rAAV 1 μl；注射后4周观察病毒转染情况。ONC组、Park7-ONC组、GFP-ONC组玻璃体腔注射后23 d，建立ONC模型，建模后5 d取材进行后续实验。视网膜铺片免疫荧光染色观察RGC平均密度变化；全视野闪光视网膜电图检测各组小鼠a波、b波和明视负向反应（phNR）潜伏期及振幅变化和振荡电位（OPs）振幅变化；视动反应（OMR）检测小鼠视敏度；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠视网膜中DJ-1、Bax、B淋巴细胞瘤／白血病-2 （Bcl-2）蛋白相对表达水平。多组间数据比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用最小显著差法 t检验。 结果:与正常组比较，ONC 2 d组、ONC 5 d组小鼠视网膜DJ-1蛋白相对表达量均显著上升，差异有统计学意义（ t=16.610、5.628， P<0.01、<0.05）。病毒转染后4周，Park7组小鼠视网膜RGC层、内丛状层可见强GFP表达。与对照组比较，ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降，差异有统计学意义（ t=16.520， P<0.000 ）；与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降，差异有统计学意义（ t=6.074， P<0.01 ）。随刺激光亮度增加，对照组小鼠暗适应a波、b波潜伏期逐渐缩短，振幅逐渐增大。刺激光亮度3 cd·s/m 2，对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、GFP-ONC组小鼠暗适应a波、b波潜伏期及振幅比较，差异均无统计学意义（潜伏期： F= 0.503、2.592， P=0.734、0.068；振幅： F= 0.439、1.451， P=0.779、0.247 ）；与对照组比较，ONC组小鼠Ops、PhNR振幅明显下降，差异有统计学意义（ t=15.07、12.80， P<0.000、<0.001）；与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠Ops、PhNR振幅明显下降，差异有统计学意义（ t=4.042、5.062， P<0.05、<0.01）；各组小鼠PhNR潜伏期比较，差异无统计学意义（ F=1.327， P=0.287 ）。与对照组比较，ONC组小鼠视敏度明显下降，差异有统计学意义（ t=23.020， P<0.000 ）；与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠视敏度明显下降，差异有统计学意义（ t＝3.669， P<0.05 ）。Park7组与对照组、Park7-ONC组与ONC组比较，小鼠视网膜中DJ-1蛋白相对表达量均明显下调，差异有统计学意义（ t=47.140、26.920， P<0.000、<0.000）；ONC组与GFP-ONC组比较，差异无统计学意义（ t= 0.739， P=0.983 ）。与ONC组比较，Park7-ONC组小鼠视网膜中Bax蛋白相对表达量明显升高，Bcl-2蛋白相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（ t=5.960、9.710， P<0.05、<0.05）；Park7-ONC组Bcl-2/Bax相对表达量比值明显低于ONC组，差异有统计学意义（ t=13.620， P<0.01 ）。 结论:敲低Park7基因后其编码的蛋白质DJ-1表达下调，加重ONC模型小鼠RGC损伤以及视网膜电生理反应及视功能下降。

目的 探讨复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠多巴胺(DA)能神经元生物学功能的作用.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体注射法制备PD阴虚动风证动物模型,成模大鼠随机分为模型组、美多芭组(150 mg/kg)和复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g/kg),分别给予相应药物进行干预,正常组、假手术组及模型组给予生理盐水,共灌胃28 d,观察各组大鼠一般情况及神经行为学,HE染色观察黑质组织病理改变,透射电镜技术观察损毁侧黑质内DA能神经元的线粒体结构,免疫组化、Western b1ot及RT-qPCR法检测DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达.结果 与正常组、假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数增加(P＜0.01),游泳评分降低(P＜0.01),悬挂时间减少(P＜0.01),黑质神经元数量减少,形态受损,黑质内神经元出现线粒体肿胀变性,线粒体嵴消失等损伤,损伤侧黑质DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01);与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠旋转圈数减少(P＜0.01),游泳评分升高(P＜0.01),悬挂时间增加(P＜0.01),线粒体形态结构损伤减轻,损伤侧黑质DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1 mRNA和蛋白表达均升高(P＜0.05,P＜0.01),复方地黄颗粒高剂量效果与美多芭相当(P＞0.05).结论 复方地黄颗粒可能通过调控DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达促进内质网-线粒体稳态,减轻线粒体损伤,维持DA能神经元生物学功能.

目的 探究红景天注射液对帕金森病患者治疗效果及血清DJ-1/核因子相关因子2(Nrf2)通路相关氧化应激指标的影响.方法 前瞻性选取2021年6月至2022年6月来河北北方学院附属第一医院治疗的120例帕金森病患者作为研究对象,按照随机数字表法将患者分为研究组与对照组,每组各60例.对照组患者接受常规抗帕金森病治疗,研究组患者在此基础上联用红景天注射液治疗,连续治疗4周.比较两组患者的临床疗效,治疗前、治疗后4周的氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、DJ-1蛋白、Nrf2],治疗前、治疗后4个月的帕金森病综合症状、生活质量情况,并观察两组患者不良反应发生情况.结果 治疗后,观察组患者的治疗有效率为96.61％,明显高于对照组(83.05％),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后4周,观察组患者血清SOD、GSH-Px、Nrf2 水平分别为(44.27±2.19)U/mL、(44.12±6.72)U/L、(669.68±87.23)U/L,均明显高于对照组[(31.29±2.97)U/mL、(40.82±4.12)U/L、(602.09±52.31)U/L],而血清丙二醛、DJ-1 蛋白水平分别为(2.27±0.86)nmol/mL、(7.08± 2.19)μg/L,均明显低于对照组(3.69±1.15)nmol/mL、(10.92±1.29)μg/L,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后4个月,观察组患者的UPDRS评分为(46.23±2.34)分,明显低于对照组[(63.28±1.93)分],差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后4个月,观察组患者的生理功能、躯体功能、社会功能、心理状态、情感功能5个方面的评分分别为(73.12±5.22)、(78.23±2.34)、(81.23±2.13)、(88.29±3.91)、(86.39±3.23)分,均明显高于对照组[(53.13± 6.48)、(59.28±4.92)、(69.24±5.91)、(71.23±2.03)、(71.13±3.25)分],差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,观察组患者不良反应发生率为8.47％,明显低于对照组(23.73％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在常规抗帕金森病治疗基础上,采用红景天注射液治疗帕金森病可明显提高患者的临床疗效,抑制DJ-1/Nrf2通路相关氧化应激反应,改善帕金森病症状,提高患者生活质量,降低不良反应发生率.

目的 研究南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus Thunb.Extract,COE)抑制非小细胞肺癌侵袭转移的具体机制.方法 通过CCK-8法测定COE抑制H1299细胞的生物活性,并依此选取低毒浓度进行细胞侵袭转移的功能研究.使用伤口愈合实验和高内涵成像追踪细胞轨迹对细胞运动功能进行测定.通过Western bolt实验进行分子层面的研究,探究COE抑制肺癌侵袭转移的具体分子机制.实验的分组采用剂量梯度进行设置,分别为Control组(0.05％DMSO),COE组:20,40,80 μg/mL.结果 COE以剂量依赖的形式明显抑制了 H1299的细胞活性.伤口愈合实验结果显示,COE显著抑制了 H1299细胞的迁徙能力,统计分析显示差异有显著统计学意义.高内涵成像实时动态追踪细胞轨迹显示,80 μg/mL浓度的COE显著抑制了 H1299细胞的迁徙能力,表现在运动速度的降低和均方位移量的下降.Western bolt实验结果表明,COE通过DJ-1/PTEN/FAK轴抑制非小细胞侵袭转移.蛋白质印迹的归一化分析均具有统计学意义.结论 南蛇藤提取物能在低细胞毒浓度下通过DJ-1/PTEN/FAK轴抑制非小细胞侵袭转移.

目的 探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是否增强 DJ-1(protein/nucleic acid deglycase,蛋白/核酸去糖化酶)过表达人胃癌SGC7901细胞对5-FU(5-fluorouracil,5-氟尿嘧啶)的敏感性.方法 实验分为Control组、DADS组、VCR(Vincristine,长春新碱)组、VCR+DADS 组、DJ-1 组、DJ-1+DADS组;MTT检测DADS对5-FU抑制细胞增殖的影响;流式细胞术检测DADS对细胞凋亡的影响;qRT-PCR、Western blot、免疫荧光检测DADS对耐药相关基因表达的影响.结果 DADS增强5-FU对VCR耐药细胞和DJ-1过表达细胞增殖的抑制作用;DADS诱导VCR耐药细胞凋亡;DADS下调DJ-1表达、诱导DJ-1过表达细胞凋亡;过表达DJ-1 上调 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、Bcl-2、XIAP(X 连锁凋亡抑制蛋白),下调caspase-3表达;DADS降低DJ-1过表达细胞和VCR耐药细胞P-gp、Bcl-2、XIAP,升高caspase-3表达.结论 DADS能增强DJ-1过表达细胞对5-FU的敏感性,与其拮抗DJ-1介导的P-gp、Bcl-2、XIAP上调、caspase-3下调有关.

目的:从DJ-1蛋白调节线粒体复合体I活性的角度,探讨DJ-1介导白藜芦醇(RES)预处理对抗大鼠心肌缺血再灌注(I/R)所诱发的氧化应激损伤的分子机制.方法:心肌内注射DJ-1敲减(sh-DJ-1)或阴性对照(NC)慢病毒后,通过结扎大鼠冠状动脉左前降支法构建心肌I/R模型.将SD大鼠随机分为6组:假手术(sham)组、I/R组、RES+I/R组、NC+RES+I/R组、sh-DJ-1+RES+I/R组和IACS-010759(线粒体复合体I抑制剂)+RES+I/R组,每组10只.在心肌I/R模型前7 d通过灌胃给予RES(20 mg/kg),每日一次.此外,sham和I/R组大鼠均通过灌胃接受等体积的生理盐水.TTC染色和超声心动图分别观察心肌梗死面积和心功能变化情况;MitoSOX荧光探针检测心肌中线粒体活性氧(ROS)水平;试剂盒检测血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和乳酸脱氢酶(LDH)活性;结合Western blot和免疫共沉淀实验观察DJ-1与线粒体复合体I的两个亚基ND-1和NDUFA4的相互作用.结果:与I/R组相比,RES预处理可显著降低心肌梗死面积、心脏组织中线粒体ROS水平,以及血清中LDH活性和MDA含量(P＜0.01),提高左室射血分数、左室短轴缩短率和血清中SOD活性(P＜0.01),增加DJ-1的表达及DJ-1的线粒体转位(P＜0.01),促进DJ-1与ND-1/NDUFA4的相互作用进而保护线粒体复合体I的活性(P＜0.01).然而,与RES+I/R组相比,敲减DJ-1的表达后,RES减轻心肌I/R损伤的作用被显著抑制(P＜0.05或P＜0.01).结论:RES预处理可增加DJ-1的表达和线粒体易位,促进DJ-1与线粒体复合体I的ND1和NDUFA4亚基的相互作用,从而保护线粒体复合体I的活性并减轻心肌I/R所诱发的氧化应激损伤.

目的 分析帕金森病患者唾液中α-突触核蛋白(α-syn)、DJ-1、血红素加氧酶-1(HO-1)、乙酰胆碱酯酶(AchE)水平变化及其辅助诊断价值.方法 选取2021年8月至2022年8月该院收治的帕金森病患者96例作为帕金森病组,另选取同期在该院体检的健康人群80例作为健康对照组.根据蒙特利尔认知量表(MoCA)评分将帕金森病患者分为合并认知障碍组和无认知障碍组,采集所有受检者的唾液标本,采用酶联免疫吸附试验检测HO-1、α-syn、DJ-1水平,酶比色法检测AChE水平,比较各组受检者的唾液指标水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析α-syn、DJ-1、HO-1、AchE指标单独及联合诊断帕金森病的效能.结果 帕金森病组患者唾液α-syn、DJ-1、HO-1水平低于健康对照组,AchE水平高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).合并认知障碍组患者唾液α-syn、DJ-1、HO-1水平低于无认知障碍组,AchE水平高于无认知障碍组,差异均有统计学意义(P<0.05).ROC曲线分析结果显示,α-syn、DJ-1、HO-1、AchE单独检测诊断帕金森病的曲线下面积(AUC)分别为0.723、0.781、0.816、0.671,4项指标联合检测诊断帕金森病的AUC为0.876.结论 帕金森病患者唾液中α-syn、DJ-1、HO-1、AchE水平呈明显异常,且与患者认知功能改变相关,4项指标在辅助诊断帕金森病方面具有一定价值.