目的:分析整合酶(IN)区主要耐药突变对HIV-1 CRF01_AE毒株耐药的影响，并比较与B亚型毒株的差异。方法:根据美国斯坦福大学HIV耐药数据库选择7个IN区突变或联合突变(T66K、F121Y、Q148K、N155H、G118R、R263K、Q148K/N155H)，通过无缝克隆同源重组及点突变的方法引入到HIV-1 B亚型感染性克隆pNL4-3和CRF01_AE感染性克隆pGX002的IN区，转染293T细胞包装病毒，在MT2细胞上扩大培养并测定感染性滴度。检测4种整合酶链转移抑制剂(INSTIs)，拉替拉韦(RAL)、埃替拉韦(EVG)、多替拉韦(DTG)、比昔格韦(BIC)对14株突变病毒的半抑制浓度(IC 50)及其与野生型病毒相比提高的倍数。 结果:成功构建携带7个IN区突变或联合突变的B亚型和CRF01_AE质粒，包装获得14株重组病毒，感染性滴度为10 4~10 6半数组织细胞感染剂量(TCID 50)/ml，在MT2细胞高效复制，上清液中HIV-1 P24抗原浓度可达830~2 700 ng/ml。5个突变或突变组合(T66K、F121Y、Q148K、N155H、Q148K/N155H)均可导致CRF01_AE和B亚型毒株对RAL和EVG高度耐药，与野生病毒相比IC 50分别提高200倍和2 000倍以上，相同突变导致RAL和EVG对CRF01_AE的IC 50提高的倍数均显著低于B亚型( P<0.01)。Q148K/N155H突变导致B亚型和CRF01_AE对DTG和BIC高度耐药，IC 50提高50倍以上，其他突变对DTG和BIC的药物敏感性几乎无影响。 结论:构建了基于CRF01_AE和B亚型的14株携带不同INSTI耐药突变的HIV-1毒株，5个突变可导致对RAL和EVG的高水平交叉耐药，同一突变导致B亚型毒株耐药程度显著高于CRF01_AE毒株。Q148K和N155H突变组合可导致DTG和BIC的高度耐药，表明DTG和BIC耐药的遗传屏障高，可有效抑制携带INSTI耐药突变的毒株，且无明显的亚型耐药差异。

目的:验证脓毒症中特异分化的单核细胞亚群，并筛选及构建用于早期诊断脓毒症的单核细胞差异基因集。方法:选择广东省人民医院2020年6月至2021年3月收治的脓毒症患者，提取外周血单个核细胞（PBMC），应用单细胞测序技术和拟时序分析对单核细胞差异亚群进行验证。利用生物信息学手段分析差异亚群中的基因表达，并筛选出差异基因用于初步构建候选差异基因集。利用数字聚合酶链反应（PCR）技术分别在脓毒症患者PBMC以及脓毒症人髓系白血病单核细胞株（THP-1）模型中对候选差异基因进行验证，并利用韦恩图构建最终的单核细胞差异基因集。使用基因表达数据库（GEO）对差异基因集进行外部数据验证。结果:①细胞注释及拟时序分析结果显示，NEAT1 +CD163 +单核细胞的分化明显区别于其他亚群，并在脓毒症早期就已经出现，是脓毒症病理过程中的特征亚群。②从NEAT1 +CD163 +单核细胞的基因表达中筛选出22个与脓毒症相关的差异基因，经过数字PCR进一步验证后，最终筛选出碱性亮氨酸拉链ATF样转录因子（BATF）、原癌基因JUNB、癌胚抗原相关细胞黏附分子4（CEACAM4）、第9号染色体上95开放阅读框（C9orf95）、G蛋白α亚基15（GNA15）、补体C3A受体1（C3AR1）、转录生长因子β1（TGFB1）、线粒体载体同源物1（MTCH1）8个基因，用于构建最终的单核细胞差异基因集。③外部验证结果显示，由于C9orf95基因在GEO数据库的GSE154918及GSE133822两个数据集中均无数据，因此在验证时将其排除。在GSE154918数据集，单核细胞差异基因集中BATF、JUNB、CEACAM4、GNA15、C3AR1、TGFB1、MTCH1的表达在脓毒症组均较健康对照组明显升高（log 2表达量：BATF为12.78±0.08比11.39±0.35，JUNB为16.88±0.07比16.04±0.03，CEACAM4为14.73±0.08比13.77±0.05，GNA15为13.16±0.06比12.30±0.04，C3AR1为14.62±0.13比12.87±0.05，TGFB1为16.95±0.05比16.57±0.36，MTCH1为14.80±0.02比14.61±0.15，均 P<0.05）；在GSE133822数据集，基因集中BATF、CEACAM4、GNA15、C3AR1的表达在脓毒症组明显高于健康对照组（log 2表达量：BATF为8.66±0.16比7.92±0.14，CEACAM4为9.20±0.16比8.36±0.20，GNA15为10.66±0.18比10.13±0.16，C3AR1为11.49±0.27比10.48±0.16，均 P<0.05），而JUNB、TGFB1、MTCH1的表达在两组人群中差异无统计学意义。基因集差异分析（GSVA）显示，在GSE154918及GSE133822两个数据集中，脓毒症组单核细胞差异基因集的富集分数均显著高于健康对照组（GSE154918：0.38±0.04比-0.44±0.02，GSE133822：0.56±0.02比0.20±0.05，均 P<0.01）。受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析显示，单核细胞差异基因集在GSE154918及GSE133822两个数据集中对脓毒症早期诊断的ROC曲线下面积（AUC）及95%可信区间（95% CI）分别为0.993（0.980～1.000）和0.944（0.873～1.000），提示其具有可靠的诊断价值。 结论:通过单细胞测序技术及数字PCR技术筛选得到的BATF、JUNB、CEACAM4、GNA15、C3AR1、TGFB1、MTCH1单核细胞差异基因集对脓毒症患者具有良好的早期诊断效能，或许能够为早期诊断脓毒症提供新思路。

目的:比较多拉韦林/拉米夫定/替诺福韦（doravirine/lamivudine/tenofovir，DOR/ 3TC/TDF）和依非韦伦/恩曲他滨/替诺福韦（efavirenz/emtricitabine/tenofovir disoproxil fumarate，EFV/FTC/TDF）在初治成年HIV-1感染者中的疗效及安全性。方法:DRIVE-AHEAD是一项双盲，非劣效性3期临床试验。纳入HIV-1 RNA≥1 000拷贝/mL且未接受过抗逆转录病毒治疗的成年感染者，按照1:1比例随机接受DOR/3TC/TDF或EFV/FTC/TDF治疗，疗程96周。主要疗效终点是第48周HIV-1 RNA<50拷贝/mL的患者比例（非劣效界值10%）。结果:728例接受治疗并纳入研究（每组364例）。第48周时，DOR/3TC/TDF组和EFV/FTC/TDF组分别有84.3%（307/364）和80.8%（294/364）的患者达到HIV-1 RNA<50拷贝/mL（差异：3.5%；95% CI：-2.0~9.0）。DOR/3TC/TDF组出现头晕（8.8% vs 37.1%）、睡眠障碍（12.1% vs 25.2%）及感觉异常（4.4% vs 8.2%）等不良事件者比例显著低于EFV/FTC/TDF组。两组的空腹低密度脂蛋白胆固醇和非高密度脂蛋白胆固醇平均变化值有显著差异（-1.6 vs +8.7 mg/dL和-3.8 vs +13.3 mg/dL）。 结论:在初治成年HIV-1感染者中，48周时DOR/3TC/TDF方案的疗效不劣于EFV/FTC/TDF且耐受性良好。DOR/3TC/TDF方案的神经精神性不良事件发生率更低，同时低密度脂蛋白胆固醇、非高密度脂蛋白胆固醇的变化更小。

回顾性分析2018年8月至2019年6月杭州市西溪医院、建德市第二人民医院应用索磷布韦联合达拉他韦治疗的289例初治1b型慢性丙型肝炎患者的临床资料。其中236例无肝硬化（无肝硬化组）、48例为代偿期肝硬化（代偿期肝硬化组）、5例为失代偿期肝硬化患者（失代偿期肝硬化组），索磷布韦（400 mg/片）和达拉他韦（60 mg/片）治疗剂量为各1片/d，治疗12周。289例患者治疗结束后12、24周随访，分别失访15和26例，均为无肝硬化组患者。治疗结束后12周持续病毒学应答（SVR12）率、24周SVR24率无肝硬化组分别为82.2%（194/236）和81.7%（193/236），代偿期肝硬化组及失代偿期肝硬化组分别为100.0%（48/48）和5/5，3组比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）；治疗结束后12、24周时血丙氨酸氨基转移酶[ 14（6，23）和14（5，72）U/L] 、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）[22（14，24）和23（15，52）U/L]、白蛋白[46（42，48）和46（34，51）g/L]、球蛋白[（32.6±4.0）和（31.6±3.8） g/L]、外周血血小板计数[（145.0±49.7）×10 9/L和（142.0±47.4）×10 9/L]、AST/血小板计数比值指数（APRI） [0.4（0.2，0.4），0.4（0.3，1.5）]，与治疗前[44(8，175) U/L，44(23，154)U/L，45(41，49) g/L，（33.0±4.0）g/L，（153.0±53.7）×10 9/L，0.7(0.3，6.3)]比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；治疗结束后12周时血总胆红素[（15.4±5.8）μmol/L]、外周血白细胞计数（6.2±1.8）×10 9/L]、基于4因子的纤维化指数[3.2（1.5，13.7）]，均较治疗前[（16.1±5.4）μmol/L，（5.7±1.5）×10 9/L，3.4(1.2，15.2）]好转（均 P<0.05）。治疗期间不良反应有乏力（14.8%，36/248）、头痛（9.3%，23/248）、腹泻（5.6%，14/248）以及皮疹、皮肤瘙痒（4.8%，12/248），经对症处理后好转。提示，索磷布韦/达拉他韦治疗初治的1b型慢性丙型肝炎患者总体SVR12和SVR24率均较高，安全性良好。

抗新型冠状病毒目前最主要的方案为抗病毒和对症治疗，在临床试用的抗新型冠状病毒的药物包括广谱抗病毒药物(干扰素α和利巴韦林)、血凝素抑制剂(阿比多尔)、蛋白酶抑制剂(洛匹那韦/利托那韦和达芦那韦/考比司他)、核苷类似物(法匹拉韦和瑞德西韦)及抗疟药物(氯喹)，但在实际使用过程中发现部分患者出现肝损伤，本文就抗新型冠状病毒药物的肝损伤相关研究作一综述，旨在促进抗新型冠状病毒药物的安全有效使用。

目的:采用不同的流感病毒骨架构建表达分泌荧光素酶(Gaussia luciferase，Gluc)的重组流感病毒，同时研究其生长特性、遗传稳定性、Gluc表达水平、体外抗流感药物活性。方法:在PR8NA的C端插入猪捷申病毒2A肽(porcine teschovirus-2A autocleavage peptide, P2A)自剪切位点及Gluc编码基因，其余7个质粒分别来源于A/Puerto Rico/8/34(PR8) (H1N1)和A/WSN/1933(WSN) (H1N1)，通过流感病毒反向遗传学8质粒系统拯救重组病毒，分别命名为PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN。检测重组病毒遗传稳定性；对比PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN的荧光强度；检测重组病毒的生长动力学；同时测定PR8NAGluc/WSN荧光强度与半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose，TCID 50)的相关性及对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟的体外抗流感药物活性。 结果:通过反向遗传学成功拯救出以PR8和WSN为骨架表达Gluc的重组病毒。相对于PR8骨架，以WSN为骨架明显提高了Gluc的表达且遗传稳定，复制动力学比野生型稍低。PR8NAGluc/WSN荧光强度与TCID 50有较好的相关性，其对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟具有良好的敏感性。 结论:以WSN为骨架的重组病毒荧光表达强度比PR8骨架高，为高通量筛选抗流感病毒药物及研发流感病毒载体疫苗提供参考。

目的:观察直接抗病毒药物(DAAs)治疗肝移植术后丙型肝炎病毒(HCV)感染受者的抗病毒疗效。方法:收集2014年12月至2018年6月解放军总医院第五医学中心收治的应用DAAs治疗的肝移植术后HCV感染受者22例临床资料进行回顾性分析，HCV RNA基因1b型患者20例，采用索磷布韦(400 mg/d)+来迪派韦(90 mg/d)或索磷布韦(400 mg/d)+达拉他韦(60 mg/d)治疗方案，疗程12周或24周；2a型患者2例，采用索磷布韦(400 mg/d)治疗方案，疗程12周。观察抗病毒治疗效果、治疗期间的不良反应以及治疗、随访过程中的HCV RNA定量、肝肾功能等实验室指标。结果:22例肝移植术后HCV感染受者中男性16例，女性6例，中位年龄61.5(36～71)岁，抗病毒治疗中位时间为移植术后48(2～117)个月。其中16例患者采用12周疗程，治疗4周时2例患者HCV RNA未阴转，治疗结束时所有患者HCV RNA定量均为阴性；6例患者采用24周疗程(均为1b基因型)，治疗4周及治疗结束时HCV RNA均为阴性；所有患者治疗结束后12周及24周持续病毒学应答率均为100.0%。患者治疗前的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和肌酐水平分别为71.5(30，110)U/L、(89.4±25.7) mmol/L，治疗4周后ALT下降为22(17.8，28.5)U/L，治疗结束后24周肌酐下降为(77.4±11.5)mmol/L，治疗前后比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。治疗期间无严重不良反应发生。 结论:DAAs治疗肝移植术后HCV感染抗病毒效果肯定，可获得长期持续病毒学应答。

3例患者（例1男，27岁，慢性丙型肝炎；例2男，71岁，丙型肝炎合并肝细胞癌；例3男，60岁，丙型肝炎失代偿期肝硬化）服用含达拉他韦方案治疗丙型肝炎病毒（HCV）感染出现耐药或治疗失败。例1和2均服用达拉他韦联合阿舒瑞韦治疗。2例患者在治疗前检测HCV非结构蛋白（NS）5A均未发现耐药变异。例1在治疗第4周和第24周（停药时）检测HCV RNA均<15 IU/ml；停药10 d后出现病毒学突破，HCV序列检测示S122G、L31V、Y93H和C316N的4个位点变异。例2在治疗第8周时HCV RNA<15 IU/ml，12周时出现病毒学突破。2例患者均给予索磷布韦/维帕他韦联合利巴韦林治疗12周，并获得持续病毒学应答（SVR）。例3接受索磷布韦联合达拉他韦治疗24周，治疗第4、12周和第24周（停药时）检测HCV RNA均为<15 IU/ml，停药12周出现病毒学突破，给予索磷布韦/维帕他韦联合利巴韦林治疗24周，获得SVR。

目的:比较多拉韦林（doravirine，DOR）或达芦那韦/利托那韦（darunavir/ritonavir，DRV/r）联合两种核苷反转录酶抑制剂用于既往没有接受过任何治疗的HIV-1成年感染者的临床疗效。方法:此项随机、对照、双盲、多中心、非劣效性试验纳入HIV-1感染成年人按1：1方式随机分配至DOR（100 mg，每日一次口服）组或DRV（100 mg）/r（800 mg，每日一次口服）联合组，各组再分别接受由研究人员选定的两种核苷反转录酶抑制剂（nucleoside reverse transcriptase inhibitors，NRTIs）替诺福韦与恩曲他滨或阿巴卡韦与拉米夫定，直至96周。主要疗效终点是在第48周时达到血浆HIV-1 RNA小于50 copies/mL的受试者比例，如果治疗差异（DOR组减去DRV/r组）的双侧95%可信区间下限大于-10%可确定其具有非劣效性。结果:769例入选者被随机分配接受治疗，其中385例接受DOR治疗，384例接受DRV/r治疗。在第48周时，321例（83.8%）DOR组受试者和306例（79.9%）DRV/r组受试者血浆HIV-1 RNA低于50 copies/mL（差异为3.9%，95% CI：1.6~9.4），证明了DOR给药方案的非劣效性。研究中最常见的药物相关不良反应为腹泻（DOR组21例（5.5%），DRV/r组49例（12.8%））、恶心（分别为25例（6.5%）和29例（7.6%）））以及头痛（分别为23例（6.0%）和10例（2.6%））。18例研究受试者包括DOR组的6例（1.6%）和DRV/r组的12例感染者（3.0%）因不良反应而终止治疗。各组有1例（0.3%）受试者的严重不良反应与研究药物相关。 结论:DOR联合两种NRTI的治疗方案为初次接受治疗的成年HIV-1感染者提供了一种有价值的治疗选择。

目的 探讨六君子汤加味灌肠法对肥胖大鼠肠道菌群的影响.方法 将40只雄性SD大鼠按体质量随机分为4组,分别为正常组、模型组、菌液灌肠组、六君子汤加味灌肠组,每组10只.除正常组外,其他组采用高脂饲料喂养复制肥胖大鼠模型,造模成功后,给予菌液灌肠组粪菌液2 mL灌肠,六君子汤加味灌肠组给予六君子汤加味药液2 mL灌肠,正常组与模型组给予0.9％氯化钠溶液2 mL灌肠.灌肠操作1周3次,隔天1次,连续3周.实验结束后,称重检测大鼠体质量,生物化学法检测大鼠血清中甘油三酯含量,并收集各组大鼠粪便进行16SrRNA高通量测序.结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著升高(P＜0.01);与模型组比较,菌液灌肠组与六君子汤加味灌肠组体质量均有明显下降(P＜0.01).与正常组相比,模型组和六君子汤加味灌肠组大鼠血清甘油三酯水平升高(P＜0.01);与模型组比较,菌液灌肠组大鼠血清甘油三酯水平下降(P＜0.05);六君子汤加味灌肠组较菌液灌肠组大鼠血清甘油三酯水平升高(P＜0.05).高脂饮食诱导的肥胖大鼠存在肠道菌群失调,其肠道菌群物种丰富度与多样性均出现上升.六君子汤加味灌肠可上调肥胖大鼠的迷踪菌门、迷踪菌纲、氨基酸球菌科、产碱杆菌科、红螺菌科、肠杆菌科、迷踪菌科、琥珀酸弧菌科、未分类的脱硫弧菌科、蛭弧菌科、毛螺菌科、脱硫弧菌属、粪芽胞菌属、变形杆菌属、考拉杆菌属、寡源杆菌属、未分类的红螺菌属、镰刀菌属、丁酸球菌属的丰度;下调肥胖大鼠的8变形菌纲、巴斯德氏菌科、消化链球菌科、螺杆菌科、未分类的根瘤菌科、梭菌科1、链球菌科、罗姆布茨菌属、幽门螺杆菌属、狭义梭菌属、罗氏菌属、链球菌属、苏黎世杆菌属、韦荣氏球菌属的丰度.结论 菌液灌肠与六君子汤加味灌肠均能在一定程度上减缓高脂饮食诱导的肥胖大鼠体质量增加.肥胖大鼠出现肠道菌群失调,六君子汤加味灌肠可帮助肥胖大鼠重构体内肠道菌群组成,上调有益菌,下调致病菌丰度以达到新的平衡从而减缓肥胖发展进程.提示六君子汤加味灌肠可以调节肥胖大鼠肠道菌群紊乱.