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N-乙酰半胱氨酸及salubrinal对全反式视黄酸诱导视网膜色素上皮细胞凋亡的抑制作用
编辑人员丨6天前
目的:观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及选择性内质网应激反应抑制剂salubrinal在全反式视黄酸(ATRA)诱导视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡中的作用。方法:取ARPE-19细胞系进行培养,并将其分为正常对照组、模型对照组、NAC处理组、salubrinal处理组、NAC+salubrinal组,分别采用完全培养基、含10 μmol/L ATRA、含10 μmol/L ATRA+5 mmol/L NAC、含10 μmol/L ATRA+40 μmol/L salubrinal、含10 μmol/L ATRA+5 mmol/L NAC+40 μmol/L salubrinal的完全培养基培养细胞24 h。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡比率、多重含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Multicaspase)阳性比率、活性氧簇(ROS)水平。Western blot法检测各组细胞血管内皮生长因子A(VEGF-A)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、剪切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase 3)的表达水平。结果:流式细胞检测结果显示,各处理组细胞凋亡比率、Multicaspase阳性比率及ROS水平总体比较差异均有统计学意义( F=113.23、602.41、160.39,均 P<0.001),其中正常对照组、NAC处理组、salubrinal处理组及NAC+salubrinal组细胞凋亡比率、Multicaspase阳性比率、ROS水平均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Western blot检测结果显示,各组VEGF-A、CHOP、cleaved-caspase 3相对表达量总体比较,差异均有统计学意义( F=24.62、36.35、60.25,均 P<0.001),其中正常对照组、NAC处理组、salubrinal处理组及NAC+salubrinal组VEGF-A、CHOP、cleaved-caspase 3蛋白相对表达量明显低于模型对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:ATRA诱导RPE细胞产生氧化应激及内质网应激损伤并导致细胞凋亡,NAC及salubrinal可通过抑制应激反应,有效减轻细胞凋亡水平。
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编辑人员丨6天前
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特应性皮炎外周血单个核细胞潜在生物标志物的筛选及初步验证
编辑人员丨6天前
目的:探索特应性皮炎(AD)与健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)转录组差异,筛选出AD潜在的生物标志物并进行初步验证。方法:收集2021年1月至2022年5月在重庆医科大学附属第三医院皮肤整形美容中心9例AD患者及10名健康对照者的外周血,提取PBMC后以RNA转录组测序(RNA-seq)技术进行转录组测序及相对表达量测定,通过对差异表达基因(DEGs)进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)及蛋白互作网络(PPI)分析筛选出生物标志物候选基因并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行初步验证。结果:病例组患者的年龄[ M( Q1, Q3)]为26.50(22.75,30.50)岁,病程[ M( Q1, Q3)]为15(10,20)年。健康对照组的年龄[ M( Q1, Q3)]为37.00(27.75,40.25)岁。相对于健康对照者,AD组共检测出DEGs 1 044条,其中上调基因668条,下调基因376条,DEGs经差异可变剪切(AS)分析显示外显子选择性跳跃(46.74%)及外显子跳跃(31.01%)占比较大,GO富集分析显示DEGs主要与炎症反应相关,KEGG富集分析显示DEGs主要与细胞因子相互作用及信号通路相关。综合富集分析及PPI分析筛选出趋化因子C-C基序趋化因子配体4(CCL4)、C-C 基序趋化因子受体3(CCR3)、C-X-C 基序趋化因子受体 5(CXCR5)、核因子κB抑制因子-α(NFKBIA)、C-X-C基序趋化因子配体1(CXCL1)、白细胞介素1B(IL-1B)、C-C基序趋化因子配体20(CCL20)、淋巴细胞抗原96(LY96)作为AD生物标志物的候选基因,qRT-PCR验证显示上述细胞因子及细胞因子受体mRNA相对表达量与转录组测序结果趋势一致。 结论:CCL4、CCR3、CXCR5、NFKBIA、CXCL1、IL-1B、CCL20、LY96可能为AD的潜在生物标志物,参与AD的发生及发展。
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编辑人员丨6天前
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高脂饮食介导Tau选择性剪接失衡并加重认知功能损伤
编辑人员丨2024/3/2
目的 探讨高脂饮食(High-fat diet,HFD)对认知功能的影响及HFD促进阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)发生的可能机制.方法 将8~10周龄的表达人Tau的转基因(Human Tau,hTau)AD小鼠(性别不限)随机分成2组,给予12周的HFD或正常饮食,通过水迷宫实验及情景恐惧实验评估其学习记忆能力,之后对脑组织进行逆转录-聚合酶链反应以评估Tau病变情况;将8~10周龄的hTau AD小鼠(性别不限)随机分成2组,立体定位注射丝氨酸精氨酸蛋白激酶2 N342A的慢病毒(Lentiviral-green fluorescent pro tein-serine/arginine-rich protein-specific kinase 2 N342A,LV-GFP-SRPK2 N342A)[不被剪切的SRPK2,可下调4个微管结合重复Tau(Four-repeat tauopathies,4R-Tau)]或LV-GFP病毒后连续12周给予HFD,通过水迷宫实验及情景恐惧实验评估其学习记忆能力,后对脑组织进行RT-PCR、免疫荧光染色以评估Tau病变情况.结果 HFD可干扰Tau的选择性剪切,使4R-Tau/3个微管结合重复Tau(Three-repeat tauopathies,3R-Tau)比例升高,从而加重Tau病变、促进认知功能障碍的发生;通过抑制SRPK2的剪切来调节4R-Tau与3R-Tau的比例,可使HFD的hTau AD小鼠认知功能得到改善,Tau病变减轻.结论 HFD可以介导的Tau的选择性剪接失调明显促进认知功能障碍的发生、加重Tau病变.
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编辑人员丨2024/3/2
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TMPRSS3基因的VUS变异在1个耳聋家系中的致病性分析
编辑人员丨2024/3/2
目的 针对一对耳聋夫妇和其胎儿进行家系全外显子组检测,为该家系遗传咨询提供参考和依据.方法 收集该家系的临床资料,采集孕妇和其配偶的外周血和孕妇羊水,并提取基因组DNA,应用家系全外显子组测序技术进行产前遗传学检测,发现疑似致病位点进行Sanger测序验证;通过Minigene技术针对可能导致异常选择性剪切突变位点进行分析.结果 孕妇携带跨膜丝氨酸蛋白酶3基因(transmembrane serine protease 3,TMPRSS3)的复合杂合疑似致病突变,孕妇配偶携带GJB2基因c.235delC的纯合致病突变.胎儿携带TMPRSS3基因复合杂合突变,分别来源于父亲的意义未明的c.323-8T>C杂合突变以及来源于母亲的c.325 C>T杂合突变;采用Minigene技术检测发现c.323-8T>C杂合突变未导致明显的剪切改变.结论 TMPRSS3基因的复合杂合突变可能是导致孕妇耳聋的原因,GJB2基因纯合突变是导致孕妇配偶耳聋的原因,胎儿携带的TMPRSS3基因复合杂合突变不会导致耳聋,夫妇再生聋儿的几率很小.
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编辑人员丨2024/3/2
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二维超声剪切波弹性成像和血清学指标评分诊断慢性乙肝患者肝纤维化的价值
编辑人员丨2023/11/4
目的 探讨二维超声剪切波弹性成像(2D-SWE)与血清学评分诊断慢性乙肝患者肝纤维化的价值.方法 回顾2020年12月至2022年7月义乌市中心医院75例慢性乙肝患者的临床资料,根据经肝穿刺活检病理检查结果的Metavir分期分为纤维化组44例(F2~4期)和无纤维化组31例(F0~1期).采用2D-SWE测量肝脏硬度(LSM),比较两组患者性别、年龄、病程、病毒载量、血生化指标、血清学指标评分,采用单因素和多因素logistic回归筛选肝纤维化的预测因素,绘制ROC曲线分析各项指标诊断肝纤维化的效能.结果 与无纤维化组患者比较,纤维化组患者年龄较大,病程较长,病毒载量、ALT、AST、ALP、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、TBil、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和LSM水平均明显较高,而球蛋白和PLT均明显较低(均P<0.05).多因素 logistic 回归显示,LSM(OR=2.656,95%CI:2.103~3.562,P<0.01)和 Ⅲ 型前胶原(0R=1.546,95%CI:1.124~1.968,P<0.05)是发生肝纤维化的预测因素.ROC曲线分析得出LSM和Ⅲ型前胶原诊断肝纤维化的AUC分别为0.801和0.746,最佳截断值分别为12.6 kPa和7.7 ng/mL,即LSM≥12.6 kPa或者Ⅲ型前胶原≥7.7 ng/mL均提示肝纤维化.4个血清学评分包括AST-血小板比值指数(APRI)、King评分、Forns指数和基于4个因素的纤维化指数(FIB-4)诊断肝纤维化的AUC分别为0.772、0.703、0.685、0.621.选择性诊断(LSM≥12.6 kPa或者Ⅲ型前胶原≥7.7 ng/mL)和联合诊断(LSM≥12.6 kPa且Ⅲ型前胶原≥7.7 ng/mL)的AUC分别为0.874和0.778.logistic回归模型(0.124+1.021 x LSM+0.741 ×Ⅲ型前胶原)的AUC为0.886,显著高于4个血清学指标评分(均P<0.05),与单一指标诊断和LSM诊断肝纤维化的效能相当(P>0.05).结论 2D-SWE定量检测慢性乙肝患者LSM可作为无创诊断肝纤维化的新型指标,结合血清Ⅲ型前胶原的选择性诊断或者logistic回归模型的诊断效能可能优于4个血清学评分.
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编辑人员丨2023/11/4
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tau蛋白在PS19转基因小鼠中诱导异常的选择性剪切变化
编辑人员丨2023/11/4
目的 通过大数据分析6月龄PS19小鼠体内异常选择性剪切(AS)事件是否在tauP301S诱导的神经退行性表型之前出现.方法 采用axel从ENA数据库下载GSE182170数据集原始测序文件,通过STAR软件与ENSEMBL数据库参考基因组进行比对,rMATS和rmats2sashimiplot R包进行常见AS事件分析和结果可视化展示.RSEM软件进行基因转录本定量,Deseq2、edgeR、limma R包进行差异分析,采用clusterProfiler R包对差异基因进行GO富集分析.String和Cytoscape软件用来进行蛋白质间相互作用分析.采用ggcorrplt R包进行基因表达相关性分析.PCR结合琼脂糖电泳验证AS事件.结果 通过rMATS鉴定出了8 079个AS事件,并最终筛选出117个显著AS事件(ΔPSI>0.1,测序覆盖度>1).外显子跳跃(SE)是最常见的AS事件(50.43%),其次是外显子3'端可变剪切(A3SS)和外显子互斥(MXE).GO富集分析发现,突触组织基因发生异常SE事件,而剪切体基因主要发生异常A3SS事件.蛋白相互作用和相关性分析发现Snrpn剪切因子与最多数量的转录本表达显著相关.琼脂糖电泳证实PS19小鼠中Lrp8基因的异常AS事件.结论 异常的剪切因子可能参与了tauP301S引起的异常AS改变.本研究扩展了tau蛋白病中tau蛋白循环和剪切因子的知识.
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编辑人员丨2023/11/4
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局部血流动力学对颈动脉粥样硬化的影响及其在临床中应用的研究进展
编辑人员丨2023/8/26
动脉粥样硬化的形成原因多样且复杂,而其作为一种全身的系统性疾病却拥有病灶选择性的特点,即好发于颈动脉分叉处,这种特点使大量研究发现该处的局部血流动力学特征对本疾病的发生具有重大影响.本文围绕颈动脉分叉处的局部血流动力学相关研究进行综述,将局部血流动力学相关参数进行整理和总结,并在其中着重对壁面剪切力以及其衍生参数在颈动脉粥样硬化的产生、进展和破裂中的影响进行综述,以期为颈动脉斑块破裂的预警提供力学方面的信息,同时本文叙述了局部血流动力学研究在颈动脉粥样硬化疾病临床应用的转化,以期为该病在临床中的治疗提供个性化的选择和依据.
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编辑人员丨2023/8/26
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西方蜜蜂RBP1基因的克隆及mRNA表达分析
编辑人员丨2023/8/6
[目的]RBP1是一种参与黑腹果蝇Drosophila melanogaster性别决定基因doublesex(dsx)pre-mRNA选择性剪接的重要剪接因子.本研究旨在克隆RBP1基因在西方蜜蜂Apis mellifera中的同源基因AmRBP1,分析其结构域及其在西方蜜蜂性别决定初期胚胎和幼虫不同发育阶段中的表达模式,以期为研究该基因是否参与蜜蜂性别决定奠定基础.[方法]基于NCBI中提交的西方蜜蜂基因数据库和转录组数据库,利用黑腹果蝇rbp1对数据库进行同源检索获得RBP1的转录组序列,并设计引物进行PCR扩增克隆AmRBP1基因,利用生物信息学软件对其进行核酸及氨基酸序列分析.采用半定量RT-PCR技术分析该基因在西方蜜蜂胚胎及幼虫期的表达模式.[结果]由序列比对分析可知,西方蜜蜂AmRBP1基因的pre-mRNA含有3种不同的选择性剪切形式.通过设计不同的引物,克隆得到3种成熟的mRNA序列,分别命名为AmRBP1-R1(GenBank登录号:KY404154)、AmRBP1-R2(GenBank登录号:KY404155)和AmRBP1-R3(GenBank登录号:KY404156);mRNA长度分别为696,790和771 nt,编码的蛋白大小分别为130,166和162 aa;结构域分析发现AmRBP1的3种选择性剪切形式具有相同的结构域,氨基端含有一个RRM结构域,羧基端含有一个RS结构域.同源性分析表明,西方蜜蜂AmRBP1与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis、红火蚁Solenopsis invicta、埃及伊蚊Aedes aegypti、黑腹果蝇D.melanogaster、家蚕Bombyx mori、家蝇Musca domestica和中华按蚊Anopheles sinensis RBP1蛋白氨基酸序列一致性分别为96.97%,94.20%,84.85%,81.48%,80.28%,78.15%和69.23%.半定量RT-PCR结果表明,AmRBP1基因的3种剪切形式(AmRBP1-R1-3)在西方蜜蜂胚胎和幼虫各时期均有表达,无雌特异性或雄特异性表达的剪切形式.[结论]西方蜜蜂AmRBP1可能是一种SR家族剪切因子,其有可能参与调控基因表达的特定剪切,但其是否参与doublesex(dsx)基因pre-mRNA的性别特异性剪切需要进一步研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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剪接因子SRSF7新mRNA剪接异构体在顺铂处理细胞中的变化
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨不同梯度浓度顺铂(CDDP)处理不同肺癌细胞后新发现的剪接因子SRSF7 mRNA异构体在同浓度CDDP处理后不同的细胞中的水平变化.方法:采用梯度浓度的CDDP处理肺癌细胞A549(8、18、24、32、40、48及56 μmol/L)和H1299(12、24、36、48、60、72及84 μmol/L),处理24 h后提取总RNA,进行RT-PCR检测SRSF7 mRNA剪接异构体,并选取NCBI中未确定的异构体进行TA克隆后测序并分析鉴定异构体类型;用56 μmol/L的CDDP处理人胚肾细胞293FT,宫颈癌细胞CaSki、SiHa、C33A细胞24 h,提取总RNA后验证新发现的SRSF7 mRNA剪切异构体是否存在这些细胞中.结果:发现3种新的SRSF7mRNA剪接异构体(分别标记为New1、New2及New3),在肺癌细胞A549、H1299,人胚肾细胞293FT,宫颈癌细胞CaSki、SiHa、C33A细胞等多种肿瘤细胞中均存在,根据NCBI的预测New1,New2,New3异构体均为非编码蛋白的mRNA异构体,随着处理CDDP浓度的增加,其比例明显上升;而编码蛋白的mRNA异构体a和(或)b所占比例明显下降;同时SRSF7的总mRNA水平逐渐降低.结论:新发现的3种非编码的mRNA异构体的变化揭示细胞可能通过SRSF7自身的mRNA 选择性剪接来应对DNA损伤.
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编辑人员丨2023/8/6
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环状RNA及其与缺血性脑损伤相关研究进展
编辑人员丨2023/8/6
环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类通过特殊的选择性剪切机制而产生的非编码RNA分子,其在机体发育代谢过程中发挥重要调节作用,具有结构稳定、高度保守性以及组织在不同发育阶段具有高度特异性等特征.研究发现,中枢神经系统中存在大量的circRNA,不仅与神经细胞的发育、分化和生理功能密切相关,在脑损伤后引起的神经系统病变和功能失调中也具有重要的调节作用.因此深入研究环状RNA的结构与生理学功能,有益于更好地了解其致病机制,并从基因水平上为脑损伤疾病的预防、诊断和治疗提供新的策略.
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编辑人员丨2023/8/6
