目的:考察食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后的体内毒性,探索安全剂量范围,为后续临床试验提供参考信息.方法:30只食蟹猴随机分成3组,包括溶媒对照组和低、高剂量(1.0×108、4.0× 108pfu)组,每组10只,雌雄各半.采用肌肉注射给药,每周给药2次,连续给药6周,恢复期8周.试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每次给药后1～2天观察注射部位症状,每周称量体重.分别在检疫期、首次给药后、给药期结束、恢复期结束的不同时间点进行安全药理(体温、血压、心电图)测定、临床病理(血液学、血凝、血清生化、尿生化)检查、免疫学(T淋巴细胞、细胞因子、免疫原性)测定、组织病理学检查和脏器称重.结果:给药后,动物未见异常症状、注射部位刺激性、体重和摄食量改变,未见安全药理和临床病理指标有意义的变化.与溶媒对照组比较,第41天,低剂量会引起动物CD3+CD4+T细胞比例升高,高剂量未见明显变化.第13至97天,低、高剂量均能引起动物产生抗载体结合抗体、抗抗体,以及个别动物检出hPD-1表达产物.证明药物在体内产生免疫活性和介导免疫原性.组织病理学检查显示,给药期结束时,低、高剂量组动物注射部位极轻度至中度混合细胞浸润,高剂量组动物坐骨神经极轻度髓鞘/轴突变性;恢复期结束时注射部位病变减为极轻度,坐骨神经病变未见恢复趋势.低、高剂量组动物未见组织脏器重量改变.结论:食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后,动物体内耐受良好,受试物未见毒性反应剂量(NOAEL)是1.0×108pfu.上述研究结果为药物开展临床试验提供了数据支持.

目的 研究大鼠单次和重复给予鱼腥草破壁饮片后的毒性反应,为临床研究及应用提供参考的依据.方法 鱼腥草破壁饮片和鱼腥草饮片均以7.2g·kg-1的最大给药量单次灌胃给予大鼠观察毒性反应,并持续观察2周;鱼腥草破壁饮片以1.35、2.70、5.40 g·kg-1,鱼腥草饮片1.35、5.40 g·kg-1,连续3个月对SD大鼠灌胃给药,恢复期4周,进行临床观察、体重、摄食量、血清生化学、血液学、肾损伤生物标志物及病理学等各项检查.结果 鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片以7.2 g·kg-1对SD大鼠单次灌胃给药,未见明显毒性反应;鱼腥草破壁饮片及鱼腥草饮片重复给药3个月,各剂量组各项检查均未见异常.结论 鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片单次经口给药对SD大鼠的最大耐受剂量(MTD)＞7.2 g·kg-1.鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片对SD大鼠连续灌胃给药3个月的无毒作用剂量(NOAEL)为6.4 g·kg-1.鱼腥草破壁饮片、鱼腥草饮片在相同给药剂量下,SD大鼠毒性反应无明显区别.

目的 建立中药跌打膏质量控制方法,验证中药跌打膏安全性,为临床提供参考.方法 根据配方组成,采用薄层色谱法(TLC)对方中川乌、草乌、大黄、续断、泽兰进行定性鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)定量测定中药跌打膏中大黄素,以用于对中药跌打膏的质量控制;此外,通过皮肤急性毒性实验、皮肤刺激性实验、皮肤过敏性实验以及豚鼠皮肤组织病理学检查对中药跌打膏的安全性进行评价.结果 该实验中川乌、草乌、大黄、续断、泽兰定性鉴别方法操作简便,分离度好,专属性强.大黄素平均加样回收率为84.917 3％,RSD为1.466 1％.大黄素含量范围为1.099 9％～1.123 8％;精密度、稳定性、重复性试验的RSD分别为0.229 4％、1.835 9％、1.025 0％,均小于3.00％(n=6);安全性实验中,中药跌打膏对小鼠皮肤无刺激性,对小鼠体质量、肝肾功能无影响.一次给药后,14d观察期间各组小鼠行为活动、精神状态、饮食情况及排便均未出现异常;给药14 d后,取小鼠血液进行血常规检查,后对小鼠进行解剖取血,血常规各项指标及肝肾功能无异常,各脏器未出现肉眼可见病理变化;中药跌打膏干预后的豚鼠皮肤病理检查均未见组织病理学改变.中药跌打膏对豚鼠皮肤无刺激性,中药跌打膏对豚鼠皮肤无明显致敏.结论 该实验建立的中药跌打膏中川乌、草乌、大黄、续断、泽兰的TLC鉴别方法和大黄素含量测定方法有良好的精密度、稳定性和重复性,可用于中药跌打膏的质量控制.中药跌打膏对小鼠局部皮肤无毒性,对豚鼠皮肤无刺激性,对豚鼠皮肤无致敏性,说明中药跌打膏外用治疗疾病安全可靠.

目的 探究清热消炎宁片对SD大鼠重复给药毒性的影响.方法 将120只SD大鼠随机分为空白组(纯水)和低、中、高剂量实验组(2.63、5.25、10.50 g·kg-1清热消炎宁干膏粉),每组30只.4组大鼠均连续给药4周,设置恢复期4周.给药末期及恢复期末进行解剖,观察4组大鼠的一般状况、体质量增长、血液学及血生化指标、主要脏器系数、观察肉眼及镜下组织形态.结果 实验期间,低、中、高剂量实验组的一般状况、体质量增长、凝血指标、组织病理学与空白组比较均未见明显异常.给药末期,高剂量实验组和空白组的平均血红蛋白浓度分别为(370.70±3.78)和(365.90±5.77)g·L-1,葡萄糖分别为(5.98±0.63)和(6.61±0.93)mmol·L-1,尿素氮(BUN)分别为(4.72±1.01)和(5.78±1.64)mmol·L-1,肝系数分别为3.05±0.17和2.89±0.19,在统计学上差异均有统计学意义(P≤0.05或P≤0.01).恢复期末,低剂量实验组和空白组的直接胆红素分别为(0.38±0.18)和(0.19±0.18)μmol·L-1,中剂量实验组和空白组的BUN分别为(4.45±0.56)和(5.65±1.16)mmol·L-1,在统计学上差异均有统计学意义(均P≤0.05).结论 清热消炎宁片重复给药对SD大鼠无明显的毒性.

目的 采用三段式幼龄动物试验(JAS)系统考察馥感啉口服液(FGLOL)在幼龄SD大鼠长期给药后的潜在发育毒性和延迟毒性.方法 第一阶段:根据1岁内婴幼儿临床拟用剂量,每天分别ig给予出生后4日龄(PND4)大鼠FGLOL 3.88,11.64和38.75 g·kg-1,共18 d,停药恢复3周.第二阶段:根据1～6岁儿童临床拟用剂量,分别ig给予PND15大鼠FGLOL 3.88,11.64和38.75 g·kg-1,共31 d,停药恢复3周.第三阶段:根据7～12岁儿童临床拟用剂量,每天分别ig给予PND40大鼠FGLOL 29.06,58.13和116.25 g·kg-1共66 d,停药恢复4周.上述试验均设溶剂对照组,ig给予等体积纯水.考察FGLOL对幼龄大鼠一般状况、摄食量、体重、生长发育、神经反射发育、学习记忆功能(总运动距离,中心、角落和边缘运动距离,潜伏期,工作记忆错误和参考记忆错误)、体格发育(体长)、骨骼发育(骨密度)、血液学(白细胞数、红细胞数和血小板数)和凝血、血液生化(谷氨酸脱氢酶、尿素氮和甘油三酯)以及组织病理变化等的影响.结果 三段式JAS中,ig给予FGLOL均未造成大鼠死亡.与溶剂对照组相比,FGLOL组大鼠一般状况无异常,体重、生长发育、神经反射发育、体格发育、骨骼发育、血液学和凝血、血液生化以及组织病理等变化均未见有毒理学意义差异.结论 FGLOL对相当于人类<6岁年龄段幼龄大鼠的JAS试验的未见不良反应剂量(NOAEL)为38.75 g·kg-1,对相当于人类7～12岁年龄段幼龄大鼠JAS和重复给药毒性试验的NOAEL为116.25 g·kg-1.

目的 探讨小儿荆杏止咳颗粒(JXZK)对幼龄大鼠长期毒性的影响,为其提供临床安全性用药评价.方法 检疫合格幼龄SD大鼠240只分为4组,空白对照组、JXZK(低、中和高)剂量组,每组60只.JXZK(低、中和高)剂量组分别以6.3 g生药/kg、12.7 g生药/kg和25.4 g生药/kg给药.给药前期(给药期第4周末)、给药中期(给药期第9周末)、给药末期(给药期第14周末)和恢复期(恢复期第4周末)各组随机处理动物(给药前期、给药末期各20只,给药中期、恢复期各10只).检测给药(前、中、末)期、恢复期体质量、摄食量、摄水量、血液学指标、血液生化指标、血凝指标、尿液、脏器系数、肝药酶、血清免疫球蛋白及激素情况,多组间比较用单因素方差分析,两两比较采用SNK-9检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 实验期间动物健康状况良好,未观察到明显中毒症状,无动物死亡.恢复期与空白对照组相比,JXZK中剂量组血液学指标白细胞计数(WBC)(t=2.913,P=0.009)、淋巴细胞(Lym)水平降低(t=3.413,P=0.003),嗜中性粒细胞(Neu)(t=2.256,P=0.037)、单核细胞比率(Mon)水平升高(t=5.245,P＜0.001);高剂量组血液学指标Lym水平降低(t=3.214,P=0.005),Neu水平升高(t=2.635,P=0.017).JXZK(低、中、高)剂量组血液生化指标葡萄糖(GLU)水平、JXZK高剂量组总胆红素(TBIL)降低(P均＜0.05).JXZK高剂量组活化部分凝血活酶时间(APTT)降低(P＜0.05),JXZK(低、中、高)剂量组尿液中PH、比重(SG),JXZK(中、高)剂量组尿蛋白(PRO)赋值、PH升高(P均＜0.05).JXZK高剂量组肾脏系数,肝药酶细胞色素P4502E1(CPY2E1)、PRO水平升高(P＜0.05、0.01).结论 出生后第8 d(PND8)的幼龄SD大鼠经口灌服JXZK 14周,未见明显毒性反应剂量(NOAEL)为25.4g生药/kg.

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目的 通过幼年SD大鼠急性毒性及重复给药毒性试验,评价传统民族药物抗感颗粒的安全性.方法 急性毒性试验采用最大给药量法(36 g·kg-1),观察给药后大鼠毒性反应.重复给药毒性试验分为1、3、9 g·kg-13个给药组和溶剂对照组,对幼年大鼠连续灌胃30天,恢复期4周,检测指标包括一般状况、血液学、凝血、生化、尿指标、激素指标、病理组织学、神经行为指标等.结果 急性毒性试验雌性大鼠36 g·kg-1剂量下体重增长缓慢.重复给药毒性试验在9 g·kg-1剂量下可见红系指标出现变化,主要表现在红细胞数、血红蛋白、红细胞比容轻度降低,网织红细胞轻度增加,恢复期4周后可逆.结论 传统药物抗感颗粒对幼年大鼠无急性毒性作用,重复给药毒性试验未见明显毒性反应剂量为3 g·kg-1.

EMA于2017年8月发布了“公认和传统草药产品申请上市许可或注册的非临床文件的指导原则(草案)”.该指导原则指出传统和公认的草药物质或制剂,在获得人体充分而详实经验的情况下,单次给药和重复给药毒性、毒代动力学研究、免疫毒性以及局部耐受性试验是不必要的;而其生殖毒性、遗传毒性和致癌性,如果发表的文献不能用或不足,附加非临床试验是必要的.详细介绍该指导原则主要内容,以期对拟在欧盟上市的中草药产品有所帮助,也对我国草药监管有所启发.

目的 对大鼠重复给予重组九价人乳头瘤病毒疫苗(9vHPV疫苗),考察该创新疫苗的非临床安全性和免疫原性,为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据.方法 使用Wistar大鼠,设4个主试验组:阴性对照组、佐剂对照组、HPV疫苗低剂量组(每只1/2剂)和高剂量组(每只2剂),每组各设1个卫星组.于第0、2、4、6周分别肌肉注射给予重组九价HPV疫苗,试验期间对所有动物观察临床症状和注射部位刺激性,对主试验组动物测定体重、摄食量、体温,末次给药结束及恢复期结束进行眼科检查、尿检查、血液学、血液凝固、血清生化、外周血T淋巴细胞亚群测定,并分别进行剖检、脏器称重,并采集组织样本进行组织病理学检查.卫星组动物进行HPV结合抗体、中和抗体和抗核抗体测定.结果 大鼠对低、高剂量HPV疫苗含有的9种抗原均能产生高水平的结合抗体和具有较强活性的中和抗体.低、高剂量HPV疫苗和佐剂引起大鼠外周血中性粒细胞和嗜酸性粒细胞增加,在末次免疫后3周基本恢复.佐剂和低、高剂量疫苗均引起大鼠血清ALB轻度降低、球蛋白增加和A/G比值降低.与给予佐剂及疫苗相关的大体病理学改变为双侧注射部位肌肉白色斑块,相关的组织病理学改变为注射部位肌肉肌纤维变性坏死、混合炎性细胞浸润及纤维组织增生,坐骨神经鞘周围混合细胞浸润及纤维组织增生,恢复期结束时部分病变恢复.本疫苗未对其他评价指标产生明显影响.结论 九价HPV疫苗对Wistar大鼠有良好的免疫原性.低、高剂量HPV疫苗和佐剂引起大鼠外周血中性粒细胞和嗜酸性粒细胞增加、血清球蛋白增加和注射部位刺激性病理改变.在本试验剂量下,九价HPV疫苗对Wistar大鼠有较好的安全性,无明显毒性剂量为每只2剂.