目的:考察电子束辐照和 60Co辐照对苦参药材、苦参中间体提取物及痢泻灵片中4种苦参碱类成分含量的影响。 方法:用电子束辐照和 60Co辐照2种辐照方法，分别以0、1.5、3、5、7、10、20、30、40 kGy剂量对苦参、苦参中间体提取物及痢泻灵片进行辐照，采用HPLC法测定其氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱含量，并比较辐照前后成分含量变化。 结果:氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱分别在0.046 9～0.937 4 μg、0.020 5～0.410 4 μg、0.098 9～1.977 9 μg、0.048 7～0.973 1 μg范围内线性关系良好，平均回收率分别为98.1%、100.1%、100.5%、96.6%， RSD分别为1.69%、2.03%、3.14%、1.10%。电子束辐照和 60Co辐照2种辐照方法对苦参药材中氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱含量基本无影响，对苦参中间体提取物和痢泻灵片4个成分含量有影响。 结论:所建立的苦参碱类成分测定方法准确、重复性好、简单实用，可作为痢泻灵片质控方法。辐照对苦参药材苦参碱类成分含量影响不显著，高剂量辐照对苦参中间体及成药有影响，可为企业质量控制及灭菌辐照提供依据。

目的:建立测定异烟肼HPLC方法,以钴60γ射线(60 Co-γ)为辐射源,考察辐射对异烟肼稳定性的影响.方法:采用Di-amosil C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);甲醇-0.2%磷酸溶液(2 :98)为流动相,流速:1.0 ml·min-1,检测波长:254 nm,进样量:10 μl.分别配制不同准确初始浓度的异烟肼溶液(10,50,100,100 μg·ml-1+N2饱和、100 μg·ml-1+O2饱和、100μg· ml-1+10%叔丁醇及异烟肼粉末)等,经不同辐照剂量(0.3,0.6,1,2.5,5,10 kGy)的60Co-γ辐照后,HPLC法测定溶液中剩余异烟肼的含量.结果:异烟肼的线性范围为1~200 μg·ml-1(r=0.9990).平均回收率为98.13%,RSD为0.65%.异烟肼的降解率随吸收剂量的增大而增大,随浓度的增大而减小,粉末状态几乎不降解.O2的存在可明显促进异烟肼的降解,N2和叔丁醇的存在可以在一定程度上抑制异烟肼的降解.结论:异烟肼水溶液对60Co-γ辐照敏感,其浓度越低,辐照剂量越大,降解越彻底.

目的 探讨过氧乙酸-乙醇(PES)联合辐照灭菌对脱钙骨基质(DBM)成骨诱导活性的影响.方法 取SD大鼠长管骨制作成骨粉装入胶囊后分为两组进行消毒灭活处理:PES+20kGy的钴-60γ射线消毒组(实验组)和20kGy钴-60射线消毒组(对照组).将DBM骨胶囊植入40只SD大鼠体内,分别在2、4、6、8周处死SD大鼠,将之前植入的DBM骨胶囊取出,对DBM的骨诱导活性进行检测.结果 从大体观察看,实验组所植DBM骨块呈散在颗粒状、形态不完整,对照组所植DBM骨块呈卵圆形、质地较硬、形态完整;从新生微血管数(MVQ)看,实验组MVQ值少于对照组,差异有统计学意义(P＜0.0001);从新生骨生长速率看,对照组的生长速率为1.59 μm/d,而实验组生长速率过低,无法测量;从钙、磷、碱性磷酸酶含量看,实验组钙含量小于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),实验组磷含量小于对照组,差异有统计学意义(P＜0.001),实验组碱性磷酸酶含量小于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 使用PES联合辐照灭菌以后会降低DBM的成骨诱导活性.

目的 观察冷冻研磨获得的脱细胞真皮基质粉(ADMP)生物学性状,探索高纯度且保留生物活性的异种(猪)ADMP对表皮细胞和成纤维细胞生长的支持及在皮肤创伤修复中的应用.方法 选取幼龄长白猪背部皮肤,经生物酶法脱细胞、冷冻干燥后经过不同冷冻研磨程序得到异种(猪)ADMP,再由60钴辐照获得无菌异种(猪)ADMP;通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察异种(猪)ADMP颗粒大小及胶原形态,确定适合应用的研磨程序;通过MTT法检测HaCaT细胞和BJ人皮肤成纤维细胞在不同浓度异种(猪)ADMP包被下的黏附作用,确定异种(猪)ADMP实现细胞最大黏附的浓度范围;DMEM培养液基添加异种(猪)ADMP为实验组,单纯DMEM培养液基为对照组,使用实时细胞分析技术分析BJ人皮肤成纤维细胞迁移指数,验证异种(猪)ADMP对成纤维细胞的促迁移作用;原代表皮细胞接种在异种(猪)ADMP培养液8d,绘制增殖曲线,检测异种(猪)ADMP对原代表皮细胞的促增殖作用,同时免疫荧光检测原代表皮细胞表面成熟与分化蛋白的表达.对数据进行Student's t-检验.结果 1、2、3、5、7、10次循环研磨获得异种(猪)ADMP,肉眼可见全部为白色、无块状,其中1、2、3次循环呈较粗颗粒;5、7、10次循环呈现集中均匀趋势,粒径分布在0 ～12 μm之间.其中5次循环粒径(13.00±2.10) μm与7次循环[(6.00±0.96)μm比较,差异有统计学意义(t=6.093,P=0.0002).异种(猪)ADMP透射电子显微镜下发现,不同循环次数获得的异种(猪)ADMP均能保留大量胶原分子.BJ人成纤维细胞和HaCaT细胞随包被浓度的增加,细胞黏附作用不断增强,浓度高于750 μg/cm2,无明显变化.实时细胞分析技术检测BJ人皮肤成纤维细胞在DMEM培养液基对照组培养液72 h后的迁移指数为1.21 ±0.10,而异种(猪)ADMP培养液基试验组的迁移指数为3.66 ±0.11,两组比较差异有统计学意义(t=22.24,P=0.002).在异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞形态统一增殖迅速,对照组出现一定比例的分化细胞,试验组与对照组第5天细胞数分别为(4.11±0.28)×105、(1.10±0.12)×105个,两组比较差异有统计学意义(t=13.51,P=0.005);第8天细胞数分别为(5.00±0.48) ×105、(3.05 ±0.30)×105个,两组比较差异有统计学意义(t=4.87,P=0.039),增殖曲线显示试验组在接种即日培养液至第5天,一直处于指数增长期.荧光染色中异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞E-cad全部表达,少量表达角蛋白10,整合素α6几乎全部强阳性,角蛋白14全部表达并有部分强阳性,Ki-67抗原表达率高.结论 通过生物酶解和冷冻研磨获得的异种(猪)ADMP对参与皮肤创伤修复最重要的表皮细胞和成纤维细胞,具有促进其增殖和迁移的作用,未来可进一步应用于皮肤创伤修复.

目的:采用HPLC法考察不同剂量60 Co-γ射线射线辐照灭菌对丹参有效成分含量的影响.方法:选择丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B等活性成分进行考察.色谱柱:Agilent TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A-乙腈,B-1％甲酸水溶液系统,梯度洗脱;检测波长:280 nm,;流速:1.0 ml·min-1;柱温:30℃.比较0,2,5,10 kGy剂量60 Co-γ射线辐照前后单身中活性成分含量的变化,并进行统计学分析.结果:丹参中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B分别在17.21～860.54 ng(r=0.9997)、0.07～3.36 ng(r=0.9992)、4.97～248.51 ng(r=0.9994)、243.15～12157.37 ng(r=0.9998)范围内呈良好线性;平均加样回收率分别为99.2％(RSD=0.44％),98.4％(RSD=1.20％),99.5％(RSD=0.93％),99.9％(RSD=0.02％).辐照剂量不超过5 kGy时,各组分辐照前后含量无显著变化(P>0.05);辐照剂量10 kGy时,丹参素、原儿茶醛和迷迭香酸含量在辐照后显著降低(P<0.05).结论:为保证药品安全有效,采用60Co-γ射线对丹参进行灭菌时,辐照剂量不宜超过5 kGy.

目的:研究不同剂量钴-60(60Co)射线辐照对白术药材4种有效成分含量的影响.方法:采用HPLC-DAD梯度洗脱-波长切换法;以Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,柱温35℃,检测波长为220 nm(白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及苍术酮)和275 nm(白术内酯Ⅰ),进样量为10μl.分别选择剂量为5,8,10 kGy对白术药材进行辐照,比较辐照前后4种有效成分含量的变化.结果:白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮分别在0.011～0.217μg,0.011～0.212μg,0.012～0.243μg,0.094～1.885μg范围内有良好线性,平均加样回收率分别为101.3％,100.6％,100.7％和100.5％.经过5,8,10 kGy辐照后,白术药材所含的白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及苍术酮均有变化.超过5 kGy后,苍术酮辐照前后含量变化差异有统计学意义(P<0.05).结论:所建立的白术有效成分测定方法回收率高,重复性好,简单实用,可用于白术的质量控制.在60 Co辐照剂量不超过5kGy时,各成分变化不显著,可为白术药材辐照灭菌手段提供参考.

血液辐照器利用放射线对血液进行辐照,以有效灭活血液中具有免疫活性的T淋巴细胞,是目前经临床验证的最有效的预防输血相关性移植物抗宿主病(TA-GVHD)的方法,其采用电离辐射抑制淋巴细胞的增殖能力,同时保持待输注血液组分的完整性.在我国,血液辐照器大部分采用钴源(60Co)或铯源(137Cs),然而随着社会对核安全越来越重视,X射线代替γ辐射源对血液进行辐照很可能成为一种趋势.为此,就血液辐照器技术的基本现状及今后的发展趋势予以综述.

目的 建立板层人工角膜钴-60照射病毒灭活验证方法,用该方法对脂包膜病毒灭活效果进行验证.方法 以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)为指示病毒,将干燥的板层人工角膜浸泡在高滴度病毒液中,在2～8℃浸泡5 h,经剪碎、研磨等步骤后4℃放置12 h,确立角膜吸附和释放病毒的条件.之后,将吸附病毒并呈干燥状态的角膜以0、5、10、15、20、25 kGy辐照剂量进行钴-60辐照,以确立的条件释放病毒并进行滴定,考察灭活效果.结果 板层角膜在2～8℃浸泡5 h可吸附足量病毒;病毒滴度可达到4 lg值以上,满足病毒灭活验证的要求.样品经25 kGy剂量钴-60照射后灭活PRV为2.75～3.25 lgTCID50/100μL,灭活后的样品在敏感细胞上盲传3代均未出现细胞病变.结论 成功建立了板层人工角膜病毒灭活验证的方法,并验证采用钴-60辐照法对PRV有较好的灭活效果.

目的 通过实验验证动物源性医疗器械病毒灭活方案的有效性并为动物源性医疗器械病毒灭活提供有效方案.方法 分别选用1％ NaOH溶液浸泡、25kGy钴-60辐照、1％ NaOH溶液浸泡结合25kGy钴-60辐照3种方法,对上市动物源性医疗器械产品—胸普外科修补膜进行了病毒灭活有效性的验证.结果 上述工艺处理后各指示病毒滴度均大幅降低,1％ NaOH溶液浸泡或25kGy钴-60辐照单步工艺处理后病毒滴度降低都超过4 logs,1％ NaOH溶液浸泡和25kGy钴-60辐照两步工艺合用处理后病毒滴度降低超过6 logs.结论 根据动物源性医疗器械产品注册申报资料指导原则,文章中两步法病毒灭活工艺对动物源性产品的病毒灭活控制是有效的.

目的 建立10-羟基-α-癸烯酸(10-HAD)含量测定方法,分析钴60辐照前后10-HAD的含量变化,结合微生物检测指标,评价制剂钴60辐照灭菌的适用性.方法 采用HPLC法进行含量测定.C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.4％ 磷酸溶液(50:50);流速1 mL/min;柱温30℃;检测波长210 nm.通过外标标准曲线法定量,并检验微生物指标.结果 制剂中10-HAD钴60辐照前后含量基本一致,未出现显著差异.成分的含量在0.04～0.52μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为97.5％(RSD=1.1％,n=9).微生物灭菌效果理想,符合要求.结论 此研究为参景片钴60辐照(辐照剂量9kGy)灭菌的适用性提供了依据.