目的:观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因(TUG1)靶向作用于微小RNA(microRNA，miR)-145/锌指E-盒结合同源异形盒-1 (ZEB1)对细胞侵袭能力的影响。方法:实验标本选自2018年4月至2019年12月间河北医科大学第二医院甲状腺乳腺外科收集的甲状腺乳头状癌及癌旁标本共30例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)的方法观察乳头状甲状腺癌及其癌旁组织中lncRNA TUG1及miR-145的表达水平；将lncRNA TUG1 shRNA和miR-145 mimics分别转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中，利用Transwell细胞侵袭实验观察lncRNA TUG1和miR-145对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响。应用生物信息学及双荧光素酶报告基因分析lncRNA TUG1和miR-145的关系及miR-145的靶基因。同时，利用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测lncRNA TUG1和miR-145对靶蛋白表达水平的影响。两组间统计学差异通过双尾 t检验进行分析。 结果:实时荧光定量PCR实验结果显示，lncRNA TUG1在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平(4.43±0.07)高于癌旁组织(1.13±0.06)，差异有统计学意义( t＝3.124， P<0.05)，miR-145的表达水平(0.39±0.08)低于癌旁组织(1.08±0.04)，差异有统计学意义( t＝2.937， P<0.05)；甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中转染lncRNA TUG1 shRNA组及miR-145 mimics组侵袭细胞数[(292.4±48.2)、(234.2±42.4)个]低于各自对照组侵袭细胞数[(452.9±50.8)、(439.4±39.8)个]，差异有统计学意义( t＝3.205， P<0.05； t＝3.186， P<0.05)；生物信息学及双荧光素酶报告基因分析结果显示，lncRNA TUG1可以与miR-145互补结合，ZEB1是miR-145的靶基因；lncRNA TUG1 shRNA组细胞ZEB1蛋白表达水平(0.33±0.12)低于lncRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.17±0.12)，差异有统计学意义( t＝3.320， P<0.05)，miR-145 mimics转染组细胞蛋白表达水平(0.46±0.11)低于miRNA对照组细胞中ZEB1蛋白表达水平(1.05±0.12)，差异有统计学意义( t＝3.450， P<0.05)。 结论:lncRNA TUG1能够靶向作用于miR-145/ZEB1调控甲状腺癌细胞的侵袭能力。

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)NEAT1对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞迁移和侵袭的影响,并进一步分析miR-429/锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEB1)轴在其中发挥的作用.方法 慢病毒转染建立稳定敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过RT-qPCR检测细胞lncRNA NEAT1表达以验证转染效率,通过Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot检测细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达.通过生物信息学分析miR-429与lncRNA NEAT1和ZEB1 mRNA间的潜在结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-429与lncRNA NEAT1以及miR-429与ZEB1 mRNA结合.将miR-429抑制剂转染敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞,通过Western blot检测细胞ZEB1表达.进一步检查敲减ZEB1对抑制miR-429的敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移、侵袭和EMT的影响.结果 敲减lncRNA NEAT1降低LSCC细胞lncRNA NEAT1表达,抑制细胞迁移和侵袭并下调细胞N-cadherin、Vimentin、Slug和Snail表达.miR-429 与 lncRNA NEAT1 和 ZEB1 mRNA 间存在潜在结合位点,且 miR-429 与 lncRNA NEAT1 以及 miR-429 与ZEB1 mRNA结合.抑制miR-429逆转了敲减lncRNA NEAT1对LSCC细胞ZEB1表达的抑制作用.此外,敲减ZEB1逆转了抑制miR-429对敲减lncRNA NEAT1的LSCC细胞迁移和侵袭的促进作用及EMT相关蛋白N-cadher-in、Vimentin、Slug和Snail表达的上调作用.结论 lncRNA NEAT1促进LSCC细胞迁移和侵袭,其机制可能与海绵化miR-429上调ZEB1表达促进LSCC细胞EMT有关.

锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1(ZEB1-AS1)属于长链非编码RNA(Lnc RNA)家族,是E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)的反义蛋白产物,可通过上调ZEB1的活性促进肿瘤浸润、转移,其表达的失调与多种肿瘤的发生、发展密切相关,有望成为肿瘤治疗的重要分子靶点.近年来,大量研究表明ZEB1-AS1及其相关基因ZEB1可通过调节肿瘤免疫微环境影响肿瘤恶性进展及治疗效果.本文主要阐述ZEB1-AS1及ZEB1与肿瘤相关免疫细胞、炎症相关细胞因子、炎性信号通路之间的相互作用,为肿瘤的靶向及免疫治疗提供新思路.

目的 探讨结肠癌组织中锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)1-反义链(AS)1 的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系.方法 选取结肠癌患者 120 例为研究组,收集患者手术过程中切除的癌组织及癌旁正常组织,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测癌组织及癌旁组织中ZEB1-AS1 的表达情况;分析ZEB1-AS1 高低表达与临床病理特征的相关性;分析ZEB1-AS1 高低表达与铂类化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析ZEB1-AS1 与 5 年生存期的关系;Cox回归模型分析影响患者预后不良的因素.结果 研究组ZEB1-AS1 水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结肠癌患者ZEB1-AS1 表达与年龄、性别、肿瘤直径不相关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05).ZEB1-AS1 低表达患者治疗有效率显著高于ZEB1-AS1 高表达患者(P<0.05).Kaplan-Meier分析结果显示,ZEB1-AS1 高表达患者 5 年生存率显著低于ZEB1-AS1低表达患者(P<0.05).多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅳ期、淋巴结转移、化疗无效、ZEB1-AS1 高表达均是影响结肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05).结论 ZEB1-AS1 在结肠癌患者组织中表达水平升高,其高表达与TNM分期、淋巴结转移有关,ZEB1-AS1 低表达者应用奥沙利铂辅助治疗有效率高,ZEB1-AS1 是影响结肠癌患者预后不良的危险因素.

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在结肠癌中发挥的作用及其可能的调控机制.方法:qRT-PCR检测MIF在结肠癌组织和癌旁组织中的表达及其对结肠癌患者预后的影响;qRT-PCR和免疫荧光检测MIF在结肠癌细胞HCT116和正常肠上皮细胞HIEC-6中的表达;si-RNA沉默MIF在HCT116细胞中的表达,CCK-8、Transwell和细胞划痕实验观察HCT116细胞增殖和迁移能力的变化,同时检测长链非编码RNA锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1(lncRNA-ZEB1-AS1)表达;starBase数据库预测分析lncRNA-ZEB1-AS1和miR-200b间的关系,双荧光素酶进行验证;分别过表达lncRNA-ZEB1-AS1和沉默miR-200b后检测HCT116增殖能力变化.结果:MIF在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织;MIF在HCT116细胞中表达显著高于HIEC-6细胞.靶向沉默MIF表达后,HCT116细胞增殖和转移能力降低,且lncRNA-ZEB1-AS1表达随着MIF沉默显著降低;starBase数据库预测及双荧光素酶标记实验结果表明lncRNA-ZEB1-AS1抑制miR-200b表达,且过表达lncRNA-ZEB1-AS1和沉默miR-200b均可逆转沉默MIF导致的细胞增殖能力下降.结论:MIF可能通过激活ZEB1-AS1/miR-200b信号通路促进结肠癌细胞的增殖和转移.

目的:锌指E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)是上皮-间质转换的重要调控因子.本研究探讨ZEB1在膀胱癌细胞系中的表达情况,以及对膀胱癌发展与转移的影响.方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系ZEB1的表达,免疫荧光检测ZEB1蛋白表达定位;转染ZEB1 siRNA后通过RT-PCR与Western Blot检测ZEB1的mRNA与蛋白表达变化;以及通过细胞侵袭实验观察ZEB1影响细胞侵袭能力的变化.结果:膀胱癌细胞系UM-UC3和5637均表达ZEB1,SV-HUC-1不表达ZEB1;ZEB1蛋白定位于胞核;ZEB1敲低后,其mRNA与蛋白表达降低,膀胱癌细胞系侵袭能力降低.结论:膀胱癌细胞系UM-UC3和5637可用于ZEB1与肿瘤相关的机制研究;ZEB1促进膀胱癌细胞侵袭.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-200a对胶质瘤细胞U251增殖、凋亡、迁移、细胞周期的影响及作用机制.方法 利用脂质体瞬时转染法将miR-200a模拟物(miR-200a组)和无义序列(Mock组)转染至体外常规培养人脑胶质瘤细胞株U251,同时设立Blank组(Blank组).转染48 h后实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测3组细胞miR-200a的表达;细胞计数盒8(CCK-8)法检测检测3组细胞增殖能力;划痕实验检测各组细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测各组细胞锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEBl)和细胞周期蛋白D1(Cyclin Dl)蛋白的表达.结果 转染后48 h,与Mock组和Blank组比较,miR-200a组细胞中miR-200a相对表达量增高(分别为17.51±0.89,1.46±0.33,1.66±0.13),差异有统计学意义(P=0.000、0.000);miR-200a组细胞在转染12 h后增殖率开始降低,差异有统计学意义(P=0.028、0.010);miR-200a组细胞凋亡率增加(P=0.001、0.001),G0/G1期细胞比例增加(P=0.011、0.013),S期细胞比例明显降低(P=0.024、0.008);miR-200a组细胞迁移能力明显下降(P=0.031、0.030),Western blotting结果显示调控上皮-间充质转化(EMT)的主要分子ZEB1(P=0.042、0.034)及调控细胞周期进程的分子Cyclin D1表达均明显下调,差异有统计学意义(P=0.020、0.013).结论 上调miR-200a的表达可以促进胶质瘤细胞凋亡,阻滞其细胞周期进程,抑制其迁移能力.

目的:探讨大肿瘤抑制基因1 (large tumor supressor gene 1,LATS1)对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC) B88细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,以及其临床意义.方法:构建LATS1过表达重组质粒并稳定转染至B88细胞中.蛋白质印迹法检测B88细胞中LATS1蛋白的表达水平;分别采用MTT法和Transwell小室法检测LATS1过表达对B88细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞中上皮-间质转化相关蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、扭曲蛋白(Twist)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9和锌指E-盒结合同源异形盒蛋白2(zinc finger E-box-binding homeobox-2,ZEB-2)表达的影响.收集正常头颈部鳞状上皮组织、异型增生组织及HNSCC组织,制成组织芯片,并采用免疫组织化学法检测LATS1蛋白在上述组织中表达的差异.收集临床病理资料,分析LATS1表达与HNSCC患者临床病理参数之间的关系.结果:重组pCDNA3.1-LATS1转入B88细胞后,B88细胞中LATS1蛋白的表达水平明显升高(P＜0.05).LATS1过表达可明显抑制B88细胞的增殖(P＜0.05)和迁移及侵袭能力(P值均＜0.05).蛋白质印迹法检测结果表明,LATS1转染组中β-catenin和E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P值均＜0.05),而N-cadherin、Twist、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平明显下调(P值均＜ 0.05).组织芯片免疫组织化学法检测结果显示,HNSCC组织中LATS1蛋白的表达水平较正常头颈部鳞状上皮组织和异型增生组织明显降低;细胞核中LATS1的表达在正常头颈部鳞状上皮组织、异型增生组织和HNSCC组织中依次下调(P＜0.05),而细胞质中LATS1的表达则依次上调(P＜0.05).HNSCC患者临床病理资料后分析发现,在HNSCC组织中细胞质LATS1的阳性表达率与淋巴结转移呈正相关性(P＜0.05).结论:LATS1可明显抑制HNSCC细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化.在HNSCC组织中,LATS1可能发生细胞核向细胞质的转位,且细胞质中LATS1的表达与淋巴结转移有关.

目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1 (zine fingerE box binding homeobox 1,ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制.方法:收集2013年1月至2018年1月云南省肿瘤医院结直肠外科手术切除的78例CRC组织标本及其癌旁组织标本,采用qPCR检测HCG11在CRC癌组织及细胞系中表达情况,以构建的HCG11敲降载体、miR-144-3p模拟物及抑制剂转染CRC细胞株SW480及SW620,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭情况.通过Wb及免疫荧光实验检测ZEB1及上皮间质特异蛋白(E-cadherin、Vimentin、α-catenin、Sox2、Nestin、Oct4及Nanog)的表达,通过双荧光素酶报告基因检测HCG11、miR-144-3p及ZEB1的靶向调控关系.建立小鼠移植瘤模型验证敲降HCG11后对小鼠移植瘤生长的抑制作用.结果:HCG11在CRC癌组织的表达显著高于癌旁组织(P＜0.01),其在多种CRC细胞系中表达水平明显高于正常肠上皮细胞(均P＜0.05);HCG11的表达与CRC患者肿瘤转移、临床分期及预后密切相关(P＜0.05或P＜0.01).敲降HCG11后显著抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化及干细胞转化(均P＜0.05).敲降HCG11显著上调miR-144-3p的表达水平(P＜0.05),过表达miR-144-3p可显著抑制ZEB1基因的表达(P＜0.05)及明显降低双荧光素酶活性(P＜0.05).结论:HCG11通过调控miR-144-3p上调ZEB1的表达,从而促进CRC的发生及转移,HCG11可作为CRC诊断及治疗的靶点.

目的:研究mir-141在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)单个核细胞表达的意义,证明其对纤维细胞增殖凋亡的影响及靶向锌指蛋白E盒结合同源异形盒1蛋白(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)的可能.方法:收集在我院40例COPD急性期,80例COPD稳定期病人和110例正常人对照的单个核细胞,RT-PCR检测mir-141并统计分析.构建mir-141 mimic,转染肺成纤维细胞,RT-PCR检测mir-141表达情况,CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Targetscan预测ZEB1与mir-141的靶向关系,并使用RT-PCR与western blot进行验证.结果:COPD急性期与稳定期单个核细胞mir-141的表达显著高于正常对照组,而在COPD急性期显著高于COPD稳定期.使用mir-141 mimic转染后,mir-141显著上调,细胞活性明显促进,细胞凋亡率下降.Targetscan数据库预测ZEB1与mir-141有结合位点,双荧光素酶实验证实ZEB1与mir-141存在结合位点结合.使用mir-141 mimic转染后,ZEB1 mRNA与蛋白表达均下调.结论:COPD中高表达的mir-141可能通过靶向结合ZEB1促进肺成纤维细胞增殖,抑制凋亡.