目的 检测膀胱癌中长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase antisense RNA 1,NNT-AS1)表达情况,研究其对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响及可能分子机制.方法 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测膀胱癌组织标本及细胞中LncRNA NNT-AS1表达情况;将膀胱癌细胞转染分为sh-NC组,sh-NNT-AS1组,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组和sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组.采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度值(A值);Transwell实验检测细胞迁移、侵袭穿膜数;细胞成球实验检测干细胞干性.检索starBase和TargetScan数据库,并通过双荧光素酶报告基因实验预测验证LncRNA NNT-AS1 和miR-582-5p,miR-582-5p与NCKAP1 的靶向结合关系.Western blot检测膀胱癌干细胞标志蛋白(CD44,ALDH1A1,Oct4,Nanog)及Hippo-YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达灰度值.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA NNT-AS1表达水平(0.34±0.07 vs 1.15±0.21)明显升高,差异有统计学意义(t=16.364,P＜0.001).与人正常膀胱上皮SV-HUC-1 细胞(1.00±0.01)相比,膀胱癌细胞T24,5637,UM-UC-3和TCC-SUP中LncRNA NNT-AS1 表达(6.03±0.17,4.66±0.36,5.47±0.26,3.02±0.20)明显升高,差异有统计学意义(t=17.472～51.160,均P＜0.001).与sh-NC组相比,在24,48和72 h时sh-NNT-AS1组细胞增值能力(A值)均显著降低(0.80±0.01 vs 1.07±0.06,1.18±0..07 vs 1.83±0.03,1.89±0.07 vs 2.53±0.06),差异有统计学意义(t=7.688,14.783,12.024,均P＜0.05);sh-NNT-AS1 组细胞迁移穿膜数(55.00±2.65 个 vs 354.30±7.84 个)、细胞侵袭穿膜数(45.67±2.33 个 vs 303.00±9.07 个)及膀胱癌干细胞成球数(20.85±2.17 个 vs 41.35±3.67 个)显著降低,差异具有统计学意义(t=-62.641,-47.596,8.328,均P＜0.001).与sh-NC组相比,sh-NNT-AS1组细胞中CD44(0.04±0.01 vs 1.12±0.02),ALDH1A1(0.23±0.01 vs 1.16±0.05),Oct4(0.17±0.02 vs 1.10±0.04),Nanog(0.49±0.03 vs 1.24±0.03)的蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=83.656,31.591,36.019,30.619,均P＜0.001).与si-NC组相比,sh-NNT-AS1组CD44+CD133+细胞比例(9.30%±0.79%vs 88.50%±2.77%)明显降低,差异有统计学意义(t=-47.624,P＜0.001).双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-582-5p为LncRNA NNT-AS1靶基因,NCKAP1为miR-582-5p靶基因;LncRNA NNT-AS1 靶向调控miR-582-5p/NCKAP1 轴.与sh-NNT-AS1 组相比,在 24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞增值能力(A值)均明显升高(0.98±0.03 vs 0.73±0.06,1.74±0.04 vs 1.22±0.05,2.33±0.16 vs 1.69±0.14),差异有统计学意义(t=5.977～11.628,均P＜0.001).与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,在 24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1 组细胞增值能力(A值)显著降低(0.69±0.04,1.01±0.07,1.39±0.08),差异有统计学意义(t=7.877～16.323,均P＜0.001).与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞迁移穿膜数(322.31±28.45个 vs 81.42±13.22 个)、细胞侵袭穿膜数(316.07±30.21 个 vs 92.13±12.65 个)及膀胱癌干细胞成球数(38.55±2.20个 vs 18.98±1.16 个)显著增加,差异具有统计学意义(t=15.115,13.158,14.592,均P＜0.001).与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞CD44(1.05±0.08 vs 0.10±0.01),ALDH1A1(1.20±0.16 vs 0.22±0.02),Oct4(1.32±0.14 vs 0.19±0.03),Nanog(0.97±0.12 vs 0.15±0.04),YAP(1.29±0.11 vs 0.42±0.07)和TAZ(1.41±0.16 vs 0.35±0.05)蛋白表达灰度值均显著增加,差异具有统计学意义(t=10.650～21.243,均P＜0.001).与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1 组细胞迁移穿膜数(65.33±12.60 个)、细胞侵袭穿膜数(71.08±15.19 个)、膀胱癌干细胞成球数(11.36±1.05 个)均显著降低,差异具有统计学意义(t=16.125,14.395,21.365,均P＜0.001).与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞CD44(0.25±0.05),ALDH1A1(0.61±0.11),Oct4(0.22±0.08),Nanog(0.44±0.07),YAP(0.25±0.09)和TAZ(0.30±0.04)蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=6.412～17.889,均P＜0.001).结论 膀胱癌中LncRNA NNT-AS1 表达上调,其对膀胱癌细胞增殖、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响,可能是通过调控miR-582-5p/NCKAP1 分子轴,激活Hippo-YAP/TAZ信号通路完成.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(NNT-AS1)在非小细胞肺癌(NSCLC)进展中的潜在机制.方法 30例NSCLC组织和癌旁正常组织获自于2020年6-12月在空军军医大学第二附属医院接受手术切除的NSCLC患者,NSCLC细胞系H1650、A549、H1299、H2170以及人肺上皮细胞BEAS-2B常规培养.将A549细胞分为siRNA阴性对照(si-con)组、靶向NNT-AS1的siRNA(si-NNT-AS1)组、miR-142-3p抑制物阴性对照(si-NNT-AS1+in-miR-con)组、miR-142-3p 抑制物(si-NNT-AS1+in-miR-142-3p)组、锌指 E 结合蛋白 1(ZEB1)阴性对照空载(si-NNT-AS1+vector)组和ZEB 1过表达质粒(si-NNT-AS1+ZEB1)组.BALB/c雄性裸小鼠随机分为sh-NC组(n=5)和sh-NNT-AS1组(n=5),分别将转染sh-NC或sh-NNT-AS1慢病毒的A549细胞皮下注射到裸小鼠背部.35 d后切除肿瘤,测量肿瘤组织重量和体积.qRT-PCR检测NSCLC组织和细胞中NNT-AS1、miR-142-3p和ZEB1水平;双荧光素酶报告基因实验探究3个因子之间的作用关系.细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖,集落形成实验测定集落形成数量,Tranwell测定迁移和侵袭细胞数量,肿瘤异种移植实验检测体内肿瘤生长情况.结果 与癌旁正常组织比较,NSCLC组织中 NNT-AS1 和ZEB1 mRNA上调[(3.28±0.26)vs.(1.05±0.04),(2.65±0.22)vs.(1.04±0.06)],miR-142-3p下调[(0.43±0.03)vs.(1.02±0.08)],差异均有统计学意义(P均＜0.05).与人肺上皮细胞 BEAS-2B 比较,NSCLC 细胞系 H1650、A549、H1299、H2170 中 NNT-AS1 和 ZEB1 mRNA 上调,miR-142-3p 下调,差异均有统计学意义(P均＜0.05);且A549细胞中NNT-AS1、miR-142-3p和ZEB1 mRNA表达差异变化最大,因此选择A549细胞继续进行后续的探究.与miR-NC组比较,A549细胞中miR-142-3p转染后降低了 NNT-AS 1-WT或ZEB 1-WT的荧光素酶活性,差异均有统计学意义(P均＜0.05).与si-con组比较,si-NNT-AS1组A549细胞中NNT-AS1和ZEB1 mRNA、蛋白表达降低,miR-142-3p表达增高,差异均有统计学意义(P均＜0.05);与si-NNT-AS 1+in-miR-con组比较,si-NNT-AS1+in-miR-142-3p组A549细胞中ZEB1 mRNA和蛋白表达升高,miR-142-3p表达降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);与si-NNT-AS1+vector组比较,si-NNT-AS1+ZEB1组A549细胞中ZEB1 mRNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P均＜0.05).与si-con组比较,si-NNT-AS 1组A549细胞活力[(0.42±0.04)vs.(0.84± 0.07)]、集落形成数量[(54.23±5.64)个vs.(117.36±11.24)个]、迁移和侵袭细胞数量[(72.16±6.54)个vs.(164.23± 12.34)个和(65.23±5.27)个vs.(123.18±10.21)个]均下调,细胞凋亡率[(21.69±2.54)％vs.(7.54±0.72)％]上调,差异均有统计学意义(P 均＜0.05);与 si-NNT-AS 1+in-miR-con 组比较,si-NNT-AS1+in-miR-142-3p 组 A549 细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭细胞数量均上调,细胞凋亡率下调,差异均有统计学意义(P均＜0.05);与si-NNT-AS1+vector组比较,si-NNT-AS 1+ZEB1组A549细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭细胞数量均上调,细胞凋亡率下调,差异均有统计学意义(P均＜0.05).体内实验表明,与sh-NC组比较,sh-NNT-AS 1组肿瘤组织中NNT-AS 1和ZEB1 mRNA表达降低,miR-142-3p表达增高,肿瘤体积、重量以及增殖细胞核抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达显著降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 沉默NNT-AS1抑制NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与miR-142-3p/ZEB1轴有关.

目的 观察胃癌组织中长链非编码RNA (LncRNA)烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)的表达并探讨其意义.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测77例份胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中LncRNA NNT-AS1的表达,并分析LncRNA NNT-AS1表达与胃癌患者临床病理特征的关系.结果 胃癌及癌旁正常组织中LncRNA NNT-AS1相对表达量分别为0.509 ±0.110、0.103±0.004,二者比较差异有统计学意义(t=32.366,P=0.000).LncRNA NNT-AS1在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度、TNM分期、脉管侵袭、淋巴结转移相关(P均＜0.05),而与患者年龄、性别、神经侵袭无关(P均＞0.05).胃癌组织中LncRNA NNT-AS1表达较低者生存率与生存时间均高于LncRNA NNT-AS1表达较高者(P均＜0.05).结论 胃癌组织中LncRNA NNT-AS1呈异常高表达,LncRNA NNT-AS1可能是胃癌发生及恶性进展的重要因素,检测LncRNA NNT-AS1表达有助于患者预后判断.

烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1 (nicotinamide nucleotide transhydrogenase-antisense RNA1,NNT-AS1)作为一种新近发现的在肿瘤中异常表达的长链非编码RNA,其在肿瘤中作用的相关研究也获得了突破性进展.现有研究已证实NNT-AS1广泛参与多种肿瘤的发生和发展,其对肿瘤的诊断、治疗都有重要意义.全文将对NNT-AS1与肿瘤的研究进展作一综述.

目的 研究卵巢癌细胞中NNT-AS1的表达情况,探索NNT-AS1沉默后对卵巢癌细胞增殖、凋亡及转移的影响.方法 使用qRT-PCR检测卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞的NNT-AS1表达情况.随后将卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞分别分为siNNT-AS1组(NNT-AS1沉默组)、siNC组(阴性对照组)和control组(对照组),siNNT-AS1组和siNC组分别转染NNT-AS1沉默质粒siNNT-AS1和阴性对照质粒siNC,control组给予空载体.72 h后采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭能力,并采用比色法检测caspase-3、caspase-9活力.结果 卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞中NNT-AS1表达均低于正常卵巢细胞T29,差异有统计学意义(P<0.05).与siNC组及control组HO-8910细胞系、SK-OV-3细胞系相比,siNNT-AS1组24,48,72 h的细胞增殖活性均增高(均P<0.05),细胞凋亡率均下降(均P<0.05),细胞侵袭能力均升高(均P<0.05),caspase-3、caspase-9活性均降低(均P<0.05).结论 NNT-AS1在人卵巢癌HO-8910、SK-OV-3细胞中表达降低,NNT-AS1表达下降可能与卵巢癌细胞的增殖和侵袭增加及凋亡下降有关;NNT-AS1可能通过抑制内源性途径进而调控卵巢癌细胞凋亡.

目的 探讨长链非编码RNA (LncRNA)烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在膀胱癌组织中的表达水平及其与预后关系.方法 选取广州医科大学附属中医医院2010年1月-2014年12月诊治的膀胱癌患者的癌组织及对应癌旁正常组织各73例标本进行研究.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测膀胱癌癌组织及对应癌旁正常组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平;分析膀胱癌癌组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平与膀胱癌患者临床病理特征、预后的关系;Pearson法分析LncRNA NNT-AS1表达水平与HMGB1相关性.结果 膀胱癌患者癌组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平均明显高于癌旁正常组织(t=8.769、9.423,P均＜0.05);膀胱癌癌组织LncRNA NNT-AS1、HMGB1表达水平与膀胱癌患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度相关(P＜0.05);膀胱癌癌组织LncRNA NNT-AS1表达水平与HMGB1呈正相关(r=0.394,P＜0.05);膀胱癌患者LncRNA NNT-AS1、HMGB1高表达组术后60个月生存率均明显低于LncRNA NNT-AS1、HMGB1低表达组(P均＜0.05).结论 LncRNA NNT-AS1、HMGB1在膀胱癌癌组织中均呈高表达,两者均与膀胱癌患者预后有关,有助于评估膀胱癌患者预后情况.

目的 分析长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(lncRNA NNT-AS1)、微小RNA-424(miR-424)在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集60例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织和40例正常子宫内膜组织,检测lncRNA NNT-AS1、miR-424的相对表达水平,分析二者的相对表达水平与患者临床病理特征及预后的关系,以及二者的相关性.结果 lncRNA NNT-AS1在子宫内膜癌组织中高表达,并与国际妇产科联盟(FIGO)分期、脉管浸润和淋巴结转移相关(P<0.05).miR-424在子宫内膜癌组织中低表达,与FIGO分期、肌层浸润程度、脉管浸润和淋巴结转移相关(P<0.05).lncRNA NNT-AS1高表达、miR-424低表达的患者5年生存率较低(P<0.05).lncRNA NNT-AS1高表达和miR-424低表达是患者预后不良的影响因素.lncRNA NNT-AS1相对表达水平与miR-424呈负相关(r=-0.368,P<0.05).结论 ln-cRNA NNT-AS1和miR-424在子宫内膜癌中均异常表达,且与子宫内膜癌患者不良病理特征和预后相关.

目的 探讨难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)患儿血清长链非编码核糖核酸(long non-coding ribonucleic acid,LncRNA)肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)、烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase-antisense RNA1,NNT-AS1)检测的临床意义.方法 选择2018年1月1日～2021年1月1日辽宁省健康产业集团阜新矿总医院收治的200例肺炎支原体肺炎患儿,其中43例为RMPP(RMPP组),157例为普通肺炎支原体肺炎(普通肺炎组),另选择100例健康儿童为对照组.检测血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平以及炎性因子[C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]水平.分析血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平与炎性因子水平的相关性.收集临床资料,分析影响RMPP发病的影响因素,比较不同疗效RMPP患儿血清LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达水平的差异.结果 RMPP组、普通肺炎组和对照组血清LncRNA MALAT1(3.26±0.85,1.32±0.41和1.05±0.37)和LncRNA NNT-AS1(3.38±0.92,1.41±0.40和1.06±0.39)水平比较差异均有统计学意义(F=335.693,335.828,均P<0.05),血清CRP(45.24±2.01 mg/L,19.02±3.27 mg/L和3.26±0.77 mg/L),PCT(1.58±0.52μg/L,0.82±0.16μg/L和0.31±0.09μg/L),IL-8(42.77±8.84μg/L,26.35±5.91μg/L和13.02±3.79μg/L)和TNF-α(9.22±2.61μg/L,5.02±1.49μg/L和3.32±0.96μg/L)水平比较差异均有统计学意义(F=4207.164,457.187,410.300,214.875,均P<0.05).Pearson相关性分析结果显示血清LncRNA MALAT1,LncRNA NNT-AS1表达水平均与CRP,PCT,IL-8,TNF-α水平呈正相关(r=0.715～0.922,均P<0.05).Logistic逐步回归分析结果显示肺大片实变影[OR(95％CI)=2.212(1.396～3.506)]、CRP高表达[OR(95％CI)=2.111(1.313～3.392)]、LncRNA MALAT1高表达[OR(95％CI)=1.826(1.189～2.805)]、LncRNA NNT-AS1高表达[OR(95％CI)=1.758(1.149～2.689)]是RMPP发病的危险因素(均P<0.05).43例RMPP患儿治疗有效38例(有效组),无效5例(无效组),有效组血清LncRNA MALAT1(3.16±0.24)和LncRNA NNT-AS1(3.29±0.20)表达水平低于无效组(4.02±0.09,4.06±0.10),差异有统计学意义(t=7.869,8.406,均P<0.05).结论 LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1可能通过调节炎症反应参与RMPP发病,检测LncRNA MALAT1和LncRNA NNT-AS1表达可为RMPP治疗疗效评估提供参考.

目的 分析长链非编码RNA(LncRNA)烟酰胺核苷酸反义转氢酶RNA1(NNT-AS1)及微小RNA-22(miR-22)在膀胱尿路上皮癌(BUC)组织中的表达以及二者与患者预后的关系.方法 选取本院收治的BUC患者39例,留取患者术中切除的癌组织及癌旁正常组织;另选取人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1作为对照组,人膀胱癌细胞株T24作为BUC细胞组.采用qRT-PCR法检测细胞及组织中LncRNA NNT-AS1、miR-22的表达水平,分析二者与患者临床病理特征的关系;采用Pearson法分析癌组织中LncRNA NNT-AS1、miR-22的相关性,Kaplan-Meier法评估LncRNA NNT-AS1、miR-22表达与BUC患者总生存率的关系.结果 BUC细胞组中LncRNA NNT-AS1水平高于对照组(P<0.05),miR-22水平低于对照组(P<0.05).BUC患者癌组织中LncRNA NNT-AS1水平高于癌旁正常组织(P<0.05),miR-22水平低于癌旁正常组织(P<0.05).LncRNA NNT-AS1、miR-22水平与患者肿瘤浸润、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05),且miR-22水平与患者临床分期有关(P<0.05).癌组织中LncRNA NNT-AS1水平与miR-22水平呈负相关(P<0.05).LncRNA NNT-AS1高表达组总生存率低于LncRNA NNT-AS1低表达组(P<0.05);miR-22高表达组总生存率高于miR-22低表达组(P<0.05).LncRNA NNT-AS1高表达+miR-22低表达患者总生存率低于LncRNA NNT-AS1低表达+miR-22高表达患者及其他患者,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 LncRNA NNT-AS1、miR-22在BUC细胞及癌组织中异常表达,二者呈负相关,且均与患者临床病理特征及预后有关.

目的 研究干扰长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(LncRNA NNT-AS1)表达减轻非小细胞肺癌(NSCLC)细胞对紫杉醇(TAX)耐药的机制.方法 构建NSCLC TAX耐药细胞系(A549/TAX),检测正常、亲本、耐药细胞中LncRNA NNT-AS1的表达情况,并验证miR-582-5p与LncRNA NNT-AS1、HMGB2的靶向关系;体外培养A549/TAX细胞,观察单独干扰LncRNA NNT-AS1或同时干扰LncRNA NNT-AS1、miR-582-5p对细胞中LncRNA NNT-AS1、miR-582-5p、HMGB2 mRNA及其蛋白表达以及细胞活力、克隆形成、凋亡的影响;通过裸鼠成瘤实验观察干扰LncRNA NNT-AS1对肿瘤生长及肿瘤组织中miR-582-5p、HMGB2 mRNA及其蛋白表达的影响.结果 与正常细胞比较,LncRNA NNT-AS1在亲本、耐药细胞中均呈高表达(P＜0.05),且有递增趋势.经验证,miR-582-5p与LncRNA NNT-AS1、HMGB2均存在靶向关系.干扰LncRNA NNT-AS1表达后,A549/TAX细胞中LncRNA NNT-AS1、HMGB2 mRNA及其蛋白的表达水平以及细胞活力、克隆形成数均显著降低,而miR-582-5p的表达水平、细胞凋亡率均显著升高(P＜0.05);同时干扰miR-582-5p表达可使上述改变得以逆转(P＜0.05).干扰肿瘤细胞中LncRNA NNT-AS1的表达后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积和肿瘤质量均显著降低,miR-582-5p的表达水平显著升高,HMGB2 mRNA及其蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.05).结论 干扰LncRNA NNT-AS1的表达可靶向上调miR-582-5p的表达并下调HMGB2的表达,进而减轻NSCLC TAX化疗耐药.