目的:探讨体内邻苯二甲酸二丁酯（di-n-butyl phthalate，DBP）暴露水平对不孕患者早期助孕结局的影响及其对小鼠早期胚胎发育的影响。方法:本研究选取2019年2月至10月期间在河南省人民医院生殖中心就诊的因输卵管因素行体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）治疗的患者，根据病历号尾号抽取单号的112例不孕患者为研究对象，应用高效液相色谱串联质谱检测尿液中DBP代谢产物邻苯二甲酸单丁酯（mono-n-butyl phthalate，MBP）的浓度，采用多元回归模型分析尿液中MBP水平与不孕患者受精率、优质胚胎率及囊胚形成率等早期助孕结局的关系。同时将40只3周龄清洁级ICR雌性小鼠简单随机抽样分为对照（玉米油）组和低、中、高剂量DBP染毒组（300 mg/kg、600 mg/kg、1200 mg/kg）四组，每组10只。将各组雌鼠促排卵与非染毒雄鼠合笼后，取受精卵，比较各组间胚胎卵裂率、囊胚形成率和着床位点的差异。 结果:在控制了混杂因素后，患者尿液中MBP浓度与受精率、优质胚胎数、囊胚形成数及囊胚形成率呈负相关（ P=0.01、 P=0.04、 P=0.03、 P=0.05）。DBP低剂量组、中剂量组、高剂量组的小鼠受精后胚胎卵裂率［58.38%（115/197）、43.42%（99/228）、36.60%（71/194）］、囊胚形成率［54.78%（63/115）、44.44%（44/99）、39.44%（28/71）］及胚胎着床位点数（12.20±3.03、11.80±2.68、11.60±2.41）明显低于对照组小鼠［87.12%（142/163）， P<0.001；86.62%（123/142）， P<0.001；16.80±0.84， P<0.001）。DBP低剂量组卵裂率高于中剂量组、高剂量组，差异有统计学意义（ P=0.002， P<0.001）。DBP低剂量组囊胚形成率高于DBP高剂量组，差异有统计学意义（ P=0.042）。DBP染毒的三组小鼠之间胚胎着床位点数差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:DBP暴露与不孕女性临床结局存在相关性，且DBP暴露对小鼠早期胚胎发育产生毒性损伤。

目的 探讨镉对雌性子代大鼠一般生殖毒性父系遗传的代际与跨代效应.方法 将72只健康成年SPF级SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(生理盐水)组和0.5、2、8mg/kg氯化镉染毒组,每组18只,以雌雄比为2∶1交配.孕期全程采用灌胃方式进行染毒.F1代雄性大鼠常规饲养至成年后与健康雌性大鼠交配,正常饲养获F2代.F2代雄性大鼠常规饲养至成年后与健康雌性大鼠交配,得F3代.观察F2、F3代雌性大鼠体重、性别比例及阴道开口时间变化情况.结果 与对照组相比,在F2代中,仅2 mg/kg镉染毒组雌性大鼠的出生体重升高,差异有统计学意义(P＜0.05);8 mg/kg镉染毒组雌性大鼠在PND14和PND21出现体重降低,差异有统计学意义(P＜0.05);0.5、8 mg/kg镉染毒组雌性大鼠在PND7-PND14阶段的体重增长量较对照组下降,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,在F3代中,0.5、2、8 mg/kg镉染毒组各时点体重均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);2 mg/kg镉染毒组雌性大鼠在PND7-PND14阶段的体重增长量较对照组下降,差异有统计学意义(P＜0.05).各剂量氯化镉染毒组F2、F3代大鼠的性别比例差异均无统计学意义(F2代:x2=3.17,P=0.37;F3代:x2=1.09,P=0.78).与对照组相比,F2代雌性大鼠的阴道初次开口时间差异无统计学意义(P＞0.05);F3代雌性大鼠中2 mg/kg镉染毒组的阴道初次开口时间提前,差异有统计学意义(P＜0.05).F2代中,仅有2 mg/kg镉染毒组雌性大鼠的卵巢系数较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05);F3代中,各剂量组卵巢脏器系数与对照组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 妊娠期镉暴露对F2和F3代大鼠具有一般性毒性,且可能存在跨代效应,其对子代雌性大鼠的性腺发育毒性应进一步探讨.

为研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将 50 只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量 0.5、1、2 倍组(含雷公藤甲素3.75、7.5、15 μg·kg-1·d-1),每组 10 只,首次免疫后当日开始灌胃给药,每天 1 次,给药 42 d.分别于第 21、42 天取材,计算子宫和卵巢脏器指数;显微镜下观察子宫和卵巢组织病理形态学变化;ELISA法检测卵巢组织匀浆中雌二醇(estradiol,E2)及细胞色素P450A1(aromatase,CYP19A1)水平;免疫组织化学法检测卵巢组织中通路相关蛋白转化生长因子 β3(transforming growth factor β3,TGFβ3)、细胞信号传导分子 3(mothers against decapentaplegic homolog 3,Smad3)及肾上腺核受体 1(steroido-genic factor-1,SF-1)表达水平.并在体外建立中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞系,经TP给药(30、60、120 nmol·L-1)24 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TGFβ3、Smad3 及SF-1蛋白表达,并通过免疫荧光检测SF-1因子入核情况.结果表明,与模型组比较,TP各给药组在给药21、42 d子宫腺体数、总卵泡数、成熟卵泡数、黄体数均有降低趋势,但差异并无统计学意义,仅 2 倍TP在给药 42 d时可显著增加闭锁卵泡数;TP 3.75 μg·kg-1·d-1在给药 21 d 即可显著降低 E2 水平,但对雌激素合成限速酶 CYP19A1 无显著影响,但可显著降低卵巢组织TGFβ3、Smad3 因子表达,且无论给药 21 d还是 42 d,TP 7.5、15 μg·kg-1·d-1均显著降低SF-1 因子表达.TP可显著促进体外卵巢细胞凋亡,给药 24 h后,凋亡主要集中在凋亡晚期;且 60 nmol·L-1 TP即可显著降低TGFβ3、Smad3 及SF-1 蛋白表达,并呈剂量依赖性.综上所述,2 倍以下临床等效剂量的TP灌胃 21、42 d并未引起CIA大鼠子宫、卵巢组织明显的生殖损伤,仅在 2 倍临床等效剂量给药 42 d时,闭锁卵泡数发生显著变化.TP通过抑制TGFβ3/Smad3/SF-1 通路表达发挥体内生殖靶器官及体外卵巢细胞生殖毒性作用.

目的 探讨活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢功能及妊娠结局的影响.方法 100只雌性SD大鼠适应性喂养7 d,取动情周期正常的大鼠98只,按照体质量随机分为空白组(n=14)、假手术组(n=14)、供体组(n=12)、受体组(n=58).应用同种异体子宫内膜移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功的56只受体组大鼠按照体质量随机分为模型组及活血消异方低、中、高剂量组,每组14只.活血消异方低、中、高剂量组分别予5.86、11.72、23.44 g/kg活血消异方灌胃,空白组、假手术组、模型组予蒸馏水灌胃,连续15 d.每组按体质量随机选取6只大鼠取腹主动脉血,酶联免疫吸附测定法检测血清抗米勒管激素(AMH)含量;剩余大鼠每组按体质量随机选取6只行高频小动物超声检查,测定卵巢体积、卵巢动脉血供(阻力指数和搏动指数),并行卵泡计数.雌鼠与雄鼠以2:1合笼,观察妊娠率、活胎数、死胎数、吸收胎数,测量子宫连胎质量,测量活胎胎盘质量、胎鼠质量、身长、尾长,并对活胎进行骨骼及内脏畸形鉴定.结果 各组大鼠血清AMH含量、卵巢体积比较差异无统计学意义.与模型组比较,空白组,假手术组,活血消异方低、中、高剂量组大鼠卵泡计数均增加;与活血消异方低剂量组比较,空白组、活血消异方中剂量组大鼠卵泡数目均增加(P<0.05).与模型组比较,空白组,假手术组,活血消异方低、中、高剂量组卵巢动脉血流阻力指数与搏动指数均降低(P<0.05).各组间大鼠妊娠率比较差异无统计学意义.与模型组、活血消异方低剂量组比较,空白组,假手术组,活血消异方中、高剂量组活胎数和子宫连胎质量均明显增加(P<0.05).各组间死胎数、吸收胎数,以及各组活胎胎盘质量、胎鼠质量、身长、尾长比较差异无统计学意义.各组活胎胎鼠均未见内脏、骨骼畸形.结论 子宫内膜异位症模型大鼠卵巢动脉血流灌注不足,卵泡计数减少,影响卵巢功能,从而导致活胎数降低;而应用活血消异方后,可改善卵巢血供,增加卵泡计数,进而增加活胎数,且以活血消异方中、高剂量增加活胎数效果更为明显,无生殖毒性.

微塑料(microplastics,MPs)是指直径小于5 mm的塑料.作为一种新型环境污染物,MPs可以通过呼吸道、消化道和皮肤进入机体,并在肠道、肝脏和卵巢等多个组织中沉积.MPs暴露对女性生殖系统具有毒性作用,进入卵巢的MPs可对卵泡发育、卵母细胞质量和生殖内分泌激素水平产生不良影响,从而降低雌性生育力.这些负面影响主要是通过凋亡、氧化应激以及调控下丘脑-垂体-性腺轴等机制来实现.此外,近年研究还发现MPs可以进入胎盘并导致胎盘代谢异常、母胎界面免疫失衡和胎盘结构受损.而母源MPs暴露后,MPs可以通过胎盘屏障进入子代体内,对子代的神经、消化和生殖等系统产生不良影响.鉴于MPs的毒性以及在环境中的持久性,应在日常生活中针对性地减少MPs的暴露,预防或降低MPs对人类的危害.

三唑磷作为一种广泛使用的有机磷杀虫剂,该药物在自然水体中的残留可对非靶标生物产生潜在威胁,文章旨在探究三唑磷对斑马鱼的毒性效应.研究将3月龄雌性斑马鱼(Danio rerio)持续暴露于环境相关浓度的三唑磷(10 μg/L)21d,然后与健康雄鱼自然受精产卵;通过测定雌鱼生殖力、亲代与子代的氧化应激及子代胚胎发育相关指标,评估三唑磷对亲代雌鱼及其子代的毒性效应.主要研究结果:亲代雌鱼经10 μg/L三唑磷暴露后,产卵量显著提高(P＜0.05),肝脏内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性显著降低(P＜0.05),丙二醛(MDA)含量显著增加(P＜0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和羧酸酯酶(CarE)活性均显著增强(P＜0.05);所产子代胚胎受精率、受精卵直径、胚胎心率和初孵仔鱼体长均显著降低(P＜0.05),仔鱼畸形率显著增加(P＜0.05),孵化率无显著性差异;仔鱼AChE与SOD活性呈下降趋势但差异不显著,MDA含量显著增加(P＜0.05),GPx与GST活性显著降低(P＜0.05),CarE活性显著提高(P＜0.05).以上研究结果表明环境浓度三唑磷21d暴露可提高雌性斑马鱼的生殖力,诱导亲代及子代氧化应激反应,并对子代胚胎发育过程产生不良影响.

环境内分泌干扰物(EDCs)又称环境激素,是指可扰乱人类和动物激素水平、干扰内分泌系统功能的一类外源性化学物质.塑化剂属于一种应用广泛的EDCs,常用于增加塑料制品的可塑性,但随着塑料的老化和磨损,它们会被释放到环境中,并经消化道、皮肤等途径进入动物机体后发挥类雌激素作用,产生明显的生殖毒性.环境中残留的塑化剂浓度通常较低,不同于高剂量时造成生殖系统急性损伤,低剂量塑化剂的生殖毒性常因不引起肉眼可见损伤而被长期忽略.但近年来有关人类和小鼠的越来越多的研究表明,低剂量的塑化剂可通过干扰母性行为而发挥生殖毒性.孕期接触塑化剂会导致产后母性行为异常,且其雌性后代成年后对幼崽的护理、授乳等行为也明显减少,并可持续数代,严重破坏动物繁育过程,影响新生幼仔的健康和福利,但其中所涉及的机制目前尚缺系统性总结.现代生产和生活模式下塑料、橡胶等制品广泛使用,人类及动物的低剂量塑化剂持续暴露风险在不断增加,因此,系统性回顾、总结低剂量塑化剂对母性行为的影响显得尤为重要.本文综述了常见塑化剂对母性行为干扰效应方面的研究进展,塑化剂主要通过诱导下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴氧化应激损伤、HPO轴DNA甲基化重编程、甲状腺系统失衡及肠道微生物紊乱等潜在途径干扰母性行为.本文可为后续开展塑化剂等环境激素对家养动物母性行为干扰效应的相关研究提供新的切入点.

目的 研究邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)是否诱导人卵巢颗粒细胞系KGN细胞铁死亡并影响其增殖.方法 取对数增长期的人卵巢颗粒细胞系KGN细胞,给予不同浓度(0、100、200、400、800、1 600 μmol/L)MEHP处理24 h.通过普通光镜观察不同浓度MEHP处理后KGN细胞形态的改变;用CCK-8检测MEHP对细胞活力和增殖能力的影响;采用蛋白免疫印迹(WB)观察铁死亡相关蛋白(ACSL4、GPX4、SLC7A11、FTH1)在KGN细胞中的表达情况;使用细胞铁含量检测试剂盒、丙二醛(MDA)含量检测试剂盒、活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)及超氧化物阴离子荧光探针(DHE)分别检测对照组和400 μmol/L MEHP处理组细胞的铁含量、MDA、ROS和超氧化物阴离子水平.结果 (1)光镜观察显示,400 μmol/L及以上MEHP处理使KGN细胞皱缩变圆,形态异常.(2)CCK-8结果显示400 μmol/L及以上MEHP处理抑制细胞增殖,且具有剂量依赖性(P＜0.05).(3)100、200 μmol/L MEHP处理组KGN细胞铁死亡相关蛋白表达无显著改变(P＞0.05);400 μmol/L MEHP 处理组 KGN 中 ACSL4 蛋白表达水平显著增加(P＜0.05),而 GPX4、SLC7A11、FTH1 蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).(4)400 μmol/L MEHP处理使得KGN细胞的铁含量、MDA水平显著上升(P＜0.05),细胞ROS、超氧化物阴离子荧光染色强度明显增加.结论 MEHP诱导KGN细胞铁死亡,抑制细胞增殖能力,但MEHP诱导铁死亡的具体作用机制还需进一步探讨.

目的 评价新橙皮苷对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性.方法 200只大鼠(♀♂各半)根据性别和体质量采用分层随机法分成对照(0.5％羧甲基纤维素钠)组、环磷酰胺(20 mg·kg-1)组、新橙皮苷低、中、高(0.45,0.9和1.8 mg·kg-1)组.雄鼠于交配前4周开始给药至交配期结束.雌鼠于交配前2周开始给药至妊娠第6天.实验期间每周测定动物体质量.交配结束后,雄性动物对附睾尾精子进行精子检查;妊娠第15天,对雌性动物子宫内容物包括黄体、着床腺、活胎、死胎及吸收胎、胎盘等进行检查.结果 给药期间,各组别动物一般观察均未见明显异常.与对照组相比,各给药组雄鼠交配前体质量、脏器重量、精子计数及精子活力数值未见显著性差异(P＞0.05);对照组和新橙皮苷3个剂量组精子总畸形率均在2％以内.新橙皮苷各给药组雌鼠体质量、脏器重量、黄体数、着床腺、活胎数、吸收胎数、死胎数与对照组相比均无显著性差异(P＞0.05).病理组织学检查结果显示,雄鼠睾丸、附睾、前列腺和精囊腺未见给药相关改变,对照组和新橙皮苷组雌鼠子宫和阴道可见明显孕后变化.结论 新橙皮苷对大鼠生育力及早期胚胎发育未见明显毒性.

为探明邻苯二甲酸二丁酯(DBP)宫内暴露对雌性仔鼠卵巢脂质过氧化水平的影响及维生素C(Vit C)的抗氧化应激作用.本研究将20只Wistar孕鼠随机分为5组,分别为高(500 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量DBP染毒组以及高(500 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量DBP+Vit C(125 g/L)干预组和对照(玉米油)组,每组4只.自妊娠第1～19天,每天1次灌胃染毒DBP (10 mL/kg);采用自由饮水方式进食Vit C(约40 mL/d).待雌性仔鼠出生21d时,取其卵巢组织,称重,并测定MDA、GSH含量和GSH-Px、SOD、CAT活性.研究发现,与对照组相比,高、低剂量DBP染毒组MDA含量均明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活性均明显降低(P＜0.05).高、低剂量DBP+Vit C干预组的仔鼠卵巢组织中MDA含量与相同剂量DBP染毒组相比显著下降,GSH-Px、SOD、CAT活性显著升高(p＜0.05).综上所述,DBP宫内暴露可致雌性仔鼠卵巢组织产生脂质过氧化反应,诱导氧化应激,造成潜在生殖毒性,抗氧化剂Vit C对于DBP所致生殖系统的氧化损伤具有一定的保护作用.这为进一步开展DBP生殖发育毒性的机制研究和预防干预提供理论依据.