目的:了解烟台地区非O1/O139群霍乱弧菌致病性现状。方法:分别于2020年7月和11月、2021年的1月和4月对烟台市某两条河入海口采集样本32份，获得22株非O1/O139群霍乱弧菌分离菌株，采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对分离菌株进行分子分型，采用聚合酶链式反应（PCR）方法对该22株分离菌株的毒力基因 ctxA、 ctxB、 ace、 cep、 zot、 rtxA、 hlyA、 toxR、 tcpA和 cri进行检测分析。 结果:22株非O1/O139群霍乱弧菌菌株间的条带相似度为23.0%~100.0%，分为17个PFGE型，呈高度的多态性带型分布。22株非O1/O139群霍乱弧菌分离株主要携带3种毒力基因（ rtxA、 tcpA和 zot），其中携带 rtxA和 tcpA最多，均为17株，其次是 zot，共14株。14株菌株同时携带 rtxA、 tcpA和 zot，5株不携带上述毒力基因。 结论:烟台地区入海口流行的非O1/O139群霍乱弧菌株污染情况多样化，主要携带具有黏附、毒素以及损伤小肠表皮细胞等方面的致病基因。

目的:分析霍乱弧菌O1血清群El Tor产毒株基因组的重组特征。方法:在美国国立生物技术信息中心数据库中，选取分离时间从1937—2015年的292株霍乱弧菌O1血清群El Tor菌株完成图序列或草图序列，以菌株N16961的基因组序列为参照，使用snippy软件获得菌株的全基因组比对信息，利用ClonalFrameML软件对数据进行重组分析，比较大小染色体间重组数目及重组区域总长度的差异，以及不同分离地区菌株的基因组重组片段数目和总长度的差异。使用KOBAS分析工具对重组热点基因进行基因本体富集分析。结果:292株霍乱弧菌菌株中，发生基因重组163株（55.8%）；其中，归一化处理的小染色体重组片段数目 M（ P 25， P 75）为4.7×10 -6（9.3×10 -7，2.0×10 -5），大于大染色体[2.4×10 -6（3.4×10 -7，5.7×10 -6）]（ P<0.001）；小染色体重组区域占小染色体长度的比例 M（ P 25， P 75）7.1%×10 -5（3.7%×10 -6，4.8%×10 -4），大于大染色体[2.2%×10 -5（2.4%×10 -6，8.4%×10 -5）]（ P<0.001）。分离自非洲、亚洲、欧洲、北美洲和南美洲的菌株重组片段数目 M（ P25， P75）分别为23（1.0，33.0）、1.0（0.0，34.0）、6.0（2.0，13.0）、0.0（0.0，1.0）和29.5（6.8，56.8）（ P<0.001）；分离自各大洲的菌株重组区域总长度 M（ P25， P75）分别为233.0（4.0，461.0）、11.0（0.0，695.5）、56.0（4.0，111.0）、0.0（0.0，9.0）和347.5（132.8，1 323.5）bp（ P<0.001）。富集分析结果显示，62个重组热点编码基因的功能主要集中在趋化、趋性、对外界刺激的反应、受体活性和分子转导活性。 结论:霍乱弧菌El Tor大小染色体的重组片段数目及区域长度存在差别，不同大洲菌株重组片段数目及重组区域总长度不同。

非O1、非O139群霍乱弧菌(non-O1 non-O139 Vibrio cholerae，NOVC)感染常与腹泻、肠道外感染有关，如菌血症、中耳炎、皮肤和软组织感染，口腔感染NOVC的病例极少被报道。现报道1例食管癌术后化学治疗患者口腔出现NOVC感染。患者以腹泻、腹痛伴发热起病，口唇和脸颊出现血疱，上下唇内侧和上腭黏膜出现广泛糜烂，舌底出现较大溃疡创面，经过抗菌药物治疗后腹泻好转，口腔感染症状消失。

非O1群、非O139群霍乱弧菌感染病情隐匿，在我国属于少见病，临床工作中普遍对该疾病认识不足，易出现误诊、漏诊，因此早期识别和诊治尤为重要。现回顾分析1例非O1群、非O139群霍乱弧菌引起的肛周脓肿患者的诊治经过，结合文献归纳我国非O1群、非O139群霍乱弧菌肠外侵袭性感染的临床特征，为该病的诊断和治疗提供经验。

目的:通过分析一起因食用被污染田螺引起的霍乱疫情进行流调病学调查和应急处置，为霍乱疫情防控提供科学依据。方法:2023年1月1日至6月30日，广州市白云区医疗机构采用现场流行病学方法开展辖区内腹泻病例搜索，对霍乱疫情涉及病例及密切接触者开展流行病学调查，采集可疑食物和可能污染环境样本并开展溯源排查。结果:本次疫情病原体为非产毒O1群小川型霍乱弧菌，涉及确诊病例1例，病例表现为腹泻、稀水样便。现场流调推测可疑饮食史为外带田螺，应急监测采样102份（密接人群肛拭子13份，水产品29份，外环境46份，污水3份，江河水样本11份），其中阳性11份（污水3份，田螺3份，田螺售卖档口外环境涂抹5份），结果均为非产毒O1群小川型霍乱弧菌。结论:本起疫情为霍乱弧菌O1群引起的散发疫情，经流调溯源确定传染源为被污染田螺，传播途径为田螺未加工熟透，经食用后引起发病。本次处置提示对霍乱的高效监测能及时发现并有效阻断霍乱疫情的传播。

目的 对2018-2023年福州市分离的霍乱弧菌进行全基因组测序,预测毒力基因、耐药基因和序列位点信息,分析不同菌株间遗传关系,为防治霍乱提供依据.方法 对60株霍乱弧菌进行全基因组序列测定,运用生物信息学软件对测序数据进行质控、基因组装和预测,采用PubMLST、ResFinder、VFDB等数据库预测不同菌株的多位点序列分型、耐药基因和毒力基因情况,结合NCBI数据库,经核心基因组单核苷酸多态性(core genes Single Nucleotide Poly-morphism,cgSNP)系统发育分析和去重组分析,采取最大似然法构建系统发育树.结果 60株霍乱弧菌基于7个管家基因分型,获得16种已知序列型(sequence type,ST)和38种新分配的ST,O1群临床分离株H339为ST75,O1群食品分离株H13、H363和H381均为ST175,非O1/非O139 群霍乱弧菌(non-O1/non-O139 Vibrio cholerae,NOVC)分离株H263、H357均为ST1218,H293、H306均为ST1700,H311、H314、H316均为ST1699,其余分离株存在多样性.共预测29种耐药基因,包括喹诺酮类、叶酸通路拮抗剂类、氨基糖苷类和β-内酰胺等,大部分菌株携带喹诺酮类耐药基因.经过VFDB数据库预测,所有病原菌株均含有rtx、hlyA毒力因子,96.7%(58/60)菌株携带tlh基因,O1群分离株均携带tcp、zot、ace基因,O1群临床分离株携带ctxA基因.全基因组系统发育树进化分析将全部菌株分为20个分支,基因组高度分歧.结论 新发现38种STs.O1群食品分离株之间存在遗传相关性,O1群临床分离株与O1群食品分离株之间、O1群与NOVC菌株之间亲缘关系较远,分离菌株存在多样性.此项研究能够为食源性疾病溯源提供数据支持.

目的 了解非01/非0139群霍乱弧菌感染的流行病学特征、临床表现、诊断及治疗,以期提高对该病的认识.方法 对1例非01/非0139群霍乱弧菌血流感染患者的临床表现、实验室检查、治疗及转归进行回顾性分析,并以"非01/非0139群霍乱弧菌"和"血流感染"为主题词,检索万方、维普和中国知网数据库,以"non-01/non-0139 Vibrio cholerae"和"bloodstream infection"为主题词检索PubMed数据库,获取国内外报道的病例,复习非01/非0139群霍乱弧菌血流感染的临床特征及诊疗方法.结果 该例69岁男性患者肝门部胆管癌术后6个月,腹胀、发热、无腹泻,血培养检测出霍乱弧菌,经质谱、VITEK 2XL和16S rRNA基因鉴定均为霍乱弧菌,血清学确认为非01/非0139群.使用哌拉西林抗感染治疗10 d后,患者康复出院.通过文献复习发现26例非01/非0139群霍乱弧菌血流感染患者大多数有慢性肝炎、肝硬化等消化道基础疾病,主要症状为急性腹泻、腹胀腹痛、发热、恶心、呕吐等.菌株对多种抗菌药物敏感,予抗感染及对症治疗后80.77％患者好转出院,15.38％死亡,主要因感染性休克引起的多器官衰竭而死亡.结论 非01/非0139群霍乱弧菌血流感染好发于免疫功能低下者,尤其是慢性肝炎、肝硬化、恶性肿瘤、糖尿病患者,及时血培养检查和准确鉴定对其诊断非常重要.早期应用敏感抗生素治疗预后相对较好.

目的 对一起副溶血性弧菌和非O1/O139霍乱弧菌共感染导致急性胃肠炎暴发事件进行实验室病原学分析.方法 采用实时荧光PCR方法对4个病例肛拭子、12件可疑污染食品和8件环境涂抹的增菌液进行多种腹泻病原检测,将副溶血性弧菌和霍乱弧菌分离培养,并对分离株进行全基因组测序,获取菌株毒力基因和耐药基因,基于核心基因组单核苷酸多态性构建聚类树.结果 4件病例肛拭子增菌液荧光PCR检测副溶血性弧菌结果均为toxRVP+/tdh+/trh-,其中2件肛拭子荧光PCR检测霍乱弧菌结果为阳性.病例肛拭子副溶血性弧菌培养法检出率为100％(4/4),分离株均为toxRVP+/tdh+/trh-,血清型均为O4:KUT;病例肛拭子霍乱弧菌培养法检出率为50％(2/4),均为非O1/O139血清型,其中1分离株为toxRvc+/ctx-/t3ss+.可疑污染食品副溶血性弧菌培养法检出率为66.67％(8/12),环境涂抹副溶血性弧菌检出率为12.50％(1/8),可疑污染食品和环境副溶血性弧菌分离株均为toxRvp+/tdh-/trh-;可疑污染食品霍乱弧菌检出率为25.00％(3/12),分离株均为toxRvc+/ctx-/t3ss-.基于病例、可疑污染食品和环境分离副溶血性弧菌形成10个相互独立且遗传距离较远的分支,全部病例分离株处在同一分支,为高度克隆化分支.分离 自2个病例和3件可疑污染食品的霍乱弧菌分离株形成5个相互独立且遗传距离较远的分支.结论 本次暴发事件由副溶血性弧菌和非O1/O139霍乱弧菌共感染导致;弧菌共感染暴发事件中应加强多病原荧光PCR的辅助检测和菌株基因组特征分析,优化弧菌优化培养路径.

目的 建立一种霍乱弧菌O1群与O139群产毒株快速准确的检测方法.方法 基于多酶恒温快速扩增技术,根据霍乱弧菌溶血素编码基因、霍乱毒素编码基因、O1群与O139群O抗原编码基因设计引物与探针,初步建立检测方法.以不同血清型霍乱弧菌及其它细菌DNA为模板,验证检测方法的特异性与灵敏度.结果 配制反应体系时,按试剂盒说明书推荐加入量0.6 μL加入探针时可成功扩增溶血素编码基因、霍乱毒素编码基因及O1群与O139群O抗原编码基因4个目的基因,针对上述4个基因分别优化探针加入量为1.0μL、1.0μL、1.0 μL、0.8 μL时扩增效率更高.对优化探针加入量的检测方法进行方法特异性验证时,各引物探针组合不与非目标菌DNA产生交叉反应.进行检测方法的灵敏度分析时,不同目的基因的基因组检测灵敏度为70 fg或290 fg.上述实验结果证明检测方法的灵敏度及特异性满足设计要求.结论 建立了一种霍乱弧菌O1群与O139群产毒株检测的新方法,该方法特异性强、灵敏度高、检测时间短,可适用于霍乱弧菌的常规检测及快检,对霍乱的预防具有一定的积极作用.

目的 分析非O1/非O139群霍乱弧菌(NOVC)血流感染的病原学和临床特征,为早期鉴定NOVC感染提供参考.方法 收集2019年1月—2021年12月济宁医学院附属医院血培养检出的5株NOVC,采用全自动细菌鉴定仪进行菌种鉴定和药物敏感性分析,采用质谱仪进行菌种确认.收集感染患者流行病学、临床表现、实验室检测结果和疾病转归等临床资料,分析其临床特征.结果 5株NOVC经鉴定均为霍乱弧菌,其中1株对环丙沙星中度敏感,1株对氨苄西林和复方磺胺甲噁唑耐药,其他3株对常用抗菌药物均敏感.5例NOVC感染患者白细胞计数、中性粒细胞计数、C反应蛋白、降钙素原有不同程度升高,血小板计数均降低.5例NOVC感染患者均患有肝脏相关的基础疾病,确诊后给予敏感药物治疗,4例患者治愈出院,1例放弃治疗.结论 NOVC对常用抗菌药物敏感性较好,对疑似NOVC感染患者及时进行病原检测,及时治疗,预后相对较好.