目的:基于非靶向代谢组学和生物信息学方法研究香蜂草苷抗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制.方法:将18只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和香蜂草苷组(3 mg/kg),每组6只.使用高脂饲料喂养8周诱导建立NAFLD大鼠模型.香蜂草苷组每天灌胃给予香蜂草苷治疗8周,正常对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水.采用苏木精—伊红(HE)染色和油红O染色观察各组大鼠肝组织病理学变化.使用超高效液相—质谱(UPLC-Xevo G2-XS QTof)检测大鼠肝匀浆代谢物,以P＜0.05和变化倍数(|FC|)＞2为标准筛选差异代谢物,进行代谢物分类富集分析;以总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、游离脂肪酸(FFA)和胰岛素抵抗(IR)等NAFLD相关指标为疾病表型,构建加权代谢共表达网络分析(WMCNA),筛选出与NAFLD相关的核心代谢物.取差异代谢物和核心代谢物交集进行生物标志物分析.结果:与模型组比较,香蜂草苷组大鼠体重降低,肝脏脂质沉积减少,肝脏病理损伤减轻.代谢组学结果表明,共筛选出差异代谢物126个,其中上调50个,下调76个(香蜂草苷组vs.模型组).WMCNA筛选出核心代谢物189个,主要为磺酸及其衍生物、脂肪酸化合物.取差异代谢物和核心代谢物交集在Metaboanlyst在线数据库分析可得25个潜在生物标志物,其中脂酰类化合物Isopropylmalic acid(P＜0.05,FC=-2.81)和脂肪酸生成相关化合物Alpha-Linoleoylcholine(P＜0.05,FC=-1.39)、3-trans,5-cis-Octadienoyl-CoA(P＜0.05,FC=-1.78)变化差异具有统计学意义.结论:香蜂草苷可能通过调节Isopropyl-malic acid、Alpha-Linoleoylcholine和3-trans,5-cis-Octadienoyl-CoA的代谢水平,起到改善NAFLD的作用,为缓解脂质代谢紊乱提供前期实验基础.

目的:研究土茯苓总苷中的非黄酮类化学成分.方法:采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶色谱及半制备液相色谱等分离技术,对土茯苓总苷中的化学成分进行分离纯化.结合理化性质,通过MS、NMR和CD等波谱数据鉴定化合物结构.结果:从土茯苓总苷中分离得到 28 个化合物,分别鉴定为:薯蓣皂苷元(1)、β-谷甾酮(2)、豆甾醇(3)、白藜芦醇(4)、咖啡酸(5)、5-O-咖啡酰莽草酸(6)、4-O-咖啡酰莽草酸(7)、3-O-咖啡酰莽草酸(8)、反式肉桂酸(9)、蝉翼藤糖酯 A(10)、华中冬青素(11)、(+)-南烛木树脂酚(12)、肉桂酸乙酯(13)、毛色二孢素(14)、糙叶败酱碱(15)、金色酰胺醇酯(16)、交链孢酚(17)、没食子酸(18)、豆甾-4-烯-3,6-二酮(19)、异细交链孢素(20)、3,4-二甲氧基咖啡酸(21)、thunberginol C(22)、3,5-二羟基香豆素-7-O-α-L-鼠李糖苷(23)、白皮杉醇(24)、原儿茶酸(25)、莽草酸甲酯(26)、甲基岩藻糖苷(27)、8-甲氧基蜂蜜曲菌素(28).结论:其中,化合物 15～17、19、20、22、23 和 28 为首次从菝葜属植物中分离得到,化合物 2、11、21 和 27 为首次从该植物中分离得到.

目的 比较不同采收期茶枝柑青皮中黄酮类成分的差异,为青皮的质量评价提供依据.方法 采用UHPLC法建立指纹图谱,对不同采收期的青皮进行相似度评价,同时测定并比较不同采收期样品中芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川陈皮素、3',4',3,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、5-去甲川陈皮素和桔皮素的含量.结果 建立了青皮的UHPLC指纹图谱,共指认了 8个特征峰,7～9月采收的青皮相似度大于0.97,5月份与其他月份的相似度均小于0.8.8个黄酮类成分的总量随着生长期的增长而减少,5月采收的个青皮中芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷含量明显高于其他月份,而3',4',3,5,6,7,8-七甲氧基黄酮含量明显低于其他月份;甜橙黄酮、川陈皮素、5-去甲川陈皮素、桔皮素的含量在不同采收期变化不明显.聚类分析与主成分分析均可将5月采收的样品与7～9月采收的样品分开.结论 不同采收期的茶枝柑青皮中黄酮类成分的含量差异较大,本文可为青皮药材的质量控制提供依据.

目的 比较不同基原枳实中黄酮类成分与辛弗林的差异,为枳实的基原鉴别和质量控制提供依据.方法 收集24批酸橙枳实和17批甜橙枳实,采用UPLC法,Waters Acquity UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,流动相为0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,检测波长为283 nm(0～8 min)、330 nm(8～11 min),进样量为 1 μL.建立UPLC指纹图谱快速分析方法并进行相似度评价,进一步对各共有峰进行指认.参照中国药典 2020 年版一部枳实含量测定项下方法,对各样品中的辛弗林进行HPLC定量测定.结果 建立了枳实中黄酮类成分的UPLC指纹图谱分析方法,同一基原的枳实相似度均大于 0.910,两种枳实之间的相似度仅 0.08.共指认了 10 个共有峰,其中酸橙枳实 4 号峰柚皮苷、6 号峰新橙皮苷、8 号峰枳属苷远高于甜橙枳实,而甜橙枳实中 3 号峰芸香柚皮苷、5 号峰橙皮苷、7 号峰香蜂草苷远高于酸橙枳实.17批甜橙枳实中辛弗林含量最高为 1.700%,最低为 0.310%,平均含量为 0.530%,24 批酸橙枳实中含量最高为 0.530%,最低为 0.019%,平均含量为 0.290%.结论 所建立的UPLC指纹图谱分析方法简便、快速,两种枳实的指纹图谱差异明显,可作为枳实基原鉴别的可靠方法.酸橙枳实中辛弗林的含量总体低于甜橙枳实,且批间差异大,对两种基原的枳实分别制定辛弗林含量限度更加合理.

目的 研究中药辅料蜂蜜炼制前后黄酮类成分变化.方法 参考《中药药剂学》,对不同来源的6种蜂蜜进行炼制.供试品经固相萃取法富集黄酮类成分.采用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(HPLC-TQ-MS)法测定,Thermo Accucore RP-MS色谱柱(100 mm×2.1mm,2.6 μm),以0.1％甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温30℃.质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,多反应监测模式(MRM)扫描分析.结果 蜂蜜中共检测到12种黄酮类成分,包括黄酮苷元、二氢黄酮苷元和异黄酮苷元.黄酮苷元有8种:槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、高良姜素和白杨素;二氢黄酮苷元有3种:短叶松素、柚皮素和乔松素;异黄酮苷元染料木素.不同蜜源蜂蜜所含黄酮类成分种类和含量存在明显差异.6个蜂蜜样品炼制后,都发现了蜂蜜中没有报道过的芦丁和芸香柚皮苷,12种检测到的蜂蜜黄酮类成分在炼制后其量都有不同程度的变化,椴树蜜的槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、乔松素和白杨素量均有增加,短叶松素、柚皮素和高良姜素量没增加反而还有下降的;洋槐蜜中除芹菜素量增加不明显外,其余均有所增加,尤其是槲皮素和桑黄素增加的较为明显;百花蜜和枣花蜜12种黄酮类成分量均显著增加.结论 炼制可造成蜂蜜中黄酮类成分的种类和含量发生改变.

为考察不同采收期薄荷茎、叶中有效成分的动态变化规律,探讨薄荷药材的适宜采收期,该研究以橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷为黄酮类指标性成分,采用已建立的薄荷中黄酮类成分含量一测多评法,测定了3个产地不同采收期的薄荷中4种黄酮苷类成分分别在茎、叶样品中的含量,并运用统计图和主成分分析法对这些数据进行统计整理和综合评价.这4种成分在3个产地不同采收期的薄荷叶中的含量普遍高于茎,而同一产地不同采收期薄荷中各成分含量呈动态变化;就江苏产区而言,4月中旬、9月中旬以及10月下旬采收的薄荷中4种成分综合评价得分较高.结合药材产量与有效成分含量,江苏产区薄荷最适合的采收期应为9月中旬与10月下旬,与当地传统采收期基本一致.

目的:制备薄荷酚类对照提取物,探讨选择对照提取物替代单体成分对照品对薄荷药材质量控制的可行性.方法:采用色谱分离技术制备薄荷酚类对照提取物,建立以对照提取物为对照的薄荷药材HPLC含量测定方法,使用C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-0.5％甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0～15 min,10％A→21％A;15～20 min,21％A→24％A;20～23 min,24％A→25％A;23～29 min,25％A→26％A;29～40 min,26％A→28％A;40～50 min,28％A→30％A;50～60 min,30％A),流速1 mL· min-1,检测波长296nm;同时以橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷及迷迭香酸对照品为对照,对不同批次的酚类对照提取物进行标定,并分别采用对照提取物法和对照品法对薄荷药材进行HPLC含量测定.结果:以对照提取物为对照,橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷、迷迭香酸的量分别在0.003 45～0.345、0.007 52～0.752、0.001 59～0.159、0.006 74～0.674、0.006 19～0.619 μg范围内线性关系良好;10批对照提取物中上述5个指标性成分的含量分别为5.35％～8.84％、17.09％～25.44％、3.23％～5.41％、12.87％～20.31％、10.72％～20.09％,且不同方法的薄荷药材HPLC含量测得结果基本一致.结论:薄荷酚类对照提取物可用于薄荷药材质量控制,替代单体对照品对药材进行质量控制.

目的 探讨内源性孤啡肽(N/OFQ)是否通过Raf激酶抑制蛋白(RKIP)影响急性心肌缺血大鼠心律失常及心肌细胞膜表面 β1-肾上腺素能受体(β1-AR)的表达.方法 ①实验一:按随机数字表法将30只6周龄成年雄性SD大鼠分为假手术组〔Sham组,只开胸不结扎冠状动脉(冠脉)〕、心肌缺血模型组(结扎冠脉左前降支)、内源性N/OFQ拮抗剂UFP-101预处理组(UFP-101组,术前10 min经尾静脉注射1 mL/kg UFP-101),每组10只.记录各组大鼠术后15 min内心律失常结果;术后15 min取缺血心肌,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测磷酸化RKIP(p-RKIP)表达.②实验二:按随机数字表法将30只4周龄雄性SD大鼠分为UFP-101对照组、RKIP过表达组、RKIP拮抗组,每组10只.UFP-101对照组每日腹腔注射玉米油,其余两组注射RKIP上调剂香蜂草苷(Didymin),3组大鼠饲养4周后均行冠脉结扎,并均于术前10 min经尾静脉注射UFP-101.其中RKIP拮抗组术前2 h腹腔注射RKIP特异性拮抗剂洛法他丁(locostatin).记录各组大鼠术后15 min内心律失常结果;Western Blot法检测术后15 min时心肌组织p-RKIP表达及心肌细胞膜表面 β1-AR表达.结果 ①实验一:与Sham组比较,模型组和UFP-101组室性期前收缩(VEB)、室性心动过速(VT)、心室纤颤(VF)发生明显增多,心律失常评分明显升高;此外,与Sham组相比,模型组心肌组织p-RKIP表达升高,UFP-101组心肌组织p-RKIP表达下降.与模型组比较,UFP-101预处理可显著减少心律失常发生〔心律失常评分(分):1.5(0.3,5.0)比4.0(2.0,5.0),P<0.05〕,心肌组织p-RKIP表达明显下降(p-RKIP/总RKIP:0.20±0.11比0.43±0.11,P<0.05).说明拮抗N/OFQ能降低RKIP的磷酸化,减少心律失常发生.②实验二:与UFP-101对照组相比,RKIP过表达可显著增加心律失常事件发生,心肌细胞膜表面β1-AR表达也明显增多;而拮抗RKIP过表达可使心律失常的发生有所缓解〔心律失常评分(分):3.0(2.0,3.0)比4.0(2.0,5.0),P<0.05〕,并且明显减少心肌细胞膜表面β1-AR的表达(β1-AR/Na+-K+-ATP酶:0.88±0.09比1.02±0.08,均P<0.05),而总RKIP表达差异无统计学意义(总RKIP/GAPDH:5.40±0.21比5.36±0.19,P>0.05).说明内源性N/OFQ通过RKIP影响大鼠缺血性心律失常和心肌细胞膜表面β1-AR表达.结论 内源性N/OFQ可通过增加RKIP磷酸化表达来影响大鼠缺血心肌细胞膜表面β1-AR的表达及心律失常.

目的 建立基于固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中20种黄酮类成分的方法,并应用于多种不同蜜源单花蜜中黄酮类成分的差异研究.方法 蜂蜜样品经水溶液超声提取,14 000×g离心5 min,取上清液经MAX固相萃取柱净化,采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm× 100 mm,1.8μm)色谱柱分离,以0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液作为流动相梯度洗脱,电喷雾电离,在多反应监测模式下检测,外标法定量.结果 20种目标化合物线性范围宽、线性关系良好,相关系数均大于0.9969;在100、250和500 μg/L 3个加标水平下方法加标回收率为76.2％ ～ 108.6％;日内精密度为0.50％～4.34％;日间精密度为2.51％～6.71％(n=6).16种不同蜜源单花蜜中黄酮类化合物分布具有明显差异,其中小茴香蜂蜜中槲皮苷含量最高(165 ng/g);红桉树蜂蜜(186 ng/g)和麦卢卡蜂蜜(304 ng/g)中木犀草素含量高;荞麦蜂蜜、小茴香蜂蜜、麦卢卡蜂蜜和雪脂莲蜂蜜中山奈酚含量较高(113～257 ng/g);雪脂莲蜂蜜、麦卢卡蜂蜜、向日葵蜂蜜和薰衣草蜂蜜中白杨素含量较高(136～213 ng/g),麦卢卡蜂蜜中生松素(473 ng/g)和短叶松素(684 ng/g)远高出其它来源单花蜜.结论 该方法具有前处理简便、测定灵敏、准确、重现性好的特点,适用于各类蜂蜜中黄酮类物质的定量分析,为单花蜜的差异分析与质量评价建立了更多科学数据与应用基础.

目的 预测中药断血流治疗出血性疾病潜在的分子作用机制.方法 以系统药理学方法为基础,通过收集中药成分以及出血类疾病靶点数据完成靶点预测,进一步整合成“化合物-靶点-通路”网络分析图,筛选药物作用活性化合物及主要通路.结果 共检索到20个化学成分,筛选出潜在活性成分5个,分别是橙皮素、柴胡皂苷元A、香蜂草苷、芹菜素以及断血流皂苷A,获得可作用于出血性疾病的潜在靶点592个.与药物活性化合物靶标比对筛查得到18个关键靶标和14个主要通路,关键靶标主要来自活性化合物芹菜素和断血流皂苷A.结论 本研究筛选了断血流治疗出血性疾病的主要活性化合物以及关键靶标和潜在通路,为中药断血流的进一步开发和利用提供了科学依据.