目的 基于肠道菌群探究骨松益骨方(GusongYigu de-coction,GSYG)治疗绝经后骨质疏松症(postmenopausal oste-oporosis,PMOP)的机制.方法 SPF级SD大鼠60只随机分成假手术组(Control)、模型组(Model)、骨松益骨方低剂量组(GSYG-L,1.25 g·kg-1)、骨松益骨方中剂量组(GSYG-M,2.5 g·kg-1),骨松益骨方高剂量组(GSYG-H,5 g·kg-1)和阿仑膦酸钠组(Al,0.89 mg·kg-1),每组10只.HE染色观察骨组织形态变化,micro CT观察大鼠的股骨组织结构变化;取Control组、Model组、GSYG-H组大鼠结肠粪便样本,提取DNA,利用Illumina Miseq平台进行高通量测序.结果 与Control组比较,Model组大鼠骨小梁稀疏;BV/TV、Tb.Th、Tb.N 及 BMD 均明显降低(P＜0.01),SMI、Tb.Sp 明显升高(P＜0.01);与 Model 组比较,GSYG-L、GSYG-M、GSYG-H组和Al组骨小梁数目增加,骨微结构得到改善,且BV/TV、Tb.Th、Tb.N 及 BMD 明显增加(P＜0.05),SMI、Tb.Sp 明显降低(P＜0.05).肠道菌群测序结果显示,与Control组比较,Model组大鼠肠道菌群多样性降低,厚壁菌门丰度降低,而拟杆菌门丰度增加;与Model组比较,GSYG-H组厚壁菌门丰度增加,拟杆菌门丰度减少.结论 GSYG能够改善PMOP患者的骨微结构,增加骨密度,其作用机制可能与增加肠道菌群的多样性、调节肠道菌群结构有关.

目的:通过对直肠癌患者肿瘤部位和癌旁部位及健康直肠黏膜菌群进行分析，探讨直肠黏膜菌群与直肠癌的关系。方法:选取2018年7月至2019年9月温州医科大学附属第一医院行直肠癌根治手术的94例直肠癌患者肿瘤黏膜(CM组)和癌旁黏膜(AM组)，100例健康者直肠黏膜(NM组)作为研究对象。细菌培养定量检测患者和正常黏膜主要细菌，高通量测序分析3组黏膜菌群，实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测双歧杆菌等关键菌丰度差异。正态分布资料采用 t检验，非正态分布资料采用K-W检验。 结果:培养显示双歧杆菌在直肠癌肿瘤黏膜高于健康者(6.60±0.81比5.66±0.68， t＝10.312， P<0.01)、乳酸杆菌在直肠癌肿瘤黏膜高于健康者(6.58±0.59比5.44±0.71， t＝13.527， P<0.01)、肠球菌在直肠癌肿瘤黏膜高于健康者(6.22±0.87比4.64±0.80， t＝12.351， P<0.01)。16SrRNA扩增子焦磷酸测序显示直肠癌患者CM及AM菌群多样性和丰富度均显著高于NM，qPCR结果显示NM中嗜黏液艾肯曼菌、消化球菌、长双歧杆菌、两歧双歧杆菌丰度分别是CM的12.55倍( t＝13.500， P<0.05)、4.89倍( t＝10.960， P<0.05)、2.27倍( t＝8.242， P<0.05)、1.97倍( t＝5.230， P<0.05)。 结论:直肠癌患者直肠黏膜菌群与健康人存在显著差异，直肠癌患者的肿瘤局部黏膜菌群多样性及丰度均发生了明显变化，局部黏膜菌群改变可能在直肠癌发生发展中发挥了一定作用。

目的:探讨慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者鼻腔微生物多样性，以及术后复发者鼻腔微生物组学特征和炎性细胞及因子特点，以了解微生物组学因素对CRSwNP手术预后的影响。方法:2017年12月至2018年12月期间，招募于四川大学华西医院耳鼻咽喉科接受手术治疗的77例CRSwNP患者，其中男34例，女43例，年龄29~76岁。收集患者的鼻腔分泌物和鼻息肉组织。于分泌物中提取鼻腔微生物DNA，基于16S核糖体RNA（16S rRNA）进行高通量测序，检测细菌群落组成。使用Luminex分析鼻息肉组织中白细胞介素（IL）-5、IL-8、IL-17A、IL-17E、IL-18、IL-27和干扰素γ（IFN-γ）等细胞因子。计数外周血和鼻息肉组织中嗜酸粒细胞和中性粒细胞含量。术后随访1年，记录鼻息肉的复发情况，分析鼻息肉复发与炎性因子、炎性细胞计数及鼻腔微生物多样性特征的相关性。对二分类变量采用卡方检验，对连续变量采用Mann-Whitney U检验，两组之间平均相对丰度的差异比较采用Wilcoxon秩和检验。结果:随访1年时复发患者12例，其中男5例，女7例。复发组与未复发组患者在年龄、性别、哮喘、变应性鼻炎、湿疹等方面的差异无统计学意义。复发组的鼻部症状总分［42.3（30.2，67.1）， M（ Q1， Q3），后同］明显高于未复发组［37.8（29.4，50.3）］， Z=-4.930， P<0.001。鼻息肉组织中，复发组患者嗜酸粒细胞［40.83（22.33，102.00）个/HP，HP为高倍视野，后同］和中性粒细胞［30.83（20.33，56.44）个/HP］数量显著高于未复发组［13.72（13.50，48.33）个/HP和18.50（12.00，26.08）个/HP， Z值分别为-6.997、-8.243， P值均<0.001］。复发组IFN-γ、IL-17A、IL-17E、IL-18的表达量明显高于未复发组，但阳性率差异无统计学意义。属水平上，未复发组患者鼻腔棒状杆菌属的平均相对丰度为（11.90±20.31）%，高于复发组的（0.15±0.20）%，但校正后差异无统计学意义（FDR P=0.638）。未复发组葡萄球菌属平均相对丰度为（8.17±27.70）%，低于复发组的（8.99±15.89）%，但校正后差异无统计学意义（FDR P=0.638）。 结论:CRSwNP患者中性粒细胞介导的炎性反应与鼻息肉复发密切相关。鼻内镜术后鼻息肉的复发可能与保护性微生物丰度的减少和致病微生物数量的增加有关。

眼表直接暴露在外部环境中，容易受到各种抗原和病原体的影响，眼表微生物群参与免疫耐受、代谢和上皮屏障功能的调节。微生物组成在维持健康和疾病发生中都起着重要作用，微生物分布失衡可能导致某些疾病的发生。体内微生物的组成主要是细菌。在微生物组学研究中，最初主要集中在胃肠道、口腔、鼻腔、皮肤和泌尿生殖道5个部位。随着16S核糖体核糖核酸基因(16SrRNA)高通量测序及宏基因测序分子生物学检测技术的发展，眼表细菌群落与疾病的关系成为研究热点。眼表不同部位细菌群落的分布有一定差异，菌群存在也具有垂直分布的特点。年龄、性别、地理环境等因素对眼表菌群的组成和功能有一定影响，眼局部重复使用抗生素可增加眼表的耐药菌群。不同类型的干眼、角膜炎、睑缘炎等眼表疾病与眼表菌群的改变有一定关系。本文主要就正常眼表菌群的组成、分布、影响因素及眼表菌群与干眼、角膜炎、睑缘炎等眼表疾病的关系进行综述，以期为眼表疾病发生机制的研究提供新的认识，同时为眼表疾病的治疗提供指导依据。

目的:探讨老年与中青年食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma， ESCC）患者食管组织的菌群特征及差异，以助于研究老年ESCC患者潜在的生物标志物。方法:采用回顾性研究，选取2018年7月至2019年7月在湖北省十堰市太和医院确诊的72例ESCC患者，其中老年组49例（≥60岁，男性40例，女性9例），中青年组23例（<60岁，男性21例，女性2例），以同期消化内镜中心20名胃镜检查无异常的健康体检者作为对照组（年龄范围35~78岁，中位年龄57岁，男性16名，女性4名）。收集ESCC患者病变食管组织和健康对照组中段食管组织、提取基因组DNA，对细菌16SrRNA基因序列V4高变区扩增，采用Illumina HiSeq测序技术，对比分析老年和中青年ESCC患者菌群特点。采用QIIME和Rstudio软件分析序列数据，统计学方法采用非参数Kruskal-Wallis检验或Wilcoxon秩和检验。结果:两组患者菌群Shannon指数［5.17（4.53，5.95）比4.79（3.74，5.97）］、Simpson指数［0.94（0.91，0.96）比0.92（0.83，0.96）］和Chao1 ［343.55（259.76，570.59）比329.16（268.88，648.00）］指数相似，差异无统计学意义（ Z=-0.791、-1.057、-0.380，均 P>0.05）；Beta多样性老年组与中青年组亦无明显差异（PC1=19.14%、PC2=6.95%， PPC1=0.67、 PPC2=0.42）。在门水平，中青年组丰度前五的菌门依次为厚壁菌门（ Firmicutes）、拟杆菌门（ Bacteroidetes）、变形菌门（ Proteobacteria）、放线菌门（ Actinobacteria）和梭杆菌门（ Fusobacteria），老年组患者丰度最高的五个门分别是厚壁菌门（ Firmicutes）、拟杆菌门（ Bacteroidetes）、变形菌门（ Proteobacteria）、梭杆菌门（ Fusobacteria）和放线菌门（ Actinobacteria）；两组差异显著的是梭杆菌门（ Fusobacteria）（ Q=0.596， P<0.05）。在属水平，中青年组丰度前五的菌属依次为：普雷沃菌属（ Prevotella）、拟杆菌属（ Bacteroides）、链球菌属（ Streptococcus）、月形单胞菌属（ Selenomonas）和韦荣球菌属（ Veillonella）；而老年组丰度前五的分别是普雷沃菌属（ Prevotella）、拟杆菌属（ Bacteroides）、链球菌属（ Streptococcus）、月形单胞菌属（ Selenomonas）和嗜血杆菌属（ Haemophilus），两组有显著差异的为梭杆菌属（ Fusobacterium）（ Q=0.938， P<0.05）。基于未观测状态重建的群落系统发育研究（PICRUSt）功能预测，老年组患者氨酰tRNA生物合成（ Aminoacyl.tRNA.biosynthesis）、核苷酸切除修复（ Nucleotide.excision.repair）、核糖核酸聚合酶（ RNA.polymerase）、核糖体（ Ribosome）、克拉维酸生物合成（ Clavulanic.acid.biosynthesis）、光合作用（ Photosynthesis）和光合作用蛋白（ Photosynthesis.proteins）丰度较中青年组降低（均 Q=0.734， P<0.05）。 结论:老年ESCC患者食管菌群与中青年患者的Alpha多样性和Beta多样性无明显差异，但老年患者梭菌属菌群丰度增高。

目的:观察脐灸治疗阈下抑郁(SD)患者的临床疗效以及对肠道菌群的影响,探讨其作用机制.方法:招募36例SD患者作为阈下抑郁组(脱落1例,剔除2例),招募36例健康受试者作为健康对照组(剔除1例).阈下抑郁组采用脐灸治疗,每周1次,共治疗8次;健康对照组不予任何干预.观察阈下抑郁组治疗前后汉密尔顿抑郁量表17项(HAMD-17)、流调中心抑郁量表(CES-D)评分,并评定临床疗效.分别于阈下抑郁组治疗前后及健康对照组入组时采集粪便样本,采用16SrRNA测序技术分析肠道菌群情况.结果:与治疗前比较,阈下抑郁组治疗后HAMD-17、CES-D评分降低(P＜0.05),总有效率为90.9％(30/33).与健康对照组比较,阈下抑郁组治疗前Sobs、Shannon、Ace指数降低(P＜0.05),Simpson指数升高(P＜0.05),有害菌埃希杆菌-志贺菌属(Escherichia-Shigella)相对丰度升高(P＜0.01),有益菌霍氏真杆菌属(Eubacterium_hallii_group)、瘤胃球菌属(Ruminococeus)、克里斯滕森菌科 R7 群(Christensenellaceae_R-7_group)、帕拉普氏菌属(Paraprevotella)相对丰度降低(P＜0.05,P＜0.01);与治疗前比较,阈下抑郁组治疗后Escherichia-Shigella相对丰度降低(P＜0.01),Ruminococcus、Christensenellaceae_R-7_group、Paraprevotella 相对丰度升高(P＜0.01,P＜0.05).Christensenellaceae_R-7_group、Paraprevotella 与 CES-D 评分呈负相关(P＜0.01,P＜0.05);E.scherichia-Shigella与HAMD-17 评分呈正相关(P＜0.05),Christensenellaceae_R-7_group与HAMD-17评分呈负相关(P＜0.01).结论:SD患者存在肠道菌群紊乱,脐灸可能通过调节肠道菌群的丰度和多样性,增加有益菌,减少有害菌,从而发挥疗效.

根际微生物在植物养分获取以及碳、氮循环中发挥着重要作用,而植物细根(包括吸收根和运输根)与根际微生物群落关系密切.阐明火后森林恢复过程中先锋树种细根性状的变化与根际微生物群落的关系,可为基于细根和根际微生物动态的火后植被恢复管理提供理论支持.该研究以大兴安岭30年时间序列火烧迹地先锋树种白桦(Betula platyphylla)为研究对象,利用16SrRNA高通量测序技术,分析了火后恢复过程中白桦根际细菌群落结构与土壤性质和细根性状的关系.结果表明,火后恢复时间显著影响土壤pH、吸收根性状和根际细菌α多样性.随火后时间的增加,土壤pH呈先升高后下降再升高的趋势,吸收根比根长和比表面积呈先升高后下降的趋势.火后9年是白桦根际细菌α多样性逐渐回升的转折点.不同火后恢复时间根际细菌群落主要优势门为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteriota)和酸杆菌门(Acidobacteriota),主要优势属为慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium).玫瑰弯菌属(Roseiarcus)、酸球菌属(Acidipila)以及分枝杆菌属(Mycobacterium)等优势属的相对丰度在不同火后恢复时间中差异显著.根际细菌α多样性主要受土壤pH和吸收根比根长的显著影响,细菌群落结构变化受细根的碳、氮含量和运输根磷含量的影响.综上,细根、土壤和微生物之间的互作共同影响了根际细菌的群落结构及多样性,从而塑造了根际环境,促进火后生态系统的恢复.

目的 探究安石榴苷对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道菌群和炎性因子的影响.方法 实验小鼠分为对照组(Con组)、UC模型组(UC组)、5-氨基水杨酸治疗组(5-ASA组)和安石榴苷干预组(Pun组),每组各5只小鼠.观察小鼠体重、便血和粪便形状,并进行疾病活动指数(DAI)评分;通过HE染色观察小鼠结肠组织切片形态,并进行病理评分与统计;ELISA法检测小鼠血清IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-10水平;16SrRNA高通量测序检测小鼠肠道菌群.结果 与UC组相比,Pun组小鼠DAI评分显著降低;HE结果提示安石榴苷可改善UC小鼠结肠损伤、恢复肠道腺体和隐窝结构、减少炎性细胞浸润;Pun组小鼠血清促炎因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P＜0.01),而抑炎因子IL-10水平显著增加(P＜0.001).测序结果显示,安石榴苷可提高小鼠肠道菌群多样性,增加Prevotellaceae_UCG-001和乳酸杆菌属(Lacto-bacillus)相对丰度,降低阿克曼菌属(Akkermansia)和联合乳酸杆菌属(Ligilactobacillus)相对丰度.结论 安石榴苷可有效缓解小鼠UC结肠炎症状,通过降低血清炎症因子水平和调节肠道菌群平衡达到治疗效果,这为UC的临床治疗提供新思路.

目的 探究壮宣饮通过调节p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号介导的肠道菌群治疗小儿甲型流感病毒H1N1 肺炎的机制.方法 取BALB/c小鼠采用H1N1 流感病毒尿囊液滴鼻法制备 H1N1 肺炎小鼠模型,随机分为 5 组:模型组,壮宣饮低、中、高剂量组,壮宣饮高剂量(28.66 g·kg-1)+茴香霉素(10 mg·kg-1)组.对照组采用同法滴入等体积无菌生理盐水.使用壮宣饮和茴香霉素分组处理后,测定各组小鼠肺系数并以HE染色检测其肺与大肠组织病理形态;以 16SrRNA基因测序检测各组小鼠肠道菌群结构差异改变;以酶联免疫吸附法(ELASA)测定各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)及大肠组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6、IL-1β水平;以蛋白免疫印迹法检测各组小鼠肺与大肠组织中p38 MAPK通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠肺与大肠组织发生明显病理损伤,肺系数,肺与大肠病理评分,ACE指数,Shannon指数,梭菌目丰度,肺泡灌洗液与大肠组织中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-1β水平,肺与大肠组织p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P＜0.05);拟杆菌目丰度降低(P＜0.05).与模型组比较,壮宣饮低、中、高剂量组小鼠肺与大肠组织病理损伤均减轻,肺系数,肺与大肠病理评分,ACE指数,Shannon指数,梭菌目丰度,肺泡灌洗液与大肠组织TNF-α、IL-4、IL-6、IL-1β水平,肺与大肠组织p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均降低(P＜0.05),且均呈剂量依赖性(P＜0.05).拟杆菌目丰度均升高(P＜0.05),与壮宣饮高剂量组比较,壮宣饮高剂量+茴香霉素组小鼠肺与大肠组织病理损伤加重,肺系数,肺与大肠病理评分,ACE指数,Shannon指数,梭菌目丰度,肺泡灌洗液与大肠组织TNF-α、IL-4、IL-6、IL-1β水平,肺与大肠组织p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P＜0.05);拟杆菌目丰度降低(P＜0.05).结论 壮宣饮可通过抑制p38 MAPK信号激活而改善H1N1 肺炎小鼠肠道菌群失衡,从而抑制小鼠炎症并减轻其肺与大肠组织损伤,对小儿H1N1 肺炎起到治疗作用.

目的 从肠道菌群探讨补肾活血方治疗帕金森病(PD)的可能作用机制.方法 将72只雄性C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组及补肾活血方低、中、高剂量组,每组12只.空白组小鼠腹腔注射10ml/kg生理盐水,其余各组小鼠采用腹腔注射浓度为3 mg/ml的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30mg/kg诱导PD小鼠模型,均每天1次,连续7天.造模成功后,补肾活血方低、中、高剂量组分别给予补肾活血方7.5、15、30g/(kg·d)灌胃,美多芭组给予多美多芭片112.5mg/(kg·d)灌胃,空白组和模型组予15 ml/(kg·d)蒸馏水灌胃,均每天灌胃1次,连续14天.采用爬杆实验、转棒实验、抓力实验和负重游泳实验评估小鼠行为学指标;16SrRNA高通量测序技术分析各组小鼠肠道菌群改变;Western Blot法测定小鼠回肠组织Toll样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)通路炎症因子[包括Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)]蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组小鼠爬杆触底时间延长,抓力减小,转棒持续时间和游泳持续时间缩短,回肠组织中TLR2、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17蛋白表达均升高(P＜0.01).与模型组比较,美多芭组和补肾活血方低、中、高剂量组爬杆触底时间缩短,抓力增加,美多芭组和补肾活血方高剂量组转棒持续时间延长,回肠组织TLR2、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17蛋白表达均降低,而仅有补肾活血方高剂量组游泳持续时间延长(P＜0.05或P＜0.01).与补肾活血方低剂量组比较,补肾活血方中、高剂量组爬杆触底时间缩短(P＜0.05或P＜0.01);补肾活血方高剂量组抓力增加,TLR2、TLR4、IL-17蛋白表达降低(P＜0.05或P＜0.01).肠道菌群结果显示,与空白组比较,模型组Dominance指数、Pielou_e指数、Shannon指数、Simpson指数差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,美多芭组Shannon指数、Chao1指数、Observed_otus指数,以及补肾活血方高剂量组Chao1指数、Observed_otus指数、Dominance指数、Pielou_e指数、Shannon指数、Simpson指数差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).在门水平上,各组差异具有统计学意义的菌门相对丰度类别包括变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门(P＜0.05或P＜0.01);在属水平上,各组差异具有统计学意义的菌属相对丰度类别包括Muribaculaceae、阿克曼菌属、幽门螺杆菌(P＜0.05或P＜0.01).结论 补肾活血方治疗PD的可能作用机制是通过重构紊乱的肠道菌群结构,减轻炎症反应进而达到改善PD运动功能的目的.