目的:探讨IL-1β对RA患者滑膜成纤维细胞（FLS）中乳腺癌耐药蛋白（BCRP/ABCG2）mRNA表达的影响，探索IL-1β对BCRP介导多药耐药性的调控作用。方法:获取RA 3例和OA 3例患者FLS，建立FLS体外培养体系，培养至Ⅴ代；①采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测RA与OA的FLS中BCRP mRNA的表达水平并比较；②评估RA病情活动度与BCRP mRNA的表达水平的相关性；③ RA-FLS分为4组，A组空白对照组，B组、C组、D组分别加入20、50、100 ng/ml的IL-1β，培养24、48、72 h，比较不同组间BCRP mRNA表达水平。定量资料采用 M（ P25， P75）表示，两独立样本比较采用Mann-Whitney U检验，组间比较采用Friedman检验。 结果:① RA-FLS中BCRP mRNA表达水平高于OA组[0.68（0.26，1.16）与0.06（0.05，0.53）； Z=-2.136， P=0.029]。② RA-FLS的BCRP mRNA的表达量与病程、ESR、CRP及DAS28呈正相关趋势，而与发病年龄呈负相关趋势，与性别无相关性。③相同浓度IL-1β刺激不同时间RA-FLS的BCRP mRNA的表达水平比较：IL-1β浓度为0时，48 h和72 h较24 h BCRP mRNA的表达水平均升高（ χ2=6.00， P=0.034）；IL-1β浓度为20 ng/ml（ χ2=8.00， P=0.014）或100 ng/ml （ χ2=6.50， P=0.040）时，72 h组BCRP mRNA的表达水平较24 h组明显升高。④不同浓度IL-1β刺激相同时间RA-FLS的BCRP mRNA的表达水平比较：72 h时，100 ng/ml组较0 ng/ml组BCRP mRNA表达升高（ χ2=12.00， P=0.006）。 结论:RA-FLS存在BCRP介导的耐药性，且可能与病情活动度有关。炎性细胞因子IL-1β参与调控RA-FLS的BCRP mRNA的表达，且存在时间和浓度依赖性。

目的 观察电针对动脉粥样硬化(AS)家兔腹腔巨噬细胞胆固醇逆转运受体三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G1(ABCG1)、B类Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)mRNA及蛋白表达的影响,探究电针治疗AS的作用机制.方法 将26只雄性新西兰家兔按照随机数字表法分为阴性对照组(n=7)、造模组(n=19).阴性对照组家兔给予普通饲料喂养,造模组采用高脂饲料与颈总动脉球囊损伤术相结合的方法制备AS模型.将造模成功的家兔按随机数字表法分为模型组、电针组和阿托伐他汀组,每组各6只.电针组家兔予"内关""足三里""关元"进行电针治疗,疏密波(4 Hz/20 Hz),电流为1 mA,每次留针20 min,1次/d,6 d为1个疗程,共4个疗程;阿托伐他汀组家兔灌胃阿托伐他汀钙片悬浊液(1 mg/kg),1次/d,6 d为1个疗程,共4个疗程.干预结束后,采用HE染色法观察家兔颈总动脉组织形态学变化;取家兔腹腔巨噬细胞,实时荧光PCR法检测ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ的蛋白表达水平.结果 阴性对照组家兔颈总动脉内膜平滑;模型组家兔颈总动脉内膜受损,管壁增厚,粥样斑块形成;电针组、阿托伐他汀组家兔管壁增厚情况改善明显,粥样斑块面积缩小.与阴性对照组比较,模型组家兔腹腔巨噬细胞中ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ mRNA和蛋白表达均降低(均P＜0.01);与模型组比较,电针组和阿托伐他汀组家兔腹腔巨噬细胞中ABCA1、ABCG1、SR-B ⅠmRNA和蛋白表达均升高(均P＜0.01);与电针组比较,阿托伐他汀组家兔腹腔巨噬细胞中ABCG1、SR-B Ⅰ mRNA升高,ABCA1、ABCG1、SR-B Ⅰ蛋白表达升高(均P＜0.01).结论 电针可上调AS家兔腹腔巨噬细胞ABCA1、ABCG1、SR-B Ⅰ mRNA及蛋白的表达,增强胆固醇逆转运过程,这可能是针刺治疗AS的机制.

ATP-binding cassette(ABC)transporters are integral membrane proteins that have evolved diverse func-tions fulfilled via the transport of various substrates.In Arabidopsis,the G subfamily of ABC proteins is particularly abundant and participates in multiple signaling pathways during plant development and stress responses.In this study,we revealed that two Arabidopsis ABCG transporters,ABCG16 and ABCG25,engage in ABA-mediated stress responses and early plant growth through endomembrane-specific dimerization-coupled transport of ABA and ABA-glucosyl ester(ABA-GE),respectively.We first revealed that ABCG 16 contributes to osmotic stress tolerance via ABA signaling.More specifically,ABCG16 induces cellular ABA efflux in both yeast and plant cells.Using FRET analysis,we showed that ABCG 16 forms oblig-atory homodimers for ABA export activity and that the plasma membrane-resident ABCG16 homodimers specifically respond to ABA,undergoing notable conformational changes.Furthermore,we demonstrated that ABCG16 heterodimerizes with ABCG25 at the endoplasmic reticulum(ER)membrane and facilitates the ER entry of ABA-GE in both Arabidopsis and tobacco cells.The specific responsiveness of the ABCG16-ABCG25 heterodimer to ABA-GE and the superior growth of their double mutant support an inhib-itory role of these two ABCGs in early seedling establishment via regulation of ABA-GE translocation across the ER membrane.Our endomembrane-specific analysis of the FRET signals derived from the homo-or heterodimerized ABCG complexes allowed us to link endomembrane-biased dimerization to the transloca-tion of distinct substrates by ABCG transporters,providing a prototypic framework for understanding the omnipotence of ABCG transporters in plant development and stress responses.

本文从薏苡仁脂干预耐药乳腺癌细胞的荧光药物动力学以及对耐药基因和蛋白表达量的影响两方面着手,研究薏苡仁脂逆转乳腺癌细胞耐药的机制.首先通过建立稳定过表达荧光素酶的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DOXFlus,应用生物发光成像技术(bioluminescence imaging,BLI),实时监测细胞内ATP结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白底物D-荧光素钾的外排动力学过程,检测薏苡仁脂干预前后D-荧光素钾的胞内动力学变化.结果表明,与空白组相比,薏苡仁脂明显减少MCF-7/DOXFluc对D-荧光素钾的外排,增加胞内累积量.此外,采用实时定量基因扩增荧光检测系统和蛋白免疫印迹技术,研究薏苡仁脂干预后MCF-7/DOXFluc中ABC转运子的基因及蛋白表达的变化.结果显示,薏苡仁脂处理后可下调MCF-7/DOXFluc细胞中P-糖蛋白(P-gp/ABCB1)、多药耐药相关蛋白1 (MRP1/ABCC1)以及乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)等耐药基因和蛋白的表达.最后将薏苡仁脂联合多柔比星对薏苡仁脂逆转乳腺癌耐药效果进行体外评价,结果证明薏苡仁脂可增强多柔比星抑制MCF-7/DOX细胞增殖的作用,其最佳联合比例为薏苡仁脂∶多柔比星=25∶1.薏苡仁脂可以通过抑制ABC转运蛋白的外排功能和下调ABC转运蛋白在肿瘤细胞表达水平,双管齐下逆转化疗药物多柔比星的肿瘤多药耐药.

目的:研究肿瘤干细胞标志物ABCG2在卵巢黏液性肿瘤中的表达,并探讨其临床意义.方法:采用免疫组织化学PV-9000两步法检测ABCG2在22例卵巢黏液性囊腺瘤、19例卵巢交界性黏液性肿瘤和25例卵巢黏液性囊腺癌中的表达水平,分析其表达情况与卵巢黏液性肿瘤的临床病理特征的关系.结果:ABCG2在卵巢黏液性囊腺瘤、卵巢交界性黏液性肿瘤和卵巢黏液性囊腺癌中的阳性表达率分别为18.2%、47.4%、80.0%,3组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).在卵巢黏液性囊腺癌中,ABCG2在中低分化的阳性表达率高于高分化(P＜0.05),Ⅲ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期(P＜0.05),但其表达与患者年龄无相关性(P＞0.05).结论:ABCG2可能参与卵巢黏液性肿瘤的发生、发展,其蛋白检测可能用于肿瘤恶性程度的判断.

旨在揭示盐芥(Eutrema salsugineum)ABCG25的结构及其对干旱、盐害以及温度等胁迫的响应.以山东生态型盐芥作为材料,通过电子克隆以及RT-PCR技术,获得一个腺苷三磷酸结合盒转运蛋白G(ABCG)家族成员基因的全长cDNA序列,命名为EsABCG25,GenBank登录号为KY111263.EsABCG25全长2 154 bp,含1 983 bp的开放阅读框,编码一个含有660氨基酸的蛋白分子.该基因定位于盐芥第5染色体,含有4个外显子和3个内含子.EsABCG25蛋白具有一个核苷酸结合结构域(NBD)和一个跨膜结构域(TMD),与来源于同科植物芜菁的ABCG25亲缘关系最近.对高通量测序数据分析表明该基因在盐芥的茎部表达最为丰富,在莲座叶中表达丰度最低,且在不同组织中均有可变剪接事件.Real-time PCR结果显示,该基因表达受多种逆境影响,尤其受到ABA的明显诱导.EsABCG25具有ABCG家族的典型序列特征;该基因在盐芥不同组织中的表达丰度存在差异,表达受到多种逆境的诱导,与盐芥的抗逆性关系密切.

目的:探讨芒果苷对尿酸诱导的高尿酸血症小鼠血尿酸、肠道尿酸转运体三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2[ATP-binding cassette superfamily G (White) member 2, ABCG2]mRNA及蛋白表达的影响, 初步探讨芒果苷降尿酸的作用机制.方法:昆明种小鼠60只, 随机分为6组, 每组10只, 分为正常组, 模型组组, 芒果苷 (1.5, 3.0, 6.0 mg·kg-1) 组和阳性药苯溴马隆 (25.0 mg·kg-1) 组, 除正常组外, 以腹腔注射的方式给予小鼠尿酸, 诱导形成高尿酸血症模型, 同时灌胃给予芒果苷及苯溴马隆, 2周后磷钨酸法检测小鼠血尿酸, 逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 及蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测小鼠空肠、回肠部ABCG2 mRNA和蛋白的表达, 并采用苏木素-伊红 (HE) 染色观察小鼠回肠病理学变化.结果:与正常组比较, 模型组小鼠血尿酸显著升高, 小鼠的空部、回肠部ABCG2 mRNA明显降低, 小鼠的空部、回肠部ABCG2蛋白明显升高 (P＜0.05, P＜0.01), 病理变化不明显;灌胃给药2周后, 与模型组比较, 芒果苷 (3.0, 6.0 mg·kg-1) 组小鼠血尿酸明显下降 (P＜0.05, P＜0.01), 芒果苷 (1.5, 3.0, 6.0 mg·kg-1) 组小鼠的空部、回肠部ABCG2 mRNA表达均明显的上调, 芒果苷 (6.0 mg·kg-1) 组小鼠空肠部ABCG2蛋白明显下调, 而在小鼠回肠部, 芒果苷 (3.0, 6.0 mg·kg-1) 组的ABCG2蛋白表达明显下调 (P＜0.05) .结论:芒果苷可明显降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平, 并能使小鼠肠道ABCG2 mRNA和蛋白表达改变恢复至正常水平.

目的 探讨R0切除结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者MTHFR、GSTP1、MSH3和ABCG1单核苷酸多态性(single nucle-otide polymorphisms,SNPs)与术后辅助化疗疗效和不良反应的关系.方法 收集2010年8月至2012年3月在河南省肿瘤医院行R0切除的42例CRC患者,术后均接受mFOLFOX6或XELOX方案化疗,并在化疗前收集血样,应用Sanger测序法检测42例CRC患者MTHFR-rs1801131、GSTP1-rs1695、MSH3-rs863221和ABCG1-rs425215的基因型,所有患者术后随访5年,分析各位点基因多态性与患者预后及化疗相关不良反应的关系.结果 仅MTHFR-rs1801131多态性与预后相关,MTHFR-rs1801131 AA基因型患者中位(disease-free survival,DFS)和(overall survival,OS)均显著长于AC/CC基因型(25个月vs 6.5个月,P=0.012;44.7个月vs 15.2个月,P=0.010).GSTP1-rs1695多态性与胃肠道不良反应有关,AA基因型患者Ⅱ级及以上胃肠道不良反应发生率远高于AG/GG基因型(25.0％vs 0,P=0.040).MSH3和ABCG1多态性与预后和不良反应之间无明显相关性.结论 MTHFR-rs1801131突变是R0切除CRC者辅助化疗效果较差的独立预测因子,GSTP1-rs1695突变患者化疗期间发生胃肠道不良反应更低.

目的 分析伴有血液学异常的植物固醇血症患者的临床及实验室特征.方法 回顾性分析2004至2017年在苏州大学附属第一医院就诊的20例植物固醇患者的临床资料,并进行外周血细胞、血脂分析、红细胞渗透脆性实验;高效液相色谱法检测血清中豆固醇、二氢胆固醇和谷固醇含量;PCR扩增先证者和家系成员ABCG5/8基因外显子及侧翼序列并结合测序分析突变情况.结果 20例植物固醇患者均曾被误诊为免疫性血小板减少或Evans综合征.所有患者均有脾肿大切除史,其中17例患者以血小板减少就诊并伴有不同程度的黄褐瘤,部分患者存在肝功能异常(9例)、早发型动脉粥样硬化(5例)及关节炎(4例)等.外周血溶血检查发现红细胞脆性增加,血涂片分析发现所有患者血小板大小不等、总体偏大,口形红细胞增多.患者血清谷固醇和豆固醇含量分别为331.05(276.00,670.20)mg/L和244.60(193.78,399.40)mg/L,约为健康人的10倍及24倍.测序分析共发现了ABCG5/8基因中14种突变,2/3位ABCG5基因[(E22X) 、p.(R446X) 、g.ISV7+3G＞A、p.(R446X) 、p.(R419H)、g.ISV7+3G＞A、p.(G90E)、p.(R389H)及g.7+2G＞A];而1/3位ABCG8基因[p.(M614-K628del)、p.(E25X)、p.(L86P fs X185)、p.(R263Q)、p.(E500D fs X604)、p.(G674R)],其中ABCG5 p.(R446X)突变有重现性.结论 血小板减少、口形红细胞增多及脾大是植物固醇血症患者特殊的临床表现,外周血小板及红细胞形态变化是该类患者典型的特征,临床确诊需进行ABCG5/8基因分析及血清植物固醇测定.

目的 探讨ABCG1基因三个单核苷酸多态性位点rs4148102、rs225445、rs183436与海南黎族脑梗死的关联性.方法 选择2015年1月至2018年6月在海南某院进行治疗的黎族脑梗死患者236例(病例组)及健康对照144例(对照组),提取两组患者外周血基因组DNA,利用飞行质谱法进行基因型分析.采用Snapstatus 分析软件分析单倍型与脑梗死的关联性及进行Hardy-Weinberg平衡验证,SPSS25. 0分析基因型分布差异及等位基因分布差异.结果 rs4148102在病例组和对照组中三种基因型GG、AG、AA的分布频率分别为62. 7%,25. 9%,11. 4%和52. 1%,38. 2%,9. 7%,组间差异有统计学意义(P<0. 05),GG在对照组中的发生频率显著低于病例组. rs225445三种基因型TT、CT、CC的分布频率分别为36. 9%,41. 1%,22. 0%和48. 6%,38. 2%,13. 2%,组间差异有统计学意义, CC在对照组中的发生频率显著低于病例组. rs225445位点等位基因T和C及rs183436位点等位基因C和A在两组中的分布频率差异有统计学意义(P<0. 05).结论 rs4148102 的基因型 GG、rs225445的基因型CC可能是海南黎族脑梗死的易感因素.