目的:评价海马含β4亚基的烟碱型乙酰胆碱受体(Chrnb4)在老龄小鼠术后谵妄中的作用。方法:SPF级雄性C56BL/6J小鼠48只，18月龄，体质量29～35 g。采用随机数字表法分为6组：胫骨骨折手术组(TF组， n＝6)、假手术组(Sham组， n＝6)、胫骨骨折手术＋阿地芬宁组(TA组， n＝9)、胫骨骨折手术＋对照溶剂组(TV组， n＝9)、假手术＋阿地芬宁组(SA组， n＝9)和假手术＋对照溶剂组(SV组， n＝9)。采用七氟烷麻醉下胫骨骨折手术制备术后谵妄模型。假手术为仅进行麻醉和皮肤切口并缝合。TA组、TV组、SA组、SV组于术前5 d置入脑室微量给药套管，每组再随机选取3只小鼠，置入海马CA1区微丝阵列电极。于术后30 min时，TA组和SA组脑室输注阿地芬宁(62.5 nmol/μl)2 μl，TV组和SV组给予对照溶剂2 μl，间断24 h给药，连续给予7 d。TF组及Sham组于术后24 h时，采用实时定量PCR法检测海马组织Chrnb4 mRNA表达水平。TA组、TV组、SA组、SV组分别于术后第7、8天采用旷场实验及O迷宫实验评价冲动样行为；行为学实验结束后，采用免疫荧光染色法检测海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及囊泡谷氨酸转运蛋白1(Vglut1)的表达，旷场实验期间记录小鼠海马CA1区局部场电位。 结果:与Sham组相比，TF组海马Chrnb4 mRNA表达上调( P<0.05)；与TV组相比，TA组和SV组旷场实验中心路程百分比和O迷宫开放象限停留时间百分比降低，CA1区场电位β波功率降低，海马CA1区GFAP和Vglut1表达下调，GFAP ＋-Vglut1 ＋共染面积减少( P<0.05)。SA与SV组各指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:海马Chrnb4可能参与了老龄小鼠术后谵妄的发生机制，该过程可能与抑制神经元兴奋性毒性有关。

目的:分析CHRNB1基因突变所致先天性肌无力综合征的临床表现、电生理及基因特点，提高对此病的诊断及鉴别诊断能力。方法:观察2019年2月就诊于空军军医大学唐都医院的CHRNB1基因突变所致先天性肌无力综合征一家系先证者的临床特点、实验室检查，对其进行电生理检查及高通量全外显子测序，并对治疗反应及预后进行评估。结果:先证者为16岁女性，4岁时出现双眼睑下垂，12岁时出现四肢无力。父亲有类似病史，母亲及一弟正常。心肌酶谱、甲状腺功能正常；重症肌无力抗体检测均为阴性；新斯的明试验阴性。双侧腋神经重复电刺激可见低频递减，针极肌电图未见肌源性损害。头颅磁共振成像、胸部CT检查结果大致正常。高通量全外显子测序：先证者CHRNB1基因8号外显子区域存在1个父源单杂合突变：c.865G>A（NM_000747）。予以氟西汀60 mg/d治疗，随访1年时四肢无力明显改善，眼睑下垂轻度改善。结论:CHRNB1基因突变所致慢通道先天性肌无力综合征患者临床及电生理表现与获得性自身免疫性重症肌无力相似，极易误诊，高通量全外显子测序可明确诊断。

离子通道在调节中枢神经系统兴奋性方面起着非常重要的作用.近年来研究发现,离子通道基因突变与很多原发性癫痫的发病高度相关.至今研究发现977个基因与癫痫相关,其中60个是离子通道基因.主要包括电压门控离子通道基因:钠离子通道(SCA1A、SCN1B、SCN2A等)、钾离子通道(KCNA2、KCNC1、KCNT1、KCNQ2、KCNQ3等)、氯离子通道(CLCN2等)及钙离子通道(CACNA1H、CACNA1A等)等;神经元递质受体门控通道基因:GABA受体(GABRA1、GABRB3、GABRD以及GABRG2等)、乙酰胆碱受体(CHRNA4、CHRNB2等)及其他门控通道及基因突变(HCN1、LGI1及PRRT2等).文中将重点综述近年来研究发现的离子通道基因突变与癫痫遗传学的相关性,以更好地辅助临床诊断及治疗.

目的:探讨在中国男性人群中吸烟、烟碱型乙酰胆碱受体亚单位β2(CHRNB2)上rs2072659与rs2072660位点多态性与肺癌的关联.方法:采用病例对照研究设计,收集204例男性原发性肺癌患者和821例正常健康男性作为研究对象.采用结构式问卷调查人口学特征、吸烟行为及健康相关行为等信息,检测静脉血CHRNB2基因簇上单核苷酸的多态性位点rs2072659与rs2072660的多态性.应用Kruskal-Wallis检验方法和多因素Logistic回归模型分析吸烟、CHRNB2基因簇上的基因多态性与肺癌的关联.结果:运用多因素logistic回归校正年龄、职业、教育程度、婚姻等混杂因素后,CHRNB2rs2072660 C/T基因型较C/C基因型相比,发生吸烟的风险降低(OR=0.710,95％CI=0.530-0.953);但相对于C/C基因型而言,CHRNB2rs2072660 C/T(OR=1.71,95％CI=1.17-2.50)发生肺癌的风险增加,rs2072659与rs207260的多态性和吸烟对肺癌不存在交互作用.结论:吸烟和CHRNB2中的rs207260的多态性是肺癌发生的危险因素.

目的 尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)作为一种尼古丁依赖相关性受体,其与吸烟行为以及吸烟量存在明显相关性,然而其在吸烟作为主要危险因素的肺癌发生发展中是否有重要作用目前尚罕见报道.本研究探讨nAChR在肺腺癌组织中的表达情况,以及CHRNA3-CHRNA5-CHRNB4基因簇在肺腺癌组织中的表达及预后意义.方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库收集486例肺腺癌数据集,下载CHRNA3-CHRNA5-CHRNB4基因簇表达谱资料及临床信息资料.应用免疫组化方法检测江苏省苏北人民医院2015-07-01-2017-12-31收治60例肺腺癌患者CHRNA3 CHRNA5-CHRNB4基因簇表达情况,分析其与临床病理特征关系及对预后的影响.采用基因集富集分析(genes enrichment analysis,GSEA)方法预测CHR NA5的调控基因.结果 CHRNA5基因表达水平与患者吸烟情况(x2=20.175,P＜0.001)、总生存期(overall survival,OS;x2=19.113,P＜0.001)及无复发生存期(recurrence free survival,RFS;x2 =22.116,P＜0.001)有关联,CHRNB4基因表达水平与吸烟情况(x2 =4.523,P=0.034)以及OS(x2=18.071,P＜0.001)有关联.CHRNA5 mRNA表达水平与患者预后有关联,x2OS=6.666,P=0.010;x2RFS=8.239,P=0.004.CHRNA5高表达患者OS以及RFS短于低表达患者.免疫组化结果示,肿瘤恶性程度越高,CHRNA5表达越高.60例肺腺癌患者CHRNA5阳性表达率为58.3％(35/60).CHRNA5高表达样本富集到细胞循环、骨架蛋白调控、紧密连接和TGFβ通路等基因集.结论 在肺腺癌组织中,CHRNA3-CHRNA5-CHRNB4基因簇高表达是一种预后不良因素.CHRNA5可以作为预测患者转移及判断预后的有效生物标志物.

目的 探讨血瘀质肺癌患者及其临床特征与CHRNB4 rs7178270基因多态性的关联性.方法 入组100例正常人及100例血瘀质非小细胞肺癌患者,记录肺癌患者的临床特征.抽取所有样本的外周血,检测CHRNB4rs7178270基因多态性,明确血瘀质与肺癌的关系;并根据性别,吸烟情况、鳞癌和腺癌类别及临床分期情况进行亚组分析.结果 CC纯合基因型在正常人和血瘀质肺癌患者中的分布具有显著差异,CC基因型能够显著增加肺癌的发病(OR=2.00,95％ CI:1.09-3.66);亚组分析发现,CC纯合基因型在男性中明显高于女性患者,其值分别为47.6％及27.0％ (P=0.042);在吸烟患者人群中,CC纯合基因型明显高于不吸烟患者人群(50％及30.8％,P=0.049);而在鳞癌和腺癌类别中以及临床分期之间,两者无明显差异.结论 CHRNB4 rs7178270位点的CC纯合基因型能够显著增加血瘀质人的肺癌易感性,且在男性、吸烟的人群中表现更加明显.

尼古丁(NIC)通过烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)在脑中起作用.nAChRs是由5个跨膜亚单位组成的配体门控离子通道,在哺乳动物中其包含9个α亚基(α2～α10)和3个β亚基(β2～β4).脑中nAchRs主要亚型为含α4和β2亚基的nAChR(α4β2-nAChR),其介导许多与NIC成瘾有关的行为.近期研究表明,α7、α5、α6-nAChR在NIC成瘾中起重要作用.编码α5、α3和β4的CHRNA5-CHRNA3-CHRNB4基因簇的遗传变异,增加了对烟草依赖和吸烟相关疾病(包括肺癌)的易感性.小鼠中α5或β4亚基的表达改变了NIC的消耗模式.此外,NIC对食欲、注意力和情绪的影响与吸烟习惯的建立和维持相关.

癫痫是一种由脑部异常同步或过度的神经元电活动导致的慢性脑部疾病,影响着全球约6500 万人[1].其发病机制较为复杂,在目前已发现的癫痫致病基因中,电压门控离子通道相关基因和配体门控离子通道相关基因分别占17％、10％ [2].国内外研究表明,癫痫发生发展与烟碱型乙酰胆碱受体( nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)基因突变相关,目前已证实, CHRNA2、CHRNA3、CHRNA4、CHRNA5、CHR-NA7、CHRNB2及CHRNB4的基因突变在癫痫的疾病进程中扮演着重要作用.我们查阅了近年来国内外发表的相关文献,对烟碱型乙酰胆碱受体基因与癫痫的研究进展综述如下.

目的:研究CHRNA5亚基突变对尼古丁受体功能的影响.方法:通过RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,并通过重叠延伸PCR方法对CHRNA5亚基基因定点突变,从而构建CHRNA5突变型及野生型表达载体,然后转染至HEK293T细胞中,检测其基因表达.并将其分别与CHRNA3和CHRNB4共转至HEK293T细胞中,检测三质粒共转后的基因表达;通过采用尼古丁持续灌流细胞10 min,然后检测细胞内钙离子内流峰值的变化情况,接下来检测突变对转染后细胞活力的影响.结果:构建的CHRNA5表达载体在转染HEK293T细胞48h后,能够检测到绿色荧光蛋白的表达,这证明重组载体已成功转染进HEK293T细胞;通过RT-PCR检测出转染细胞CHRNA5 mRNA表达,这证明CHRNA5突变型和野生型均在HEK293T细胞中成功进行了表达.通过尼古丁灌流细胞实验显示突变组和野生型组F340/F380峰值变化均值分别为0.865± 0.048和0.447±0.127,突变体组峰值显著高于野生型组(P＜0.05).细胞活力检测实验发现0.01 mM和0.1mM尼古丁刺激下突变组的细胞活力峰值分别为139％和137％,显著高于野生组的124％和126％,有显著差异(P＜0.05).结论:本研究成功构建了CHRNA5突变及野生型真核表达载体,发现CHRNA5的突变会导致其受体功能性改变,并影响细胞活力.

目的 探究尼古丁对心肌细胞凋亡的影响及与吸烟密切相关细胞色素酶P4501A1(Cyp1a1)和神经元乙酰胆碱受体β4亚基(Chrnb4)基因在尼古丁诱导心肌细胞凋亡中的作用机制.方法 根据不同方法将细胞分为对照组、尼古丁组、高糖/高脂模型组、尼古丁+高糖高脂模型组、shRNA-NC组、shRNA-Cyp1a1组、AMPK抑制剂组、shRNA-Cyp1a1+AMPK抑制剂组、shRNA-Chrnb4组、shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组.制备H9C2细胞高糖/高脂模型,转染Cyp1a1或Chrnb4干扰质粒,采用尼古丁或AMPK抑制剂处理.流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧、线粒体膜电位,ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶活性和微量丙二醛含量,Western blotting检测细胞中Cyp1a1、Chrnb4、Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK的表达.结果 尼古丁组、高糖/高脂模型组、尼古丁+高糖/高脂模型组SOD较对照组降低(P<0.05),尼古丁+高糖/高脂模型组较高糖/高脂模型组降低(P<0.05).尼古丁+高糖/高脂模型组MDA较对照组和高糖/高脂模型组升高(P<0.05).高糖/高脂模型组、尼古丁+高糖/高脂模型组ROS含量较对照组升高(P<0.05),尼古丁+高糖/高脂模型组较高糖/高脂模型组升高(P<0.05).尼古丁组、高糖/高脂模型组、尼古丁+高糖/高脂模型组线粒体膜电位较对照组降低(P<0.05),尼古丁+高糖/高脂模型组较高糖/高脂模型组降低(P<0.05).尼古丁组、高糖/高脂模型组、尼古丁+高糖/高脂模型组Cyp1a1和Chrnb4 mRNA相对表达量较对照组升高(P<0.05),尼古丁+高糖/高脂模型组较高糖/高脂模型组升高(P<0.05).尼古丁组和尼古丁+高糖/高脂模型组Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyp1a1、Chrnb4蛋白相对表达量较对照组升高(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达量较对照组降低(P<0.05),高糖/高脂模型组p-AMPK蛋白相对表达量较对照组降低(P<0.05),Caspase-9、Cyp1a1、Chrnb4蛋白相对表达量较对照组升高(P<0.05),尼古丁+高糖/高脂模型组Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyp1a1、Chrnb4蛋白相对表达量较高糖/高脂模型组升高(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达量较高糖/高脂模型组降低(P<0.05).shRNA-Cyp1a1组心肌细胞凋亡率较shRNA-NC组降低(P<0.05),AMPK抑制剂组和shRNA-Cyp1a1+AMPK抑制剂组较shRNA-NC组增加(P<0.05),shRNA-Cyp1a1+AMPK抑制剂组较AMPK抑制剂组降低(P<0.05).shRNA-Cyp1a1组Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyp1a1蛋白相对表达量较shRNA-NC组降低(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达量较shRNA-NC组升高(P<0.05),AMPK抑制剂组Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyp1a1蛋白相对表达量较shRNA-Cyp1a1+AMPK抑制剂组升高(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达量较shRNA-Cyp1a1+AMPK抑制剂组降低(P<0.05),shRNA-Cyp1a1+AMPK抑制剂组Cyp1a1蛋白相对表达量与shRNA-Cyp1a1组无差异(P>0.05).shRNA-Chrnb4组心肌细胞凋亡率较shRNA-NC组降低(P<0.05),AMPK抑制剂组和shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组较shRNA-NC组增加(P<0.05),shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组较AMPK抑制剂组降低(P<0.05).shRNA-Chrnb4组Caspase-2、Caspase-3、Cas-pase-9、Chrnb4蛋白相对表达量较shRNA-NC组降低(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达量较shRNA-NC组升高(P<0.05),AMPK抑制剂组和shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白相对表达量较shRNA-NC组升高,p-AMPK蛋白相对表达量较shRNA-NC组降低(P<0.05),shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组Chrnb4蛋白较shRNA-NC组降低,shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组Caspase-2、Caspase-3、Caspase-9、Chrnb4蛋白相对表达量较AMPK抑制剂组降低(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达量较AMPK抑制剂组升高(P<0.05).shRNA-Chrnb4+AMPK抑制剂组Chrnb4蛋白相对表达量与shRNA-Chrnb4组无差异(P>0.05).结论 Cyp1a1、Chrnb4参与尼古丁诱导心肌细胞凋亡,其机制可能是通过抑制AMPK磷酸化,导致线粒体功能障碍,氧化应激增加,最终激活Caspase-2凋亡途径.