目的:探讨Dickkopf相关蛋白3(DKK3)基因高甲基化对直肠癌增殖、迁移及侵袭的影响及其临床价值。方法:SW480、LOVO、HT29及HCT116等直肠癌细胞购自中国科学院细胞库。选择2016年1月至2016年12月直肠癌患者(直肠癌组)及直肠良性疾病患者(对照组)为研究对象。设计合成寡核苷酸序列(MON、UMON和CON)并转染至LOVO直肠癌细胞。采用甲基特异性PCR检测直肠癌患者(肿瘤组织、癌旁组织)、对照组直肠组织及直肠癌细胞系中DKK3基因甲基化状态；分析DKK3基因甲基化与临床病理因素、无进展生存期(PFS)及总生存期的关系；Transwell小室检测MON组、UMON组及CON组LOVO直肠癌细胞迁移及侵袭。两组间均数比较用独立样本 t检验；多组间均数比较用单因素方差分析(组间比较用LSD- t检验)。Kaplan-Meier生存分析并采用Log-rank比较。 结果:直肠癌组患者肿瘤组织DKK3基因甲基化率显著高于癌旁组织及对照组直肠组织(甲基化率分别72.2%、11.1%比12.0%)，差异有统计学意义( χ2＝88.756， P<0.05)。SW480、HT29及HCT116等直肠癌细胞系中DKK3基因呈甲基化状态，而在LOVO直肠癌细胞中呈未甲基化状态。低+中分化、N2淋巴结转移、肿瘤最大径≥3 cm、T3+T4及Ⅲ+Ⅳ期患者DKK3基因甲基化率显著高于高分化、N0+N1淋巴结转移、肿瘤最大径<3 cm、T1+T2及Ⅰ+Ⅱ期患者(甲基化率分别79.31%比59.38%、86.11%比62.96%、83.67%比58.54%、83.33%比59.52%、82.76%比53.13%)，差异有统计学意义( χ2＝5.922、4.673、5.833、5.198、7.610，均 P<0.05)。DKK3基因甲基化患者PFS及中位生存期显著低于DKK3基因未甲基化患者[PFS为(24.4±3.8)个月比(33.7±4.1)个月，中位生存期为(31.5±4.2)个月比(42.8±5.4)个月]，差异有统计学意义(Log-rank＝21.135、30.876， P<0.05)。MON组LOVO直肠癌细胞1~6 d细胞活力、细胞迁移数及侵袭数均显著高于UMON组及CON组LOVO直肠癌细胞[1 d的吸光度( A)值分别为0.21±0.03、0.14±0.03比0.15±0.04、2 d的 A值分别为0.31±0.04、0.21±0.04比0.23±0.05、3 d的 A值分别为0.42±0.05、0.29±0.05比0.28±0.06、4 d的 A值分别为0.57±0.05、0.33±0.06比0.35±0.05、5 d的 A值分别为0.71±0.08、0.45±0.06比0.44±0.07、6 d的 A值分别为0.89±0.09、0.53±0.08比0.54±0.09，细胞迁移数分别为(687.1±23.5)、(287.5±15.4)个比(285.9±15.1)个；细胞侵袭数分别为(419.6±34.2)、(151.7±14.9)个比(152.6±15.5)个]，差异有统计学意义( F＝11.382、13.263、14.651、16.128、19.877、21.235、44.981、37.247， P<0.05)。 结论:DKK3基因高甲基化可促进直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭，有助于直肠癌病情及预后评估。

Dickkopf-1（DKK1）是一种分泌型糖蛋白，作为Wnt/β-连环素通路的抑制剂，在胚胎发育、神经发生和突触发生等方面发挥重要作用。脑缺血后，DKK1通过促进神经元凋亡及血脑屏障损伤，抑制神经发生和血管生成，从而加重脑损伤。此外，缺血性卒中患者血清DKK1与不同病期及转归相关。因此，开发以DKK1作为靶点的特异抑制剂，有望应用于缺血性卒中的治疗。

目的:探讨膀胱癌组织中Dickkopf相关蛋白3（DKK3）、泛素结合酶E2T（UBE2T）表达与患者临床病理特征、预后的关系。方法:选取2019年2月至2021年3月73例于华润武钢总医院确诊的膀胱癌患者，以膀胱癌组织为研究组，以癌旁组织为对照组，Spearman等级相关分析膀胱癌组织中DKK3、UBE2T相关关系，影响膀胱癌患者预后的因素采用Cox回归分析， Kaplan- Meier分析DKK3、UBE2T与膀胱癌患者预后的关系。 结果:膀胱癌组织中DKK3阴性表达率、UBE2T阳性表达率高于癌旁组织（73.97%比50.68%、69.86%比21.92%， χ2＝8.430、33.790， P<0.05）。膀胱癌组织中DKK3与UBE2T为负相关，相关性系数 r＝－0.631、 P<0.01。肿瘤直径>2 cm（66.67%、66.67%）、TNM分期T2～T4（70.37%、68.63%）、淋巴结转移（68.52%、74.51%）的膀胱癌患者DKK3阴性、UBE2T阳性的表达比例高于肿瘤直径≤2 cm（33.33%、33.33%）、TNM分期Ta～T1（29.63%、31.37%）、未淋巴结转移（31.48%、25.49%）的患者（ χ2＝5.777、4.932、11.848， P<0.05）。多因素分析结果显示肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、UBE2T是膀胱癌患者预后危险因素[风险比（ HR）＝3.750、1.972、1.166、4.679， P<0.05]，DKK3（ HR＝0.857）是膀胱癌患者预后保护因素（ P<0.05）。DKK3阴性表达患者54例存活31例，DKK3阳性表达患者19例存活17例，DKK3阴性表达患者生存率高于DKK3阴性患者（89.47%比57.41%， χ2＝5.073， P<0.05），UBE2T阳性表达患者51例存活29例，UBE2T阴性表达患者22例存活19例，UBE2T阴性表达患者生存率高于UBE2T阳性患者（86.36%比56.86%， χ2＝4.702， P<0.05）。 结论:膀胱癌组织中DKK3、UBE2T表达与患者临床病理特征严重程度相关，与膀胱癌患者预后密切相关。

目的:1型糖尿病与2型糖尿病均有骨代谢异常，但发病机制存在差异。硬骨抑素(sclerostin, SOST)、Dickkopf相关蛋白1(Dickkopf-related protein 1, DKK-1)、鸢尾素是新近发现的骨代谢调节因子。本研究拟比较1型糖尿病与2型糖尿病患者血清SOST、DKK-1、鸢尾素水平的差异。方法:本横断面研究纳入2017年至2019年于北京协和医院内分泌科门诊就诊的101例1型糖尿病患者、2014年至2015北京昌平社区2型糖尿病管理项目中经口服葡萄糖耐量试验筛查确诊的55例2型糖尿病患者和59名糖耐量正常受试者。使用酶联免疫吸附测定法测SOST、DKK-1及鸢尾素，并分析其组间差异。结果:本研究女性多于男性，平均年龄49岁。1型糖尿病组较2型糖尿病组病程更长( P<0.001)，HbA 1C更高( P<0.001)，两组间年龄差异无统计学意义。1型糖尿病和2型糖尿病组的血清1型原胶原N端前肽(P1NP)均低于对照组[(8 579±400)pg/mL，(7 268±552)pg/mL对(10 051±618)pg/mL, P＝0.039, P＝0.001]，而1型胶原C端肽交联β降解产物(β-CTX)与对照组相比差异无统计学意义。1型糖尿病和2型糖尿病组SOST均高于对照组[(129.7±6.8)pg/mL，(104.8±6.8)pg/mL对(85.9±5.3)pg/mL, P<0.001, P＝0.030]，1型糖尿病与对照组差异在校正血糖、血脂等因素后失去统计学意义，1型糖尿病组与2型糖尿病组组间SOST差异无统计学意义。1型糖尿病组和2型糖尿病组DKK-1与对照组差异无统计学意义，1型糖尿病组DKK-1较2型糖尿病组更低或倾向于更低。1型糖尿病组鸢尾素高于对照组及2型糖尿病组[(16.6±0.7)ng/mL对(9.6±0.6)ng/mL, (9.8±0.6)ng/mL，均 P<0.001]，2型糖尿病组鸢尾素与对照组差异无统计学意义。 结论:1型糖尿病及2型糖尿病患者成骨指标P1NP受到抑制，破骨指标β-CTX无显著改变。SOST在1型糖尿病及2型糖尿病患者中均升高或呈升高趋势，可能与其成骨抑制相关。而1型糖尿病患者还存在鸢尾素升高，也可能参与其骨转换异常的发生发展。

目的:探讨Zeste同源物增强子2(EZH2)和Dickkopf相关蛋白1(DKK1)在重型颅脑损伤患者血清中变化及临床意义。方法:选取2021年6月至2022年10月在遂宁市中心医院接受治疗的160例重型颅脑损伤患者为观察组及165例健康体检志愿者为对照组。以格拉斯哥昏迷评分(GCS)分重型组75例，特重型组85例。酶联免疫吸附法检测患者重型颅脑损伤后第1、3、7天血清EZH2、DKK1水平(对照组为入组第1天)。两组间比较行 t检验；Logistic回归分析影响患者预后的因素；受试者工作特征曲线分析血清中EZH2、DKK1水平对患者预后的预测价值。 结果:观察组患者血清EZH2水平低于对照组[(11.28±3.45) μg/L比(25.23±5.87) μg/L， t＝26.017， P<0.05]，DKK1水平高于对照组[(610.80±126.32) μg/L比(178.94±54.76) μg/L， t＝40.194， P<0.05]；特重型组患者血清EZH2水平低于重型组[(8.54±2.72) μg/L比(14.38±4.28) μg/L， t＝10.421， P<0.05]，DKK1水平高于重型组[(821.06±159.02) μg/L比(385.84±89.26) μg/L， t＝20.962， P<0.05]。第3天重型组与特重型组患者血清EZH2水平均高于第1、7天[(19.45±5.79) μg/L比(14.38±4.28)、(15.25±4.47) μg/L， t＝6.098、4.973， P<0.05；(14.01±4.04) μg/L比(8.54±2.72)、(9.98±3.19) μg/L， t＝10.355、7.218， P<0.05]，第3天重型组与特重型组患者DKK1水平均低于第1、7天[(271.81±72.21) μg/L比(385.84±89.26)、(345.54±84.21) μg/L， t＝8.601、5.756， P<0.05；(576.45±101.50) μg/L比(821.06±159.02)、(757.21±141.49) μg/L， t＝11.954、9.571， P<0.05]；良好组患者血清EZH2水平明显降低于预后不良组[(7.27±2.35) μg/L比(13.27±3.95) μg/L， t＝9.959， P<0.05]，DKK1水平高于预后不良组[(798.02±198.81) μg/L比(525.70±93.37) μg/L， t＝11.812， P<0.05]。第3天预后良好组与预后不良组患者血清EZH2水平均高于第1、7天[(18.46±5.56) μg/L比(13.27±3.95)、(14.36±4.36) μg/L， t＝7.981、6.086， P<0.05；(12.38±3.32) μg/L比(7.27±2.35)、(8.25±2.54) μg/L， t＝8.883、6.986， P<0.05]，第3天预后良好组与预后不良组患者DKK1水平均低于第1、7天[(381.19±82.17) μg/L比(525.70±93.37)、(485.24±85.74) μg/L， t＝17.377，12.512， P<0.05；(549.06±100.09) μg/L比(798.02±198.81)、(738.04±178.22) μg/L， t＝10.693，8.117， P<0.05]；GCS评分高[比值比( OR)＝0.872， P<0.05]、高水平EZH2( OR＝0.515， P<0.05)是影响患者预后的保护因素，高水平DKK1( OR＝1.013， P<0.05)是影响患者预后的危险因素；EZH2、DKK1联合预测患者预后的曲线下面积为0.965[95%可信区间( CI)：0.939~0.991]，均优于其各自单独预测( Z两者联合－EZH2＝1.930， P<0.05； Z两者联合－DKK1＝2.663， P<0.05)。 结论:重型颅脑损伤患者血清EZH2水平随时间先升高再降低，DKK1水平先降低再升高，均与患者病情严重程度及预后明显相关。

目的:探讨Dickkopf相关蛋白1 （Dickkopf 1，DKK1）基因启动子甲基化水平与2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）微血管病变合并骨质疏松（osteoporosis，OP）的相关性。方法:收集2019年1月至2022年12月于临沂市中心医院就诊的T2DM微血管病变患者作为研究对象，根据是否合并OP症将患者分为观察组（44例）和对照组（58例）。测量研究对象的腰椎（L1~4）骨密度，检测骨代谢指标，包括血钙、血磷、25-维生素D 3[25-hydroxy vitamin D 3, 25-（OH）D 3]、甲状旁腺素（parathyroid hormone，PTH）、I型胶原C-末端肽（C-terminal telopeptide of typeI collagen, CTX）、I型前胶原N-末端肽（procollagen of aminoterminal propeptide, PINP）及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase, TRACP）水平；测定DKK1基因启动子甲基化水平。 结果:观察组的DKK1基因启动子甲基化水平为5.17%±0.73%，显著高于对照组的3.81%±0.61%，差异有统计学意义（ t=5.22， P<0.001）。观察组的25-（OH）D 3水平、PTH和腰椎骨密度显著低于对照组，CTX和TRACP水平显著高于对照组（ t=5.58、4.35、4.12、4.05、4.17， P均<0.001）。在所有患者中，DKK1基因启动子甲基化水平与CTX、TRACP呈显著正相关关系（ r=0.41、0.39， P=0.006、0.027），与PTH、腰椎骨密度呈显著负相关关系（ r=-0.38、-0.43， P=0.015、0.003）。ROC曲线分析结果显示，DKK1基因甲基化水平区分T2DM微血管病变合并和未合并OP的曲线下面积为0.841（0.762~0.921），灵敏度和特异度分别为86.4%、72.4%。 结论:DKK1基因启动子甲基化水平与T2DM微血管病变患者发生OP及骨代谢指标有关。

原发性肝癌包括肝细胞癌、肝内胆管癌和混合型肝细胞癌-胆管癌3种类型，其中肝细胞癌占75%~85%，严重威胁人类的生命和健康。对肝细胞癌高危人群的筛查与监测，有助于早发现、早诊断和早治疗，是提高肝癌疗效的关键。血清生物学标志物在肝细胞癌监测和诊断中具有重要作用。近年来，新型血清生物学标志物如甲胎蛋白异质体比率、异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原、高尔基体蛋白73、Dickkopf相关蛋白1、醛酮还原酶-AKR1B10、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、液体活检及微小RNA等被推荐用于肝细胞癌监测研究，有些已被列入肝细胞癌指南的辅助诊断工具。本文对这些肝癌新型生物标志物的相关基础研究及临床进展进行总结，供临床参考。

目的:初步探讨在培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)层面，晚期糖基化终末产物(AGEs)对BMSCs成骨分化中β-catenin、碱性磷酸酶(ALP)的影响，以及甲状旁腺激素(PTH)的干预及其机制。方法:取第三代BMSCs，检测AGEs对其增殖的影响。将BMSCs分为对照组、AGEs组、Wnt3a组、AGEs+Wnt3a组；对照组、AGEs组、AGEs+晚期糖基化终末产物受体(RAGE)抗体组；对照组、AGEs组、AGEs+PTH组；对照组、PTH组、PTH+Dickkopf相关蛋白1(DKK1)组，应用Western-blot法检测β-catenin、ALP蛋白的表达。结果:BMSCs的增殖可以被AGEs抑制。0.2 g/L AGEs干预BMSCs 7 d，AGEs抑制β-catenin、ALP蛋白表达有统计学差异；给予Wnt通路促进剂Wnt3a后，AGEs作用被抑制，β-catenin、ALP蛋白表达较AGEs组增加；加入10 mg/L RAGE中和抗体共培养，与AGEs组相比，β-catenin、ALP蛋白表达增高。加入PTH后可以逆转AGEs的负性成骨作用，β-catenin、ALP蛋白表达增高；加入Wnt通路阻滞剂DKK1共培养，β-catenin、ALP蛋白表达较PTH组增加。结论:AGEs-RAGE通过Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠BMSCs ALP蛋白表达；PTH逆转AGEs对β-catenin、ALP的负性作用。

目的:单细胞RNA测序解析普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面中CD34 +细胞的类型与功能。 方法:该研究为实验研究。构建CD34 +细胞谱系追踪小鼠，实现CD34 +细胞在荧光条件下可视化。取6只7~8周龄雄性CD34 +细胞谱系追踪小鼠（设为糖尿病组），腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型，于小鼠13周龄时在其背部制备全层皮肤缺损创面；另取6只13周龄雄性CD34 +细胞谱系追踪小鼠（设为对照组），在其背部制备全层皮肤缺损创面。伤后4 d，分别收集对照组3只小鼠和糖尿病组2只小鼠创面组织，消化制备单细胞悬液，采用荧光活化细胞分选法筛选出CD34 +细胞后进行单细胞RNA测序，采用R语言的Seurat 4.0.2程序通过降维可视化和细胞聚类分析CD34 +细胞类型并筛选注释各CD34 +细胞亚群的标记基因，对2组小鼠创面组织间CD34 +成纤维细胞（Fb）、平滑肌细胞、角质形成细胞（KC）、类软骨细胞的差异表达基因（DEG）进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析，探索细胞功能。 结果:伤后4 d，2组小鼠创面组织中CD34 +细胞均包含7种细胞类型，具体为内皮细胞、Fb、KC、巨噬细胞、T细胞、平滑肌细胞和类软骨细胞，其中Fb细分为5个亚群。与对照组比较，糖尿病组小鼠创面组织中的CD34 +内皮细胞、Fb亚群1、Fb亚群4、KC、类软骨细胞占比升高，CD34 +Fb亚群2、Fb亚群3和平滑肌细胞占比下降。注释CD34 +类软骨细胞、内皮细胞、Fb亚群1、Fb亚群2、Fb亚群3、Fb亚群4、Fb亚群5、KC、巨噬细胞、平滑肌细胞、T细胞的标记基因分别为转移相关肺腺癌转录本1、脂肪酸结合蛋白4、Gremlin 1、补体成分4B、H19印记母源表达转录本、Dickkopf Wnt信号通路抑制剂2、纤维调节蛋白、角蛋白5、CD74分子、G蛋白信号调节蛋白5、可诱导T细胞共刺激分子。KEGG和GO富集分析显示，与对照组比较，糖尿病组小鼠伤后4 d创面组织中CD34 +Fb差异表达显著的DEG显著富集于炎症反应、细胞外基质（ECM）组装、细胞增殖调控、衰老相关条目（ P值均<0.05），CD34 +平滑肌细胞差异表达显著的DEG显著富集于细胞迁移、凋亡过程、转录的正调控、吞噬体等条目（ P值均<0.05），CD34 +KC差异表达显著的DEG显著富集于线粒体功能、转录、神经退行性疾病相关条目（ P值均<0.05），CD34 +类软骨细胞差异表达显著的DEG显著富集于节律调控、ECM、病毒感染等相关条目（ P值均<0.05）。 结论:CD34 +细胞在普通小鼠和糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中均存在高异质性，2种小鼠创面间CD34 +细胞亚群差异表达显著的DEG显著富集的相关功能与创面愈合过程紧密相关。

目的:探讨血清硬骨素（recombinant sclerostin，SOST）、dickkopf相关蛋白1（dickkopf-like protein 1，DKK-1）水平与分化型甲状腺癌（differentiated thyroid carcinoma，DTC）术后发生骨质疏松患者骨代谢指标的相关性。方法:收集山西医科大学第二医院110例DTC术后诊断为骨质疏松的患者作为观察组，另收集110例DTC术后未诊断出骨质疏松的患者作为对照组。对比两组患者一般资料、骨密度、硬骨素（recombinant sclerostin，SOST）、DKK-1水平与骨代谢指标Ⅰ型前胶原氨基端原肽（N-terminal propeptide of type I procollagen，PINP）、骨碱性磷酸酶（bone alkaline phosphatase，BALP）、β-异构C-端肽（beta-isomerized C-telopeptide，β-CTX）、25-羟基维生素D3[25-hydroxyvitamin D3，25-（OH）D3]水平。分析血清SOST、DKK-1水平与骨代谢指标的相关性，探讨影响骨质疏松形成的危险因素。结果:观察组患者骨密度T值（-3.27±0.92）显著低于对照组（-1.23±0.27， t=22.32， P<0.001）。观察组血清SOST（15.84±1.34， t=32.53， P<0.001）、DKK-1（5.96±1.40， t=4.82， P<0.001）水平显著高于对照组（SOST：10.24±1.21，DKK-1：5.05±1.40）。观察组血清PINP（40.95±9.84， t=7.59， P<0.001）、BALP（23.14±5.26， t=5.06， P<0.001）、β-CTX（1.07±0.54， t=4.96， P<0.001）水平显著高于对照组（31.48±8.64，19.64±4.99，0.78±0.29），25-（OH）D 3水平（13.68±4.49）显著低于对照组（18.31±5.72， t=6.68， P<0.001）。血清SOST与PINP（ r=0.33， P=0.001）、BALP（ r=0.23， P=0.016）、β-CTX（ r=0.19， P=0.046）呈显著正相关，与25-（OH）D 3相关性不显著（ r=-0.09， P=0.349）。血清DKK-1与PINP（ r=0.19， P=0.044）、BALP（ r=0.26， P=0.007）、β-CTX（ r=0.21， P=0.028）呈显著正相关，与25-（OH）D 3相关性不显著（ r=-0.16， P=0.088）。血清SOST、DKK-1水平是影响骨质疏松形成的独立危险因素（均 P<0.05）。 结论:血清SOST、DKK-1水平是影响骨质疏松形成的独立危险因素，其与DTC术后骨质疏松患者骨代谢指标PINP、BALP、β-CTX呈显著正相关。