目的 探讨安罗替尼联合放疗治疗表皮生长因子(EGFR)突变晚期肺腺癌的临床疗效.方法 依据治疗方法的不同将100例EGFR突变晚期肺腺癌患者分为对照组和观察组,每组50例,对照组患者接受放疗,观察组患者接受放疗联合安罗替尼治疗.比较两组患者的近远期疗效、不良反应发生情况、肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]水平、脂肪酸合成酶(FAS)及肿瘤M2型丙酮酸激酶(TuM2-PK)水平.结果 观察组患者的客观缓解率为90.00%,高于对照组患者的74.00%,差异有统计学意义(P﹤0.05).治疗后,两组患者NSE、CYFRA21-1、CA125、CEA、FAS、TuM2-PK水平均低于本组治疗前,且观察组患者NSE、CYFRA21-1、CA125、CEA、FAS、TuM2-PK水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).观察组患者的不良反应总发生率为6.00%,与对照组患者的10.00%比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).观察组患者的平均无进展生存期(PFS)为(9.82±2.03)个月,明显长于对照组患者的(7.36±1.23)个月,差异有统计学意义(P﹤0.01).结论 安罗替尼联合放疗治疗EGFR突变晚期肺腺癌的临床疗效较好,可有效降低肿瘤标志物水平,延长PFS,且不增加不良反应发生风险.

目的:探讨妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)患者烯醇化酶(enolase,Eno)含量、阴道微生态与妊娠结局的相关性.方法:选取2021年4月—2022年4月在中国人民解放军联勤保障部队第九八○医院产科住院并分娩的77例妊娠期VVC患者为研究对象,根据妊娠结局分为不良妊娠结局组49例、正常妊娠结局组28例.比较2组患者一般资料、阴道微生态指标、(1,3)-β-D-葡聚糖和Eno水平.Logistic回归分析妊娠期VVC患者发生不良妊娠结局的影响因素.受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析(1,3)-β-D-葡聚糖、Eno对妊娠期VVC患者不良妊娠结局的诊断价值.结果:不良妊娠结局组抗感染治疗患者比例低于正常妊娠结局组(x2=4.270,P=0.039).不良妊娠结局组阴道菌群密集度Ⅱ～Ⅲ级、菌群多样性Ⅱ～Ⅲ级、清洁度Ⅰ～Ⅱ度、pH值3.8～4.5、过氧化氢阳性和白细胞酯酶阴性患者的比例均低于正常妊娠结局组(均P＜0.05).不良妊娠结局组(1,3)-β-D-葡聚糖和Eno水平均高于正常妊娠结局组,差异有统计学意义(均P＜0.001).(1,3)-β-D-葡聚糖和Eno升高均是妊娠期VVC患者发生不良妊娠结局的危险因素(P＜0.05),阴道菌群密集度为Ⅱ～Ⅲ级是保护因素(P＜0.05).(1,3)-β-D-葡聚糖、Eno两者联合诊断妊娠期VVC患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under the curve,AUC)高于单一指标,联合诊断的敏感度为 95.92％,特异度为 82.14％,二者联合优于(1,3)-β-D-葡聚糖(Z=2.092,P=0.036)、Eno(Z=2.703,P=0.007)各自单独诊断.结论:(1,3)-β-D-葡聚糖和Eno水平升高、阴道微生态发生异常均可增加妊娠期VVC患者发生不良妊娠结局的风险,可利用(1,3)-β-D-葡聚糖和Eno联合对妊娠期VVC患者进行不良妊娠结局的风险筛查.

目的:探讨抑制α-烯醇化酶(ENO1)联合紫杉醇对肝癌细胞系SK-HEP-1增殖、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法:采用脂质体法将siRNA-ENO1(siRNA-ENO1组)及siRNA-NC(siRNA-NC组)转染至肝癌SK-HEP-1细胞，将未转染的SK-HEP-1细胞作为对照组，采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染效果。使用0、2.5、5、10、20和40 μg/L紫杉醇处理SK-HEP-1细胞48 h，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率并计算紫杉醇的半抑制浓度。使用10 μg/L紫杉醇处理转染siRNA-ENO1(紫杉醇+siRNA-ENO1组)和siRNA-NC(紫杉醇+siRNA-NC组)的SK-HEP-1细胞，采用MTT法、克隆形成实验、Transwell实验和流式细胞术检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和凋亡能力，Western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平。结果:siRNA-ENO1组细胞中ENO1 mRNA和蛋白表达表达水平(分别为0.25±0.03和0.23±0.02)均低于对照组(分别为1.00±0.00和0.69±0.04，均 P<0.05)。2.5、5、10、20和40 μg/L紫杉醇作用48 h，肝癌SK-HEP-1细胞存活率[分别为(88.65±6.46)%、(72.36±6.08)%、(60.48±4.23)%、(38.52±3.56)%和(20.75±2.32)%]均低于对照(0 μg/L)组[(100.00±0.00)%，均 P<0.05]。紫杉醇半抑制浓度为13.26 μg/L。siRNA-ENO1组细胞存活率和克隆形成率[分别为(68.86±5.12)%和(18.12±2.25)%]均低于siRNA-NC组[分别为(100.00±0.00)%和(29.65±3.06)%)，均 P<0.05]；紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞存活率和克隆形成率[分别为(43.28±2.64)%和(8.72±0.52)%]与紫杉醇+siRNA-NC组[分别为(61.75±5.06)%和(13.48±2.16)%)]和siRNA-ENO1组[分别为(68.86±5.12)%和(18.12±2.25)%)]比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞侵袭数[(23.64±2.12)个]低于siRNA-ENO1组和紫杉醇+siRNA-NC组[分别为(42.16±2.75)个和(37.35±2.42)个，均 P<0.05]。紫杉醇+siRNA-NC组和siRNA-ENO1组细胞凋亡率[分别为(17.49±1.35)%和(15.29±1.50)%]高于siRNA-NC组[(7.21±0.70)%，均 P<0.05]；紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞凋亡率[(24.59±2.40)%]高于紫杉醇+siRNA-NC组和siRNA-ENO1组[分别为(17.49±1.35)%和(15.29±1.50)%，均 P<0.05]。siRNA-ENO1组和紫杉醇+siRNA-NC组细胞中ENO1、PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt表达水平及PCNA、MMP-9、Bcl-2表达水平均低于siRNA-NC组(均 P<0.05)；紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞中ENO1、p-PI3K、p-Akt及PCNA、MMP-9、Bcl-2表达水平均低于siRNA-ENO1组和紫杉醇+siRNA-NC组(均 P<0.05)。 结论:抑制ENO1表达可增强紫杉醇对肝癌SK-HEP-1细胞的抑增殖、侵袭和促凋亡作用，其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

目的:利用生物信息学分析方法挖掘三叉神经痛（trigeminal neuralgia, TN）的关键基因并探索其重要免疫相关生物标志物。方法:从基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）获取与TN相关的基因表达谱数据集GSE186505，数据集中包含20个样本的芯片数据，其中10个是TN样本，10个是健康对照（healthy controls, HC）样本。用生物信息学方法对高通量测序数据进行标准化、归一化和显著性检验筛选与TN相关的差异表达基因（differentially expressed genes, DEG），并进行基因本体（gene ontology, GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）富集分析探索DEG的潜在生物学功能，通过蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction, PPI）网络进一步筛选TN相关的关键基因，利用CIBERSORT分析不同样品中免疫细胞的浸润程度。结果:共筛选出56个DEG，其中包括23个上调基因和33个下调基因。在PPI分析中鉴定了两个必要的PPI模块，基于STRING数据库筛选出ANXA5、ENO1、CA2、FBP1、CD9、SMPD3、VSTM1、SPNS3、PRSS33、FAS、LENG8这11个关键基因可能参与TN的发生机制。富集分析表明，TN与细胞对肿瘤坏死因子的反应、半胱氨酸型内肽酶活性的调节、膜的外在成分、磷脂结合的外部成分和嘧啶代谢等密切相关（ P<0.05）。免疫细胞浸润分析显示，幼稚B细胞、M2巨噬细胞在TN样本中表达明显增加，而记忆B细胞、幼稚CD4 + T细胞在HC样本中表达增加。 结论:TN的发病机制可能是通过调节ANXA5、ENO1、CA2、FBP1、CD9、SMPD3、VSTM1、SPNS3、PRSS33、FAS、LENG8等基因，参与细胞对肿瘤坏死因子的反应、半胱氨酸型内肽酶活性的调节等生物过程，调控嘧啶代谢、糖酵解/糖异生、碳代谢等信号通路来完成的。TN发病与幼稚B细胞、M2巨噬细胞增多密切相关。

呼出气一氧化氮(eNO)目前被认为是气道Ⅱ型炎症的生物标志物，在临床上得到了广泛的应用。近来欧洲呼吸学会推荐并规范了小气道eNO和上气道eNO的测定技术，而我国尚无相关的测定技术标准与临床应用指南。为此，中华医学会儿科学分会呼吸学组哮喘协作组组织相关专家，参考国内外最新循证医学研究结果，制定出本共识，以期为临床合理使用eNO检测、精准诊治气道炎症性疾病提供帮助。

Background::Epigenetics, and especially DNA methylation, contributes to the pathogenesis of sporadic amyotrophic lateral sclerosis (SALS). This study aimed to investigate the role of DNA methylation in SALS using whole blood of SALS patients.Methods::In total, 32 SALS patients and 32 healthy controls were enrolled in this study. DNA was isolated from whole blood collected from the participants. DNA methylation profiles were generated using Infinium MethylationEPIC BeadChip.Results::We identified 34 significant differentially methylated positions (DMPs) in whole blood from SALS patients, compared with the healthy controls. Of these DMPs, five were hypermethylated and 29 were hypomethylated; they corresponded to 13 genes. For the DMPs, ATAD3B and BLK were hypermethylated, whereas DDO, IQCE, ABCB1, DNAH9, FIGN, NRP1, TMEM87B, CCSAP, ST6GALNAC5, MYOM2, and RUSC1-AS1 were hypomethylated. We also identified 12 differentially methylated regions (DMRs), related to 12 genes (NWD1, LDHD, CIS, IQCE, TNF, PDE1C, LGALS1, CSNK1E, LRRC23, ENO2, ELOVL2, and ELOVL2-AS1). According to data from the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes database, DNAH9 and TNF are involved in the amyotrophic lateral sclerosis (ALS) pathway. Correlation analysis between clinical features and DNA methylation profiling indicated that the methylation level of ELOVL2 and ARID1B was positively associated with the age of onset ( r = 0.86, adjust P = 0.001) and disease duration ( r = 0.83, adjust P = 0.01), respectively. Conclusions::We found aberrant methylation in DMP- and DMR-related genes, implying that many epigenetic alterations, such as the hypomethylation of DNAH9 and TNF, play important roles in ALS etiology. These findings can be helpful for developing new therapeutic interventions.

目的:探讨膀胱癌组织中miR-527的表达情况，及其对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集新乡市中心医院2018年2月至2019年6月手术治疗的40例膀胱癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁正常膀胱组织(距离肿瘤组织边缘>3 cm)，所有组织标本均经病理检查确诊。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测膀胱癌组织、癌旁正常膀胱组织、人膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637、RT-112)和人膀胱上皮永生化细胞系(SV-HUC-1)中miR-527的表达情况。在膀胱癌细胞系中转染miR-527 mimics、miR-527 inhibitor、ENO1过表达质粒、ENO1 siRNA及相应的阴性对照，采用CCK8实验、克隆形成实验、Transwell实验研究细胞的增殖、迁移和侵袭。荧光素酶报告基因实验验证miR-527的靶基因。蛋白质印迹法检测miR-527对靶基因表达的调控。结果:与正常膀胱组织相比，miR-527在膀胱癌组织中的表达降低(1.723±1.070与1.148±0.760， P<0.05)；T24(0.540±0.082)、UM-UC-3(0.230±0.053)、5637(0.463±0.085)、RT-112(0.310±0.056)中miR-527的相对表达量明显低于SV-HUC-1(0.987±0.111)，差异均有统计学意义( P<0.05)。在UM-UC-3中转染miR-527 mimics后与阴性对照组相比，CCK8实验结果显示细胞活性明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)；克隆形成实验结果显示，细胞克隆形成数明显降低(57.33±15.50与157.00±15.52)，差异有统计学意义( P<0.05)。T24细胞转染miR-527 inhibitor后与阴性对照组相比，细胞活性明显升高，差异有统计学意义( P<0.05)；细胞克隆形成数明显升高(141.70±10.50与76.67±9.07)，差异有统计学意义( P<0.05)。通过TargetScan数据库预测发现ENO1是miR-527的靶基因。荧光素酶报告基因实验结果显示转染miR-527 mimics组荧光素酶活性明显低于对照组(0.47±0.10与0.99±0.02)，差异有统计学意义( P<0.05)；转染pmirGLO-mt质粒后荧光素酶活性差异无统计学意义(0.96±0.05与1.03±0.04， P>0.05)。蛋白质印迹实验结果显示，转染miR-527 mimics组细胞的ENO1表达量明显低于与阴性对照组(0.31±0.13与1.09±0.17， P<0.05)，转染miR-527 inhibitor组细胞的ENO1表达量明显高于阴性对照组(2.17±0.15与0.97±0.09，P<0.05)。与单纯转染miR-527 mimics组相比，转染miR-527 mimics＋ENO1过表达质粒能够减弱miR-527 mimics对膀胱癌细胞系增殖、迁移和侵袭的抑制作用( P<0.05)；与单纯转染miR-527 inhibitor组相比，转染miR-527 inhibitor＋ENO1 siRNA能够减弱miR-527 inhibitor对膀胱癌细胞系增殖、迁移和侵袭促进作用( P<0.05)。 结论:miR-527在膀胱癌中低表达，可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:筛选鉴定鼻咽癌自身抗体分子诊断标志物。方法:应用鼻咽癌CNE2细胞蛋白进行血清蛋白质组分析筛选鼻咽癌潜在的自身抗体分子标志物。于2014年7月至2015年1月在汕头大学医学院附属肿瘤医院选取50例鼻咽癌患者和80例健康体检者，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)验证筛选的自身抗体在两组血清中的水平，采用受试者工作特征曲线(ROC)评价诊断效能。结果:血清蛋白质组分析结果显示，针对烯醇化酶1(ENO1)的自身抗体在鼻咽癌患者血清中出现阳性反应。ELISA结果显示，鼻咽癌患者血清ENO1自身抗体水平明显高于健康体验者[0.165(0.088，0.378) vs. 0.100(0.054，0.117)， Z＝4.077， P<0.001]。ROC曲线显示，当血清ENO1自身抗体取诊断临界值为0.164时，其诊断鼻咽癌的敏感性为52.0%，特异性为90.0%。在早期鼻咽癌中，ENO1自身抗体阳性率为75.0%。 结论:血清ENO1自身抗体是鼻咽癌潜在的血清诊断标志物。

目的:利用昆虫杆状病毒表达系统(昆虫BEVS)表达糖酵解酶α-烯醇化酶(ENO1)及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础.方法:利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM1载体,获得含有目的基因的重组质粒pFastBac-ENO1.分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活性位点,进行优化后将其插入pFastBacTM1载体,获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3.通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3,利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测.结果:成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3,获得大小约2 000 bp的基因片段,与预期大小相符.昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,其分子量约为52 000,与预期相符.WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应.结论:通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,这些蛋白具有反应原性,为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件.

目的 观察缺血后处理(ischemia postconditioning,IPostC)对动脉粥样硬化(Apoe-/-+AS)模型小鼠心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的影响,研究AAV9-HIF-1α对IPostC作用的影响机制.方法 将60只Apoe-/-+AS模型小鼠按照随机数字表法分为6组,即对照组(AS-sham组)、心肌缺血再灌注组(AS-I/R组)、缺血后处理组(AS-IPostC组)、AAV9-HIF-1α+缺血后处理组(AS-AAV9-HIF-1α+IPostC 组)、AAV9-NC+缺血后处理组(AS-AAV9-NC+IPostC组)、AAV9-HIF-1 α+HIF-1 α 抑制剂+缺血后处理组(AS-AAV9-HIF-1α+2ME2+IPostC 组),每组各 6 只.建立心肌I/R模型和IPostC模型;通过尾静脉分别注射腺相关病毒-9与人巨细胞病毒启动子阴性对照(adeno-associated virus-9 with human cytomegalovirus promoter negative control,AAV9-NC)、腺相关病毒 9 与表达 HIF-1α 的人巨细胞病毒启动子(AAV9-HIF-1α).观察心肌组织病理学变化并测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、线粒体呼吸酶活性;Western blot 法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、ATP 合酶亚基 b(ATP synth ase subunit b,ATP5F1)、腺苷酸转运(adenylate transporter,ANT)蛋白.结果 与AS-sham组比较,AS-I/R组心肌组织损伤严重,ROS含量升高,ATP含量显著降低;与AS-I/R组比较,AS-IPostC组ROS含量降低,ATP含量升高,但线粒体呼吸酶活性仍然较低,而AS-AAV9-HIF-1α+IPostC组心肌损伤明显下降,线粒体呼吸功能显著好转.结论 动脉粥样硬化小鼠心肌I/R损伤时,氧化应激激活致氧自由基释放、线粒体呼吸功能减弱、细胞能量减少、心肌损伤,而AAV9-HIF-1α+IPostC通过上述机制在一定程度上能增强心肌线粒体呼吸功能.