目的 探讨血管平滑肌细胞Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)对高血压小鼠心脏重塑的调控作用.方法 采用皮下埋植缓释泵灌注血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)28 d建立小鼠高血压模型,剂量1500 ng/(kg·min).构建他莫昔芬诱导的血管平滑肌细胞Klf4基因特异敲除(Klf4-SMKO)小鼠,9～10周龄雄性Klf4-SMKO和Klf4-flox野生型小鼠各13只,分别随机分为2组,共4组:野生对照组(Klf4-flox+生理盐水灌注,6只),Klf4敲除对照组(Klf4-SMKO+生理盐水,6只),野生高血压模型组(Klf4-flox+Ang Ⅱ,7只),Klf4敲除高血压模型组(Klf4-SMKO+Ang Ⅱ,7只).在建模0、7、14、21、28 d分别测量模型组小鼠血压;28 d心脏超声检测心功能;收取小鼠心脏检测心脏质量/体质量比值;切片进行麦胚凝集素和天狼猩红染色,分别检测心肌细胞大小和心脏纤维化重塑.结果 高血压建模后Klf4-SMKO和Klf4-flox两组小鼠的血压无明显差异,心脏超声检测平滑肌细胞Klf4特异性敲除降低了高血压模型小鼠左心室质量.Klf4敲除显著降低了高血压引起的心质量/体质量比值增加,并且抑制了高血压造成的心肌细胞肥大和心脏血管周围纤维化.结论 血管平滑肌细胞KLF4缺失改善了高血压小鼠心脏病理性重塑.

目的:探索牙龈卟啉单胞菌（Pg）持留菌（Ps）对巨噬细胞免疫炎症反应的影响及其作用机制。方法:将Pg（ATCC 33277）悬浮培养和生物膜培养至对数末期（72 h）后，不使用药物处理以及使用高浓度甲硝唑（100 mg/L）和（或）阿莫西林（100 mg/L）处理不同时间，分别为空白对照组、甲硝唑组、阿莫西林组、甲硝唑+阿莫西林组，采用血平板计数法检测Ps生成数量，细菌活死染色检测Ps的生存状态；使用Pg和甲硝唑处理的PgPs（M-PgPs）刺激巨噬细胞，分别为空白对照组（不经任何处理）、Pg组、M-PgPs组；通过透射电镜观察细菌进入细胞内部的情况；使用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测巨噬细胞内炎症相关指标的表达情况；通过RT-qPCR检测巨噬细胞叉头盒转录因子1（FOXO1）信号通路的激活情况；利用共聚焦免疫荧光显微镜检测FOXO1在巨噬细胞内的分布情况。使用FOXO1抑制剂（Fi）和激活剂（Fa）处理巨噬细胞后，用Pg和M-PgPs刺激巨噬细胞，分别为空白对照组（不经任何处理）、Pg组、M-PgPs组、Fi组、Fi+Pg组、Fi+M-PgPs组、Fa组、Fa+Pg组和Fa+M-PgPs组，通过RT-qPCR和ELISA法检测巨噬细胞内炎症相关指标的表达情况。结果:悬浮培养和生物膜中的Pg经过高浓度的甲硝唑和（或）阿莫西林处理后，均无法被完全杀灭，且存活的Ps可重新生长形成菌落；Pg和M-PgPs均可进入巨噬细胞内部且巨噬细胞中的炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的蛋白表达量［Pg组分别为（2 392±188）、（162±29）、（5 558±661）、（789±155）μg/L；M-PgPs组分别为（2 415±420）、（155±3）、（5 732±782）、（821± 176）μg/L］均显著高于空白对照组［分别为（485±140）、（21±9）、（2 332±87）、（77±7）μg/L］（均 P<0.01）。同时，Pg和M-PgPs均可促进巨噬细胞内FOXO1入核，巨噬细胞内FOXO1信号通路相关基因FOXO1、B细胞淋巴瘤6和Krüppel样转录因子2 mRNA的相对表达量均显著高于空白对照组（均 P<0.05）。另外，Fi+Pg组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达量［分别为（1 081±168）、（70±8）、（1 976±544）、（420±47）μg/L］均显著低于Pg组［分别为（4 411±137）、（179±6）、（5 161±929）、（934±24）μg/L］（均 P<0.05）；Fi+M-PgPs组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达量［分别为（1 032±237）、（74±10）、（1 861±614）、（405±32）μg/L］均显著低于M-PgPs组［分别为（4 342±314）、（164±17）、（4 438±1 374）、（957±25）μg/L］（均 P<0.05）。相反，Fa+Pg组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α蛋白表达量［分别为（8 198±1 825）、（431±28）、（8 919±650）、（2 186±301）μg/L］以及Fa+M-PgPs组蛋白表达量［分别为（8 159±2 627）、（475±26）、（8 995±653）、（2 255±387）μg/L］均显著高于Pg组和M-PgPs组（均 P<0.05）。 结论:PgPs对甲硝唑和阿莫西林表现出高度耐药性；M-PgPs通过上调FOXO1信号通路诱发巨噬细胞的免疫炎症反应，该作用与未经药物处理的Pg无显著差异。

目的:探究双镜联合微创手术对胸段食管癌患者肺功能及肿瘤微转移的影响。方法:选取2017年7月至2019年7月于嘉兴市第二医院确诊为胸段食管癌并住院治疗的患者109例，根据治疗方式不同分为微创组（60例）和对照组（49例）。微创组在胸腔镜、腹腔镜辅助条件下进行手术，而对照组予以传统食管癌手术切除。比较两组患者的肺功能、红细胞免疫功能及病灶内侵袭基因表达量的差异。结果:术后3 d，两组每分钟最大通气量（MVV）、1s用力呼气容积（FEV1）、肺活量（VC）较治疗前均下降（ P<0.01），但微创组明显高于对照组[（69.90±7.07）vs （48.62±5.09），（75.12±7.93）vs（42.99±4.81），（74.57±7.30）vs（41.37±4.69）（ P<0.01）]；两组基质金属蛋白酶9（MMP9）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（TRAP1）mRNA较治疗前均下降（ P<0.01），而微创组明显高于对照组[（0.54±0.09）vs（0.42±0.06），（0.52±0.08）vs （0.41±0.06）（ P<0.01）]；两组Krüppel样因子4（KLF4）、钙粘附蛋白E（E-cad-herin）mRNA较治疗前均升高（ P<0.01），而微创组明显低于对照组[（2.87±0.30）vs（3.17±0.36），（2.92±0.32）vs（3.19±0.38）（ P<0.01）]。手术结束微创组红细胞免疫复合物花环率（RBC-ICR）较手术前1 d数值均有所升高（ P<0.01），且术后1 d逐渐下降，术后3 d恢复至术前水平；手术结束微创组红细胞C3b受体花环率（RBC-C3bRR）、红细胞黏附肿瘤细胞花环率（TRR）较手术前1 d数值均下降（ P<0.01），且术后1 d逐渐升高，术后3 d恢复至术前水平；除术前1 d外，微创组其余时间点的红细胞免疫功能各项指标与对照组比较差异有统计学意义[（手术结束时：（30.29±4.80）vs（34.68±5.47），（16.02±1.58）vs（12.03±1.17），（17.50±2.86）vs（12.59±2.26）；术后1 d：（29.13±4.19）vs（35.01±5.29），（20.98±2.86）vs（16.23±2.40），（22.50±2.56）vs（17.39±2.34）；术后3 d：（26.01±3.80）vs（31.50±5.01），（23.30±3.37）vs（18.02±2.79），（25.80±2.10）vs（21.19±2.60）（ P<0.01）]。 结论:在行胸段食管癌根治术患者中，应用胸腔镜联合腹腔镜对其肺功能、红细胞免疫、肿瘤微转移的影响较小，值得推广。

脓毒症（sepsis）是指机体对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍 [1]。全球每年估计有4900万例脓毒症病例，病死率高达22.45%，是造成死亡的常见感染并发症之一 [2]。近年来研究发现，脓毒症进展过程中常诱发失控的炎症反应与免疫功能抑制 [3,4]，提示基于对脓毒症免疫学特征的认识可能有助于脓毒症的诊断、治疗和预后评估。Krüppel样因子4（Krüppel-like factor 4, KLF4）是一种高度保守的含锌指的核转录因子 [5]，通过与靶基因启动子区的GC盒、CACCC盒和基础转录元件等相结合 [6]，激活或抑制多种基因的转录活性，由此参与调控细胞增殖和分化过程，发挥促进伤口愈合、骨骼发育、精子发生、维持遗传稳定性等作用 [7]；并通过调控巨噬细胞极化 [8,9]、炎症介质释放 [6,10,11,12,13]、血管平滑肌细胞表型转换 [14,15]、氧化应激损伤 [16]、细胞凋亡 [17]与自噬 [18,19]等参与炎症反应。鉴于KLF4在免疫细胞分化成熟及炎症反应中的重要调控作用，本文拟综述其参与脓毒症病理生理过程的潜在意义与可能机制，以期为脓毒症治疗提供新思路。

目的:观察过表达Krüppel样因子7 （KLF7）对视神经钳夹损伤（ONC）后小鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用和机制。方法:10周龄C57BL/6J小鼠65只随机分为空白对照组（A组）、玻璃体腔注射（IVT）-KLF7组（B组）、IVT-磷酸盐缓冲液-ONC组（C组）、IVT-KLF7-ONC组（D组）、IVT-重组腺相关病毒2-重组绿色荧光蛋白-ONC组（E组），每组各13只小鼠。建立ONC模型后7 d，处死各组小鼠。全视网膜铺片免疫荧光染色计数RGC存活率；蛋白质免疫印迹法检测小鼠视网膜组织中KLF7、神经生长因子（NGF）、酪氨酸激酶A （TrkA ）、磷酸化TrkA （pTrkA ）、酪氨酸激酶B （TrkB ）、磷酸化TrkB （pTrkB ）、生长相关蛋白43 （GAP43 ）、脑源性神经营养因子、B淋巴细胞瘤-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（BAX）、胱天蛋白酶3 （Caspase-3）蛋白相对表达水平。组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验。结果:ONC后7 d，A组、B组、C组、D组、E组视网膜中RGC密度分别为（3 707.4±12.8）、（3 582.4±13.3）、（1 396.3±16.1）、（1 658.3±22.2）、（1 323.6±16.9）个/mm 2；与C组、E组比较，D组RGC密度显著升高，差异有统计学意义（ P=0.028、0.007）。与A组、B组、C组、E组比较，D组小鼠视网膜中NGF、pTrkA、pTrkB、GAP43、Bcl-2蛋白相对表达量升高，BAX、Caspase-3蛋白相对表达量降低，差异均有统计学意义（ P<0.01 ）。 结论:小鼠ONC模型中，过表达KLF7可相对提高RGC存活率，提高视网膜中NGF、pTrkA、pTrkB、GAP43、Bcl-2蛋白相对表达量，降低BAX、Caspase-3蛋白相对表达量。

目的:探究miR-216a-5p靶向Krüppel样转录因子12（KLF12）对肝癌细胞放射敏感性的影响。方法:实时反转录PCR（RT-qPCR）检测人正常肝细胞L-02，人肝癌细胞Huh7、HepG2、Hep3B、MHCC-97H中miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平并比较。采用0、2、4、6、8 Gy X射线照射HepG2细胞2 h，比较不同剂量照射组间的miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平。采用质粒转染构建miR-216a-5p和/或KLF12过表达的HepG2细胞，并给予4 Gy X射线照射2 h。相应的分组为miR-NC（对照）组、miR-216a-5p组、miR-216a-5p+NC组、miR-216a-5p+KLF12组、IR+miR-NC组、IR+miR-216a-5p组、IR+miR-216a-5p+NC组、IR+miR-216a-5p+KLF12组，比较分组间的miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平。克隆形成实验检测细胞放射敏感性；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD- t检验。 结果:与L-02细胞相比，肝癌细胞系中KLF12 mRNA水平升高，miR-216a-5p水平降低（ P<0.05）。与0 Gy组相比，2、4、6、8 Gy组KLF12 mRNA水平降低，miR-216a-5p水平升高（ P<0.05）。过表达miR-216a-5p或放射处理能够增强细胞放射敏感性和凋亡水平，并降低细胞增殖水平（ P<0.05）；且过表达miR-216a-5p同时放射处理对细胞上述效果更加明显（ P<0.05）。过表达KLF12能部分逆转过表达miR-216a-5p对细胞的上述效果（ P<0.05）。 结论:miR-216a-5p通过调控KLF12降低细胞增殖能力，增强细胞放射敏感性和细胞凋亡。

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中微小RNA(miR)-25表达水平与病灶内癌基因表达变化的相关性。方法:选择海南省人民医院2018年3月至2020年12月期间NSCLC患者为NSCLC组，以同期健康志愿者作为对照组，测定外周血中miR-25的表达水平以及肺癌组织、癌旁组织中miR-25、抑癌基因、增殖侵袭基因的表达水平，应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺癌细胞株和正常肺上皮细胞BEAS-2B中的miR-25表达水平。不同组间计量资料的分析采用独立样本 t检验。相关分析采用Pearson检验。 结果:NSCLC组患者外周血中miR-25的表达水平高于对照组(1.88±0.24比1.03±0.14， t＝22.432， P<0.05)，肺癌病灶内miR-25的表达水平高于癌旁病灶(2.19±0.32比1.05±0.17， t＝21.797， P<0.05)且NSCLC组患者外周血中miR-25的表达水平与肺癌病灶内miR-25的表达水平呈正相关( r＝0.641、 P<0.01)。miR-25在NSCLC细胞株中的表达量高于正常人肺上皮细胞(2.05±0.35比1.01±0.15， t＝15.237， P<0.05)；肺癌病灶内Krüppel样因子4(KLF4)、B细胞易位基因2(BTG2)、含F-框及WD重复域蛋白7(FBXW7)、Kazal基序逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白(RECK)的mRNA表达量水平均低于癌旁病灶(分别0.44±0.08比1.04±0.17、0.64±0.07比1.01±0.15、0.59±0.08比0.98±0.13、0.48±0.06比1.02±0.14， t＝22.407、15.681、18.053、24.827， P<0.05)且与外周血中miR-25的表达水平呈负相关( r＝-0.574、-0.625、-0.512、-0.663， P<0.05)。肺癌病灶内细胞周期蛋白(Cyclin) D1、c-Myc、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的mRNA表达量水平均高于癌旁病灶(分别2.33±0.32比0.97±0.14、1.93±0.24比1.04±0.18、2.08±0.28比0.99±0.11、2.27±0.31比1.02±0.15、2.55±0.38比1.03±0.17， t＝28.771、21.567、26.832、26.756、26.966， P<0.05)且与外周血中miR-25的表达水平呈正相关( r＝0.564、0.692、0.503、0.672、0.485， P<0.05)。 结论:NSCLC患者外周血中miR-25的高表达与抑癌基因表达下调、增殖侵袭基因表达上调密切相关，NSCLC细胞株中的miR-25的表达也高于正常肺上皮细胞。

目的:观察Krüppel样因子7 （KLF7）对视网膜缺血再灌注（RIR）损伤小鼠RGC存活及ERG的影响。方法:采用随机数字表法将126只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、RIR组、正常-KLF7组、正常-绿色荧光蛋白（GFP）组、RIR-KLF7组、RIR-GFP组。小鼠8周龄时，正常-KLF7组及RIR-KLF7组小鼠玻璃体腔注射1.0×10 12 vg/ml过表达KLF7的重组腺相关病毒载体（AAV2-KLF7-GFP）1 μl；正常-GFP组及RIR-GFP组小鼠玻璃体腔注射同样滴度的仅带GFP的空白腺相关病毒载体1 μl。小鼠11周龄时，RIR组、RIR-KLF7组、RIR-GFP组小鼠建立RIR模型并测量眼压。玻璃体腔注射AAV2-KLF7-GFP病毒载体4周后，利用视网膜冰冻切片观察病毒转染情况。RIR建模后第7天，利用视网膜铺片免疫荧光染色定量观察RGC存活率；行全视野ERG检查，观察其暗适应a、b波和振荡电位（Ops ）、光负性反应（PhNR）振幅和潜伏期的变化；行视动反应检测，观察其视敏度的变化。玻璃体腔注射病毒4周后，采用Western bolt检测小鼠视网膜中KLF7的蛋白表达。 结果:与正常组比较，RIR组小鼠视网膜RGC存活率，ERG a、b波振幅，Ops、PhNR振幅以及视敏度均明显降低，差异有统计学意义（ t=12.860、7.157、5.735、8.953、4.744、9.887， P<0.05 ）。随着刺激光强的增加，小鼠暗适应ERG a、b波振幅逐渐升高，其潜伏期逐渐缩短。与RIR组比较，RIR-KLF7组小鼠视网膜RGC存活率，ERG a、b波振幅，Ops、PhNR振幅以及视敏度均明显升高，差异有统计学意义（ t=6.350、3.253、3.695、5.825、5.325、4.591， P<0.05）。Western bolt检测结果显示，正常-KLF7组小鼠视网膜中KLF7蛋白表达较正常组明显上调，差异有统计学意义（ t=4.105， P<0.01 ）。 结论:KLF7过表达可提高RGC存活率，保护其电生理功能。

目的:探讨沉默Krüppel样因子5(KLF5)对电离辐射后体外培养的大鼠小肠上皮IEC-6细胞生物学功能的影响。方法:给予大鼠小肠上皮IEC-6细胞12 Gy照射，分别在照后0、0.5、1、2、3、5、7、24 h，检测KLF5的表达。给予IEC-6细胞0、2、4、8、12和16 Gy X射线照射，照后3 h收集细胞蛋白，采用Western blot法检测IEC-6细胞中KLF5的表达。设计并合成特异性针对大鼠KLF5基因的shRNA靶序列，构建到慢病毒载体中，通过感染人胚肾293T细胞，对慢病毒进行包装和滴度测定。使用包装好的慢病毒感染IEC-6细胞，荧光显微镜下观察转染效率，转染72 h后分别采用实时-PCR和Western blot方法检测感染后细胞中KLF5 mRNA及蛋白的表达。后续实验分为阴性对照组、shKLF5组、单纯照射组、照射＋ shKLF5组4组。采用CCK-8法观察8 Gy照射后KLF5沉默细胞的增殖活性，流式细胞术检测8 Gy照射后KLF5沉默细胞的周期分布和凋亡，免疫荧光染色观察2 Gy照射后KLF5沉默细胞中γ-H2AX焦点数量。结果:不同剂量射线照射后KLF5表达逐渐增加，呈现明显的剂量效应关系。12 Gy照射后KLF5表达呈现先升高后降低的趋势，照后5 h表达量最高。KLF5 shRNA慢病毒载体构建成功，感染的IEC-6细胞中KLF5 mRNA及蛋白水平均在转染72 h明显降低。照射＋shKLF5组细胞在照射后24 h阻滞在G 2/M期现象显著( t＝11.56， P<0.05)，细胞增殖明显受到抑制，其细胞凋亡率(12.49±0.63)%，明显高于单纯照射组(7.42±0.49)%，两组比较差异有统计学意义( t＝10.98， P<0.05)，照射＋shkLF5组细胞核中各时间点的γ-H2AX焦点数量明显多于同一时间点阴性对照组( t＝22.07、23.89、11.24、59.97、20.85， P<0.05)。 结论:成功构建KLF5 shRNA慢病毒载体，并建立KLF5敲低小肠上皮细胞株。下调细胞内KLF5表达，能够使细胞周期阻滞在G 2/M期，抑制照射后细胞的增殖，促进细胞的凋亡，DNA双链断裂水平增加，修复延迟。

目的 探究泛素特异蛋白酶10(USP10)对肝细胞癌(HCC)中Krüppe样因子4(KLF4)蛋白的调控及对HCC细胞增殖与侵袭的影响.方法 采用Western blot实验检测USP10和KLF4在人正常肝细胞系L02和HCC细胞系HepG2、HUH7、HCCLM3等中的表达差异.选取HCCLM3和HUH7细胞,将过表达或沉默USP10的慢病毒颗粒(oe-USP10或sh-USP10)转染入细胞中,并将其记为oe-USP10组和oe-NC组.免疫共沉淀(Co-IP)实验检测HCCLM3或HUH7细胞中USP10是否可与KLF4直接结合.加入蛋白酶体抑制剂MG132,再次使用Co-IP检测转染oe-USP10或sh-USP10的HCCLM3和HUH7细胞中 KLF4蛋白的泛素化水平.将过表达KLF4的pcDNA3.1载体质粒及其阴性对照质粒(pc-KLF4 或 pc-NC)共转染入 HCCLM3 和 HUH7 的 sh-USP10组或sh-NC组细胞中,并将细胞记为sh-NC+pc-NC组、sh-USP10+pc-NC 组、sh-NC+pc-KLF4 组和 sh-USP10+pc-KLF4组,采用CCK-8法检测HCCLM3和HUH7中各组细胞的增殖活力,Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 与 L02 细胞比较,USP10 和 KLF4 在 HepG2、HUH7、HC-CLM3等细胞中蛋白表达均降低(P＜0.05).在HCCLM3和HUH7细胞中,USP10蛋白可直接与KLF4相互结合.同时,MG132处理后,HCCLM3和HUH7细胞中KLF4蛋白表达量呈时间依赖性增加.沉默USP10可增加HCCLM3与HUH7细胞中 KLF4的泛素化,过表达USP10可降低上述细胞中KLF4的泛素化水平.与sh-NC+pc-NC组比较,sh-USP10+pc-NC组中HCCLM3和HUH7的增殖和侵袭能力均升高(P＜0.01),而 sh-NC+pc-KLF4 组和 sh-USP10+pc-KLF4 组的HCCLM3或HUH7细胞增殖和侵袭能力均降低(P＜0.05);与 sh-USP10+pc-NC 组比较,sh-USP10+pc-KLF4 组细胞的增殖和侵袭能力均降低(P＜0.05).结论 在HCC细胞中USP10通过去泛素化促进KLF4蛋白稳定性,进而抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭.