目的:分析中枢性性早熟女童血清makorin环指蛋白3(MKRN3)表达及与性激素、乳腺发育及卵巢体积的相关性。方法:选取2016年1月至2018年5月保定市第二医院收治的62例中枢性性早熟女童为病例组，另同期选取40例健康女童为对照组。比较两组年龄、体重指数(BMI)、卵巢体积、乳腺发育年龄及血清雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、MKRN3表达差异，并用Pearson相关性分析中枢性性早熟女童血清MKRN3表达与各项指标的关系。结果:病例组年龄、BMI和卵巢体积与对照组比较，差异无统计学意义(均 P>0.05)，但病例组乳腺发育年龄低于对照组( P<0.01)。病例组血清E2和PRL水平高于对照组(均 P<0.01)，而两组血清LH和FSH水平比较差异无统计学意义(均 P>0.05)。病例组血清MKRN3表达低于对照组( P<0.01)。中枢性性早熟女童MKRN3表达与患儿卵巢体积呈负相关( P<0.01)，且与患儿乳腺发育年龄呈正相关( P<0.01)，而与患儿年龄、BMI均无相关性(均 P>0.05)。中枢性性早熟女童MKRN3表达与患儿血清E2水平呈负相关( P<0.01)，而与患儿血清FSH、PRL及LH水平均无相关性(均 P>0.05)。 结论:中枢性性早熟女童血清MKRN3表达显著下降，且与患儿卵巢体积、乳腺发育年龄及E2水平密切相关，提示MKRN3在中枢性性早熟的发生及发展过程中起到重要作用。

目的 探讨miR-30b-5p在食管癌细胞中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制.方法 收集2016年1月至2020年12月就诊于安徽省第二人民医院手术治疗的70例食管癌患者的肿瘤和癌旁组织,检测miR-30b-5p的表达水平.qRT-PCR检测食管癌细胞株中miR-30b-5p的表达水平.将miR-30b-5p mimics转染至TE-13和ECA109细胞中,检测转染后各组细胞中miR-30b-5p及MKRN3表达水平.根据细胞增殖实验,Transwell及裸鼠成瘤实验检测食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.双荧光素酶实验验证miR-30b-5p的靶基因.蛋白印迹实验探索miR-30b-5p对食管癌影响的分子机制.结果 miR-30b-5p在食管癌细胞和食管癌组织中相较于正常上皮细胞和癌旁组织表达显著下降(P<0.05).细胞增殖实验显示,miR-30b-5p mimics组增殖率显著低于NC组(P<0.05);Transwell实验结果显示,miR-30b-5p mimics组迁移率及侵袭率显著低于NC组(P<0.05);双荧光素酶实验显示MKRN3是miR-30b-5p的直接靶基因.Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白发现,miR-30b-5p mimics组蛋白低于NC组(P<0.05).结论 miR-30b-5p在食管癌中呈现低表达,miR-30b-5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力.

目的 探讨makorin环指蛋白3(MKRN3)基因的多态性位点rs 2239669与中枢性性早熟(CPP)易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选取246例CPP患儿为研究对象,以269例健康儿童作为对照组.利用高分辨率溶解曲线(HRM)和实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对rs 2239669位点多态性和MKRN3基因表达水平进行检测,比较不同基因型、等位基因及其在不同基因模型中与CPP风险的关系,以及不同基因型的MKRN3基因表达水平.结果 CPP组SNP位点rs 2239669的基因型(TT、TC、CC)频率与对照组的差异有统计学意义(P=0.035);CC基因型的CPP发病风险是TT基因型的2.298倍(95 %CI:1.045~5.051).CPP组C等位基因频率高于对照组(78.7 % 对 71.7 %,P=0.010);携带C等位基因患CPP风险是T等位基因的1.451倍(95 %CI:1.090~1.932).在隐性遗传模型中,CC基因型在CPP组明显高于对照组(P=0.021).在三种基因型的CPP患儿中,每种各随机抽取9例,比较MKRN3表达水平发现其差异有统计学意义(F=4.052,P=0.041).结论 MKRN3基因SNP位点rs 2239669变异与CPP遗传易感性相关,不同基因型CPP患儿的MKRN3表达水平有差异.

目的 筛选食管癌甲基化驱动基因,并进行功能及调控通路分析.方法 搜集TCGA数据库中基因表达数据、DNA甲基化数据、临床信息完整的食管癌患者资料162例,记为肿瘤组;其中16例有癌旁对照资料,记为对照组.使用R语言MethylMix包综合分析两组患者的基因表达数据和DNA甲基化数据.R语言MethylMix包定义肿瘤组和对照组甲基化平均值的差值倍数为差异甲基化值(DM值),Spearman相关分析法分析基因表达与甲基化相关性,以l DM值|＞0、l相关系数(Cor)l ＞0.3为截断值筛选甲基化驱动基因.使用在线分析软件DAVID 6.8(https://david.ncifcrf.gov/)对食管癌甲基化驱动基因进行基因本体(CO)功能富集分析.使用在线数据库KOBAS 3.0(http://kobas.cbi.pku.edu.cn/)对食管癌甲基化驱动基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析.结果 筛选得到88个食管癌甲基化驱动基因,其中74(84.1％)个为高甲基化驱动基因,14个为低甲基化驱动基因.最可能发生甲基化的食管癌甲基化驱动基因有Makorin环指蛋白3(MKRN3)基因、人Fermitin家族同系物3(FERMT3)基因、含V-Set免疫球蛋白域蛋白2(VSIG2)基因等.在分子功能层面,食管癌甲基化驱动基因主要影响了金属离子结合、DNA结合、转录因子活性、序列特异性、核酸结合;在生物学过程层面,食管癌甲基化驱动基因影响了转录调控、DNA模板化;在细胞成分层面,食管癌甲基化驱动基因影响了核组分、胞内组分.锌指蛋白家族如ZNF582、ZNF69、ZKSCAN7、ZNF583、ZNF568、ZNF454、ZNF790、ZNF880等和SOX1基因被富集在了多个GO中.食管癌甲基化驱动基因主要参与了乙醛酸和二羧酸代谢通路,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路,碳代谢通路及谷胱甘肽代谢通路的调控.结论 食管癌甲基化驱动基因有88个,以高甲基化驱动基因为主;最可能发生甲基化调控的食管癌甲基化驱动基因有MKRN3基因、FERMT3基因、VSIG2基因等;食管癌甲基化驱动基因主要影响了金属离子结合、DNA结合等分子功能,转录调控、DNA模板化等生物学过程,核组分、胞内组分等细胞成分;食管癌甲基化驱动基因主要调控代谢相关的多个通路.

中枢性性早熟是一种常见的儿童性发育异常性疾病,其发病机制暂不明确.环指蛋白3基因的功能丧失性突变是中枢性性早熟的重要致病因素.在目前已证实的中枢性性早熟相关致病基因中,环指蛋白3基因所致性早熟的发病率相对较高.本文综述了环指蛋白3基因的结构,突变,以及对于青春期时间可能的影响.

目的 检测特发性中枢性性早熟(ICPP)女童血清中人胰岛素生长因子BP3(IGF-BP3)、makorin环指蛋白3(MKRN3)水平,并探讨IGF-BP3、MKRN3在ICPP女童诊断中的应用价值.方法 选取2017年3月-2019年3月于本院就诊的95 例ICPP 女童(ICPP 组)为研究对象,同期选取83 例健康体检女童(CG 组)作为对照组.采用化学发光法检测2 组激素水平;全自动免疫分析仪检测血清中IGF-BP3 水平、qRT-PCR 法检测血清中MKRN3 水平;分析IGF-BP3、MKRN3水平与一般资料、激素水平的相关性;分析IGF-BP3、MKRN3对ICPP女童的诊断价值.结果 ICPP组IGF-BP3水平、骨龄、泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)显著高于CG组(P＜0.05),MKRN3、乳房发育年龄水平显著低于CG组(P＜0.05);骨龄、PRL、E2 与IGF-BP3 水平均呈正相关,与MKRN3 水平均呈负相关(P＜0.05);乳房发育年龄与IGF-BP3 水平呈负相关,与MKRN3 水平呈正相关(P＜0.05);IGF-BP3、E2 是ICPP疾病发生的危险因素,MKRN3是ICPP疾病发生的保护因素;IGF-BP3、MKRN3联合诊断ICPP疾病的AUC为0.918(95％CI:0.875～0.961),特异度为87.4％,敏感度为86.7％.结论 IGF-BP3、MKRN3在ICPP发生中发挥重要作用,可能参与ICPP发病机制,IGF-BP3 联合MKRN3 可作为诊断ICPP 女童的参考指标.

性早熟(precocious puberty,PP)是一种常见的儿科性发育异常疾病.其中,中枢性性早熟(central precocious puberty,CPP)是由于下丘脑-垂体-性腺(hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG)轴提前激活,导致促性腺激素的激素释放提前且大量释放,使性腺提前发育,青春期提前开始的疾病.青春期的发生受到基因和环境等因素的共同调控.目前的临床研究发现,KISS1基因的功能获得性突变、KISS1R即GPR54基因的功能丧失性突变、MKRN3环指印迹基因的功能丧失性突变,以及DLK1印迹基因的功能丧失性突变均是中枢性性早熟重要的单基因致病原因.KISS1基因是一种肿瘤转移抑制基因,KISS1R基因编码1个G蛋白偶联受体,该受体与其配体Kisspeptin形成GnRH分泌的兴奋性神经调节系统.它们在HPG轴的上游发挥作用.MKRN3基因是一种母系印迹基因,DLK1基因是一种调节细胞生长的基因,它们在HPG轴的下游发挥作用.近年来中枢性性早熟的发病率愈来愈高,这与社会经济的不断发展导致的环境内分泌干扰物(environmental endocrine disruptors,EEDs)的过多暴露有关.多项调查发现,儿童对环境内分泌干扰物的暴露程度与性早熟的发病率显著相关.而在人体中,这些内分泌干扰物也会影响肠道微生物的代谢.本文就目前中枢性性早熟的单基因致病机制、表观遗传修饰、肠道微生物以及环境因素等方面的研究展开综述,以期为该病的治疗和预防提供帮助.

目的 分析游离甲状腺素(FT4)、makorin环指蛋白3(MKRN3)及25-羟维生素D3[25-(OH)D3]在特发性中枢性性早熟(ICPP)女童中的表达及相关性.方法 选取2020年3月—2021年3月在台州市第一人民医院接受治疗的70例ICPP女童患儿为观察组,同时期在该院体检的70例健康儿童为对照组.采用化学发光法检测FT4、25-(OH)D3、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)表达水平,采用实时荧光定量PCR检测MKRN3表达水平.结果 FT4、25-(OH)D3在Tanner分期不断升高,MKRN3在Tanner分期不断降低(P＜0.05).观察组FT4、FSH、LH及E2表达水平高于对照组,MKRN3、25-(OH)D3 低于对照组(P＜0.05).FT4 与 FSH、LH、E2呈正相关(P＜0.05),MKRN3、25-(OH)D3 与FSH、LH、E2呈负相关(P＜0.05).ROC分析FT4、25-(OH)D3、MKRN3预测ICPP的曲线下面积(AUC)分别为0.692、0.713、0.774、0.792.结论 在 ICPP 女童中 FT4 高表达,MKRN3、25-(OH)D3 低表达;高表达 FT4,低表达 MKRN3、25-(OH)D3是ICPP女童发病的风险因子,三项联合检测在ICPP的诊断中应用价值更高.

背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究.由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义.目的:构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响.方法:采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率.通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过集落形成实验及Western blot检测沉默MKRN1表达后对HEK-293T细胞增殖、凋亡能力的影响.结果 与结论:①设计的3条MKRN1-短发夹RNA(sh1、sh2、sh3),均成功连入Tet-on载体,且各组载体序列正确;通过慢病毒成功感染HEK-293T细胞;②实时荧光定量PCR及Western blot检测发现3条shRNA序列中1号序列敲低MKRN1水平明显降低(P<0.05),且沉默组不加入强力霉素诱导后目的基因的表达得到回复;③集落形成实验发现沉默MKRN1后HEK-293T细胞增殖能力下降(P<0.05);Western blot检测敲低MKRN1后,增殖细胞核抗原表达下调,细胞凋亡相关指标BAX表达增加,Bcl2表达下调,Bcl2/BAX的比值下调(P<0.001);④结论:采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞株,且沉默MKRN1后能够抑制HEK-293T细胞的增殖,并促进其凋亡.通过构建稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞可为进一步研究MKRN1的生物学功能奠定基础,也为研究其他基因的生物学功能提供一个方法学上的参考.