目的:检测微小RNA（miR）-211-5p、促红细胞生成素肝细胞激酶受体B2（EphB2）及促红细胞生成素肝细胞激酶配体B2（ephrin B2）在脊髓损伤（SCI）后脊髓组织以及神经细胞中的表达，探讨其对SCI大鼠神经功能恢复的机制和效果。方法:2020年5月至2021年6月采用斯普拉格-道利（SD）大鼠和未受伤的PC12细胞进行前瞻性研究。SD大鼠分为假手术组和SCI组，每组各30只，在术后不同时间点（1、3、7、14、21和28 d）进行Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分，实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-211-5p和Eph/ephrin B2 mRNA的相对表达含量；另将SCI大鼠分为重组慢病毒载体LV-miR-211-5p组（A组）、空慢病毒载体LV-eGFP（B组）、0.9%氯化钠组（C组），每组15只，分别重组慢病毒载体、空慢病毒载体和0.9%氯化钠注射于脊髓损伤处头、尾侧，于术后1、7和14 d收集BBB评分，检测脊髓组织中的miR-211-5p和Eph/ephrin B2 mRNA的相对表达含量，另用免疫荧光染色法检测各组GAP-43和突触素的表达。另外用150 μmol/L过氧化氢（H 2O 2）建立PC12损伤细胞系模型，分别用流式细胞术、Western blot检测不同细胞系的凋亡率和凋亡相关蛋白和含量，双荧光素酶报告基因验证miR-211-5p是否靶向调控EphB2。 结果:动物实验结果显示，术后不同时间点，SCI组的miR-211-5p在损伤后1、3、7、14、21和28 d水平低于假手术组（0.70 ± 0.03比1.00 ± 0.10、0.60 ± 0.04比1.00 ± 0.05、0.45 ± 0.10比1.00 ± 0.12、0.30 ± 0.06比1.00 ± 0.15、0.20 ± 0.05比1.00 ± 0.13、0.10 ± 0.02比1.00 ± 0.07），EphB2和ephrinB2水平高于假手术组（1.10 ± 0.05比1.00 ± 0.01、1.80 ± 0.01比1.00 ± 0.08、2.30 ± 0.01比1.00 ± 0.10、2.60 ± 0.01比1.00 ± 0.05、2.80 ± 0.01比1.00 ± 0.06、3.00 ± 0.01比1.00 ± 0.07，1.20 ± 0.05比1.00 ± 0.02、1.60 ± 0.01比1.00 ± 0.03、2.10 ± 0.10比1.00 ± 0.01、2.40 ± 0.11比1.00 ± 0.09、2.70 ± 0.13比1.00 ± 0.05、2.90 ± 0.12比1.00 ± 0.03），差异均有统计学意义（ P<0.05）；术后14 d，A组BBB评分高于B组和C组[（14.0 ± 1.1）分比（8.0 ± 1.1）和（8.2 ± 1.2）分]，miR-211-5p水平高于B组和C组（1.90 ± 0.10比0.40 ± 0.01和0.50 ± 0.02），Eph/ephrin B2水平低于B组和C组（0.70 ± 0.10比1.80 ± 0.04和1.90 ± 0.06，0.60 ± 0.03比2.00 ± 0.04和2.10 ± 0.05），差异均有统计学意义（ P<0.05）；免疫荧光染色示，术后14 d A组GAP-43和突触素含量均高于B组和C组（ P<0.05）。细胞实验结果显示，过表达miR-211-5p能够抑制H 2O 2诱导的PC12细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因Cleaved-caspase3的表达（ P<0.05）。敲低miR-211-5p能够提高H 2O 2诱导的PC12细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因Cleaved-caspase3的表达（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实EphB2是miR-211-5p的靶基因，过表达EphB2可拮抗miR-211-5p对H 2O 2诱导的PC12后细胞凋亡抑制作用。 结论:miR-211-5p可通过抑制Eph/ephrin B2信号通路的表达而促进SCI的神经功能修复，提示把Eph/ephrin B2作为靶点，采用miR-211-5p抑制Eph/ephrin B2信号通路可能对SCI有保护作用。

目的:观察中药补中益气汤对盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织中转化生长因子β-3(TGFβ-3)、微小核糖核酸-30d(miR-30d)表达的影响。方法:数字抽签分组，16只空白对照组大鼠分为两组(每组8只)：(1)A1组：饲养4周；(2)A2组：卵巢切除，生理盐水灌胃8周。64只盆腔脏器脱垂模型大鼠分为8组(每组8只)：(1)B1组：饲养4周；(2)B2组：生理盐水灌胃8周；(3)C1组、C2组：低浓度补中益气汤(3.5 ml·kg -1·d -1)灌胃4周、8周；(4)D1组、D2组：中浓度补中益气汤(7.0 ml·kg -1·d -1)灌胃4周、8周；(5)E1组、E2组：高浓度补中益气汤(14.0 ml·kg -1·d -1)灌胃4周、8周。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠子宫骶韧带组织胶原蛋白COL1A1、COL3A1和TGFβ-3、miR-30d的表达。 结果:B1组较A1组COL1A1、COL3A1表达下降(均 P<0.01)，TGFβ-3、miR-30d表达升高(均 P<0.01)；治疗4周组组间比较，COL1A1表达E1组较C1组升高( P<0.01)，COL3A1相对表达量随补中益气汤剂量升高，D1组较C1、E1组较D1组均升高(均 P<0.01)。TGFβ-3表达D1、E1组较C1组升高( P<0.01)；miR-30d表达D1、E1组较C1组下降(均 P<0.01)。治疗8周组组间比较，COL1A1表达D2组较C2组升高( P<0.01)，而E2组较D2组下降( P<0.01)；COL3A1 、TGFβ-3表达D2组较C2组升高(均 P<0.01)，TGFβ-3表达E2组较D2组下降( P<0.01)；miR-30d表达D2组较C2组下降( P<0.01)，E2组较D2组升高( P<0.01)；补中益气汤治疗4周组与B1组比较，D1、E1组COL1A1、COL3A1、TGFβ-3表达升高( P<0.01)，C1、D1、E1组miR-30d表达下降( P<0.01)；补中益气汤治疗8周组与B2组比较，D2、E2组COL1A1、COL3A1表达升高( P<0.01)，C2、D2、E2组TGFβ-3表达升高、miR-30d表达均下降(均 P<0.01)。 结论:补中益气汤可增加盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织中胶原蛋白COL1A1、COL3A1的合成，其作用机制可能与上调大鼠子宫骶韧带组织中TGFβ-3的表达和降低组织中miR-30d的表达水平有关。

目的:探讨ⅩⅦ型胶原蛋白α1（COL17α1）在小鼠衰老皮肤中的表达与作用及其对人表皮干细胞（ESC）干性和增殖能力的影响，并且探讨相关微小RNA（miR）干预人ESC中COL17α1表达的机制。方法:采用实验研究方法。取2个月龄（青年）和24个月龄（老年）雄性C57BL/6J小鼠各12只，取其胸背部全层皮肤标本进行后续检测。对青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，行苏木精-伊红染色后观察表皮层结构并测量表皮厚度，用透射电子显微镜观察表皮基底膜形态和半桥粒并行半桥粒计数，分别采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法与蛋白质印迹法检测COL17α1的mRNA与蛋白表达，采用免疫荧光法观测COL17α1的蛋白表达与分布。取于解放军总医院第四医学中心行包皮切除手术的3名20~30岁健康男性术后弃用的新鲜包皮组织，提取ESC，取生长良好的细胞进行后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将ESC分为进行相应处理的空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组，培养48 h后，采用实时荧光定量RT-PCR法检测COL17α1的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测COL17α1和细胞角蛋白14（CK14）的蛋白表达，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平。通过DIANA、miRTarBase、miRNAMap、TargetScan、microRNA数据库筛选可能作用于 COL17α1 mRNA 3'非编码区的miR。将ESC分为转染miR模拟物阴性对照物的阴性对照组和转染前述筛选出的各miR的模拟物的各miR模拟物组，转染后48 h，通过蛋白质印迹法检测COL17α1的蛋白表达。基于基因表达综合数据库（GEO）的miR测序数据集GSE114006，使用GEO2R工具统计分析前述筛选出的可造成COL17α1蛋白表达下降的miR在30名青年（18~25岁）人和30名老年（>70岁）人皮肤中的表达。取青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，采用实时荧光定量RT-PCR法检测前述老年人皮肤中表达增多的miR的表达。取2批ESC，第1批分为COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组，第2批分为COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组，分别转染对应序列，48 h后，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测COL17α1的基因表达水平。组织实验中样本数均为6，细胞实验中样本数均为3。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD检验或Dunnett检验、Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮层与真皮层分界模糊且细胞层次较少，表皮层厚度明显变薄（ Z=-2.88， P<0.01），基底膜形态不连续，表皮-真皮连接处半桥粒较少且分布不均，半桥粒数量明显减少（ Z=-2.91， P<0.01），COL17α1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（ t值分别为10.61、6.85， P<0.01）。与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮基底层和毛囊球部的COL17α1蛋白表达均明显减少（ Z=-2.24， P<0.05）。培养48 h后，空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组ESC中COL17α1的蛋白表达水平分别为1.00±0.27、1.12±0.21、1.13±0.23、0.42±0.18。相较于空白对照组，转染试剂对照组和空载体质粒组ESC中COL17α1的mRNA和蛋白表达水平、CK14的蛋白表达水平及ESC增殖水平均未发生明显变化（ P>0.05），敲低COL17α1质粒组ESC中这些指标均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。miR-203a-3p、miR-203b-3p、miR-512-5p、miR-124-3p、miR-28-5p、miR-590-3p、miR-329-5p可能结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区。转染48 h后，与阴性对照组的1.000±0.224比较，miR-329-5p模拟物组、miR-203b-3p模拟物组和miR-203a-3p模拟物组ESC中COL17α1的蛋白表达水平明显降低（0.516±0.188、0.170±0.025、0.235±0.025， t值分别为3.17、5.43、5.07， P<0.05或 P<0.01）。老年人皮肤中仅miR-203b-3p表达水平明显高于青年人（ t=3.27， P<0.01）。老年小鼠皮肤中miR-203b-3p表达水平明显高于青年小鼠（ Z=-2.88， P<0.01）。转染后48 h，COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平明显低于COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组（ t=7.66， P<0.01），COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平与COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组相近（ P>0.05）。 结论:COL17α1的mRNA和蛋白表达水平随小鼠年龄增长而减少，可能导致小鼠ESC脱离表皮基底膜。COL17α1的表达减少可抑制CK14的表达与ESC增殖，这可能是老年人皮肤中表皮层变薄和创面愈合减慢的原因。小鼠衰老皮肤中表达增多的miR-203b-3p可以靶向结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区，阻碍转录后翻译过程，造成COL17α1蛋白表达减少。

目的:探讨miRNA-5089-5p（miR-5089-5p）体外对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响及其与组织蛋白酶B（CTSB）基因表达的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测2017年3月至2019年12月鄂东医疗集团黄石市中心医院食管癌手术切除癌组织标本及相应癌旁组织标本31例，以及食管癌TE-13、EC9706、Eca109、KYSE30细胞株和正常食管黏膜上皮HET-1A细胞miR-5089-5p的表达水平。选择miR-5089-5p表达量最低的食管癌细胞，分为两组，分别转染miR-5089-5p模拟物（miR-5089-5p组）及其阴性对照序列（阴性对照组）；转染48 h后，qRT-PCR检测两组细胞miR-5089-5p表达水平；采用CCK-8法和划痕愈合实验分别检测两组细胞的增殖和迁移能力。用microRNA.org、Deepbase v2.0在线工具预测miR-5089-5p的靶基因，并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。qRT-PCR和蛋白质印迹法检测miR-5089-5p组、阴性对照组细胞靶基因的表达水平，同时采用蛋白质印迹法检测两组细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67和迁移相关蛋白N-Cadherin、Twist表达。结果:食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-5089-5p的相对表达量分别为1.54±0.53和7.07±1.25（ t=24.06， P<0.01）；各食管癌细胞株miR-5089-5p相对表达量均低于正常食管黏膜上皮HET-1A细胞（均 P<0.05），相对表达量最低的是Eca109细胞（0.12±0.03）。与阴性对照组相比，随着转染时间延长，miR-5089-5p组Eca109细胞增殖能力逐渐降低，从48 h开始两组间差异均有统计学意义（均 P<0.05）；迁移能力亦降低[细胞划痕愈合率：（29±5）%比（64±8）%， t=3.91， P<0.01]。在线工具预测miR-5089-5p的靶基因可能是CTSB，双荧光素酶报告基因实验证实miR-5089-5p互补结合CTSB 3'UTR。qRT-PCR检测显示，与阴性对照组相比，miR-5089-5p组Eca109细胞CTSB mRNA相对表达量降低（0.23±0.04比1.01±0.09， t=8.27， P<0.01），蛋白质印迹法检测显示，CTSB蛋白表达水平亦降低，同时细胞增殖相关蛋白PCNA、Ki-67和细胞迁移相关蛋白N-Cadherin、Twist表达水平均降低。 结论:食管癌患者癌组织和细胞株中miR-5089-5p均低表达，miR-5089-5p能抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移能力，此作用可能是通过下调CTSB基因表达实现的。

目的:探讨血浆微小RNA-30b-5p（miR-30b-5p）联合血管外肺水指数（EVLWI）对急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者预后的评估价值。方法:选择2016年1月至2019年6月儋州市人民医院收治的120例ARDS患者作为研究对象。收集患者的性别、年龄、体重指数（BMI）、基础疾病、病因以及心率（HR）、呼吸频率（RR）、氧合指数（OI）、动脉血二氧化碳分压（PaCO 2）和急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）等基线值，根据住院期间生存情况分为存活组和死亡组，根据OI分为轻中度组（OI>100 mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）和重度组（OI≤100 mmHg）。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测血浆miR-30b-5p表达，并测定EVLWI。绘制受试者工作特征曲线（ROC），分析血浆miR-30b-5p及EVLWI预测ARDS患者死亡的价值；用Pearson相关法分析住院期间不同预后ARDS患者血浆miR-30b-5p与EVLWI的相关性。 结果:120例ARDS患者均纳入分析，死亡组42例，存活组78例；轻中度组67例，重度组53例。死亡组患者APACHEⅡ评分高于存活组，但两组性别、年龄、BMI、基础疾病、病因及HR、RR、OI和PaCO 2基线值比较差异均无统计学意义。死亡组患者血浆miR-30b-5p表达水平及EVLWI均明显高于存活组〔miR-30b-5p（2 -ΔΔCt）：2.28±0.74比0.52±0.06，EVLWI（mL/kg）：15.38±4.60比10.24±2.15，均 P<0.01〕。重度组血浆miR-30b-5p表达水平、EVLWI及住院病死率均明显高于轻中度组〔miR-30b-5p（2 -ΔΔCt）：2.05±0.65比0.93±0.17，EVLWI（mL/kg）：14.65±4.20比11.36±2.28，住院病死率：58.5%（31/53）比16.4%（11/67），均 P<0.01〕。ROC曲线分析显示，血浆miR-30b-5p及EVLWI预测ARDS患者住院期间死亡的最佳截断值分别为1.62和13.28 mL/kg，两项指标联合预测的ROC曲线下面积（AUC）明显高于二者单独预测（0.897比0.827和0.785），且联合预测的敏感度和特异度均较高，分别为90.5%和84.2%。Pearson相关分析显示，ARDS死亡患者血浆miR-30b-5p与EVLWI呈显著正相关（ r＝0.768， P<0.01）；而存活者二者无明显相关性（ r＝0.118， P>0.05）。 结论:血浆miR-30b-5p和EVLWI与ARDS患者病情严重程度及预后相关，二者联合对ARDS患者预后具有一定评估价值。

目的:探讨miRNA-133b（miR-133b）和miRNA-150（miR-150）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月连云港市第一人民医院手术并经病理确诊的30例NSCLC患者，收集患者术前清晨空腹外周血10 ml以及术后新鲜癌组织、癌旁组织（距离癌组织≤3 cm）、正常肺组织（距离癌组织>5 cm）。以30名同期健康体检者作为健康对照组，收集清晨空腹外周血10 ml。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组受试者血清及NSCLC患者各组织中miR-133b、miR-150的相对表达量。分析NSCLC患者血清miR-133b、miR-150水平与临床病理特征的关系；以病理诊断为金标准，应用受试者工作特征（ROC）曲线判断miR-133b、miR-150诊断NSCLC的效能。结果:NSCLC患者中，miR-133b在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为0.55±0.17、0.68±0.11、0.69±0.12，癌组织中miR-133b表达水平低于癌旁组织和正常肺组织（均 P<0.01）；miR-150在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为1.19±0.14、1.13±0.13、1.09±0.12，癌组织与癌旁组织间miR-150表达水平差异无统计学意义（ t＝1.98， P＝0.051），癌组织中miR-150表达水平高于正常肺组织（ t＝3.06， P＝0.003）。NSCLC患者血清miR-133b相对表达量较健康对照组低（0.43±0.11比0.55±0.16， t＝3.68， P<0.05），miR-150相对表达量较健康对照组高（1.14±0.13比1.04±0.12， t＝-3.18， P<0.05）。NSCLC患者血清中miR-133b的表达水平与淋巴结转移有关（ P＝0.003），而与患者的性别、年龄、病理分型、TNM分期均不相关（均 P>0.05）。NSCLC患者血清中miR-150表达水平与各项临床病理特征均不相关（均 P>0.05）。根据ROC曲线，NSCLC患者血清中miR-133b、miR-150的曲线下面积分别为0.732、0.726，二者联合检测的曲线下面积为0.811。 结论:NSCLC患者癌组织和血清中miR-133b表达水平均降低，miR-150表达水平均升高，二者在NSCLC患者的癌组织与血清中的表达趋势一致。miR-133b可能与NSCLC的恶性程度和侵袭、转移有关。miR-133b、miR-150可能成为诊断NSCLC的分子标志物，二者联合检测的诊断效能更高。

目的:探讨微RNA（RNA-21-5p）通过靶向程序性死亡蛋白4（PDCD4）对SLE患者外周血B细胞增殖与凋亡的调控作用。方法:选择我院经临床确诊的SLE患者30例，采用梯度离心法提取外周血淋巴细胞（PBL），磁珠法分选B细胞后流式细胞术检测外周血B细胞比例；采用电转染法将细胞分为空白对照组、miRNA-21-5p阴性对照组、miRNA-21-5p Inhibitor组、PDCD4阴性对照组、PDCD4 siRNA组。于转染后48 h收集细胞。采用实时荧光定量（RT）-PCR法检测各组细胞miRNA-21-5p及PDCD4 mRNA的表达水平；采用蛋白质印迹法检测各组细胞PDCD4的蛋白表达；采用双荧光素酶靶标实验验证miR-21-5p和PDCD4的靶向关系；采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况、采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况；采用蛋白质印迹法和RT-PCR法分别检测各组细胞Fas、FasL、CD40和CD40L的表达水平。采用独立样本 t检验对2组间数据进行比较；采用单因素方差分析对多样本实验结果进行统计分析；抗dsDNA抗体阳性率比较采用 χ2检验。 结果:SLE患者血清补体[C3（0.85±0.11）g/L、C4（0.54±0.09）g/L]较健康对照组[C3（1.16±0.17）g/L、C4（1.57±0.09）g/L]降低（ t=7.524， P<0.05； t=38.471， P<0.05），而抗dsDNA抗体（47%）、IgG（15.46±0.75）g/L、IgA（2.68±0.20）g/L较健康对照组抗dsDNA抗体（17%）、IgG（11.95±0.80）g/L、IgA（2.16±0.11）g/L均升高（ χ2=4.427， P<0.05； t=15.218， P<0.05； t=10.125， P<0.05）；SLE患者外周血B细胞比例[（6.78±0.29）%]、miRNA-21-5p表达水平（7.52±0.59）%较健康对照外周血B细胞比例[（2.03±0.24）%]、miRNA-21-5p表达水平（3.60±0.62）均升高（ t=59.064， P<0.05； t=19.317， P<0.05），而SLE患者外周血PDCD4基因表达水平（1.54±0.35）较健康对照（4.42±0.42）降低（ t=19.126， P<0.05）；与空白对照组和miRNA-21-5p NC组相比，miRNA-21-5p Inhibitor组细胞增殖受到抑制，细胞凋亡比例升高（ F=5.244， P<0.05； F=37.903， P<0.05）；与空白对照组和PDCD4 NC组相比，PDCD4 siRNA组细胞增殖能力增强，细胞凋亡比例减少（ F=5.956， P<0.05； F=25.431， P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验分析结果显示，PDCD4是miRNA-21-5p的靶基因。 结论:miRNA-21-5p可能通过抑制PDCD4的表达促进SLE患者外周血B细胞增殖，导致B细胞凋亡异常。miRNA-21-5p可作为SLE治疗新的靶向基因。

目的:研究血清中微小核糖核酸(miRNA)的特异性表达与儿童扩张型心肌病(DCM)发生的相关性。方法:收集2013年11月至2016年3月就诊于北京安贞医院小儿心脏中心且被确诊为DCM的儿童血清(DCM组，16例)及同期于北京安贞医院体检的年龄性别匹配的健康儿童血清(健康对照组，12例)，并进行miRNA测序。后期扩大样本量(DCM组扩大为30例，对照组扩大为16例)，对测序结果中有统计学意义的11种miRNAs行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证。结果:血清miRNA测序结果，DCM组患儿较健康对照组儿童有172个miRNAs上调(fold change>2， P<0.001)，未发现下调的miRNAs。选择显著上调的top11miRNAs进行qRT-PCR试验验证，发现DCM组患儿血清中8个miRNAs(let-7f、let-7g、miR142-5p、miR143-3p、miR26a、miR27a-3p、miR27b-3p、miR126-3p)显著上调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在诊断DCM的受试者工作特征(ROC)曲线中，血清miR142-5p、miR143-3p、miR27b-3p、miR126-3p的曲线下面积分别为0.983、0.992、0.915、0.950，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:本研究发现4个血清miRNAs(miR-142-5p、miR-126-3p、miR-143-3p和miR-27b-3p)可用来区分DCM患儿和健康儿童。循环miRNAs可作为有效的儿童DCM筛查工具。

目的:探讨miRNA-34a（miR-34a）靶向高迁移率族蛋白B1（HMGB1）逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药的相关机制。方法:采用剂量递增间歇作用的方法构建MG-63顺铂耐药细胞株（MG-63/DDP）。使用不同浓度顺铂（0、1、5、10、20、30 μg/ml）处理MG-63/DDP细胞，采用CCK-8法检测细胞存活率。将MG-63/DDP细胞分别转染miR-34a过表达载体（miR-34a过表达载体组）及miR-34a空表达载体（miR-34a-NC组），采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-34a的相对表达量；使用不同浓度顺铂（0、1、5、10、20、30 μg/ml）处理细胞，采用CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡情况；采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a是否调控HMGB1的表达，蛋白质印迹法检测转染后细胞的HMGB1蛋白表达量。将MG-63/DDP细胞分别转染HMGB1基因沉默载体（si-HMGB1组）及其阴性对照载体（si-NC组），采用蛋白质印迹法检测HMGB1蛋白表达量；CCK-8法检测细胞存活率。结果:MG-63/DDP细胞株构建成功。不同浓度顺铂作用后，MG-63/DDP细胞存活率均高于MG-63细胞（均 P<0.01）。MG-63/DDP细胞和MG-63细胞对顺铂的半数抑制浓度（ IC50）分别为25.80 μg/ml和0.47 μg/ml。MG-63/DDP细胞中miR-34a相对表达量低于MG-63细胞（0.46±0.04比1.02±0.05， t=15.14， P<0.01）；与miR-34a-NC组相比，miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞中miR-34a相对表达量增加（1.67±0.09比1.00±0.02， t=-12.58， P<0.01）。miR-34a过表达载体组、miR-34a-NC组细胞存活率随着顺铂浓度增加而降低，5~30 μg/ml顺铂作用后，miR-34a过表达载体组细胞存活率均低于miR-34a-NC组（均 P<0.01）。20 μg/ml顺铂处理24 h后，miR-34a-NC组和miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞凋亡率分别为（25.1±1.7）%、（42.3±2.3）%，miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞具有更高的凋亡率（ P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，与miR-34a-NC组相比，miR-34a过表达载体组能够抑制PGL3-野生型-HMGB1荧光素酶活性，差异具有统计学意义（ t=6.37， P<0.01），而miR-34a过表达载体组对PGL3-突变型-HMGB1荧光素酶活性无明显抑制效果（ t=0.35， P=0.74）。miR-34a过表达载体组HMGB1蛋白相对表达量低于miR-34a-NC组（0.43±0.02比1.00±0.14， t=6.98， P<0.01）。与si-NC组相比，si-HMGB1组HMGB1蛋白相对表达量及 IC50均降低（均 P<0.05）。 结论:miR-34a过表达能够增强骨肉瘤细胞MG-63/DDP对顺铂的化学敏感性，其作用机制可能与抑制HMGB1的表达有关。

目的:探讨miR-20a-5p对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞系SH-SY5Y增殖、侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:将miR-20a-5p过表达及抑制基因分别转染至SH-SY5Y细胞，根据实验需要分为miR-20a-5p过表达组、NC过表达组、miR-20a-5p抑制组、NC抑制组，通过体外实验研究miR-20a-5p对NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移的影响。根据生物信息学预测软件初步预测NFKBIB（IκB β）可能为miR-20a-5p的下游靶基因，运用双荧光素酶报告实验、定量反转录PCR (qRT-PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）验证miR-20a-5p靶向调控NFKBIB基因。通过细胞集落形成实验、CCK-8实验、细胞侵袭实验、细胞划痕实验、流式细胞术研究miR-20a-5p在SH-SY5Y细胞中增殖、侵袭和迁移的生物学功能。在mRNA水平上，运用qRT-PCR检测每组细胞中NFKBIB mRNA的表达量；用Western blot检测在每组细胞中NFKBIB、NF-κB蛋白的表达量。结果:细胞集落形成实验显示miR-20a-5p过表达组细胞集落形成数为（146±16）个，较NC过表达组（39±1）个显著增高，差异有统计学意义（ P<0. 01）。CCK-8实验结果显示miR-20a-5p过表达组较NC过表达组显著促进SH-SY5Y细胞增殖。细胞侵袭实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞侵袭数量为（117±5）个，较NC过表达组（55±2）个显著增多，差异有统计学意义（ P<0. 001）。细胞划痕实验结果显示miR-20a-5p过表达组细胞愈合率为（0. 56±0. 05）%，NC过表组细胞愈合率为（0. 40±0. 08）%，差异有统计学意义（ P<0. 05）。流式细胞术实验结果显示抑制miR-20a-5p后，SH-SY5Y细胞早期凋亡的细胞数较NC抑制组增多。抑制miR-20a-5p的表达后，上述实验结果与过表达miR-20a-5p时相反，差异均有统计学意义（ P<0. 05）。过表达miR-20a-5p后，qRT-PCR结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB mRNA表达含量为（0. 36±0. 24），较NC过表达组（1. 00）显著降低；Western blot结果显示miR-20a-5p过表达组NFKBIB表达量为（1. 15±0. 30），较NC过表达组的表达量（1. 92±0. 31）显著降低；NF-κB表达量为（4. 17±0. 45），较NC过表达组的表达量（1. 64±0. 39）显著增加，差异均有统计学意义（ P< 0. 05）。 结论:miR-20a-5p促进NB细胞系SH-SY5Y的增殖、侵袭和迁移能力，可能是通过抑制NFKBIB的表达来激活NF-κB通路，或可作为促进NB细胞增殖、侵袭和迁移的潜在干预靶点。