目的:筛选肠道病毒71型(EV71)中和表位，确定诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸基序，为合成肽疫苗研发提供理论依据。方法:利用噬菌体随机十二肽库淘选EV71中和抗体特异性结合克隆并测序，推导出中和表位的关键序列。合成含有关键序列且N端乙酰化(AC)和C端连接血蓝蛋白(KLH)的系列肽段，免疫小鼠后收集血清，经Western blot、ELISA和中和试验验证肽段的免疫原性以及免疫后血清的中和活性。结果:经过3轮淘选和克隆测序后，分析确定关键基序为KQEKDL。Western blot结果表明修饰后的含关键基序的系列肽段免疫小鼠获得的血清与EV71和VP1蛋白均有不同程度结合。ELISA结果表明仅含有最短关键基序的合成肽段(AC-KQEKDL-KLH)免疫后血清对其余3条肽段及EV71的反应最强。中和试验结果表明该肽段免疫后血清的中和效价也最高。结论:利用噬菌体随机肽库技术成功筛选出EV71中和表位，确定KQEKDL关键基序可能是诱导机体免疫应答的特定最短氨基酸序列，为了解免疫应答机制、免疫原性评价及多肽疫苗的研发提供理论依据。

目的:评价蛋白质糖基化(O-GlcNAc)修饰在氧糖剥夺/复氧复糖小鼠神经细胞氧化应激损伤中的作用。方法:标准小鼠海马神经细胞系，以5×10 4个/ml的密度接种于培养板或培养皿，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：正常组(N组)、O- (连接) N-乙酰葡糖胺水解酶(OGA)抑制剂Thiamet G组(T组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(D/R组)以及Thiamet G+氧糖剥夺/复氧复糖组(T-D/R组)。采用低糖培养基在94%N 2-5%CO 2-1%O 2混合气体培养6 h进行糖氧剥夺，随后更换正常培养基进行复氧复糖12 h。T-D/R组在氧糖剥夺/复氧复糖前4 h时细胞培养液中加入终浓度1 mmol/L的Thiamet G，T组于提取细胞蛋白前4 h换成含终浓度1 mmol/L Thiamet G的培养基。复氧复糖完成后，采用DCFH-DA染色法检测细胞ROS累积量，Jc-1染色法检测线粒体膜电位，免疫荧光法检测O-GlcNAc修饰水平，Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p53抑癌基因(p53)表达水平。 结果:与N组比较，T组神经细胞O-GlcNAc表达上调，D/R组神经细胞ROS累积量增多，JC-1单体升高，JC-1聚合物降低，Nrf2表达下调，p-JNK、p53表达上调，T-D/R组神经细胞O-GlcNAc表达上调，ROS累积量增多，JC-1单体与JC-1聚合升高，Nrf2表达下调，p-JNK、p53表达上调( P<0.05)。与D/R组比较，T-D/R组神经细胞O-GlcNAc表达上调，ROS累积量减少，JC-1单体降低，JC-1聚合物升高，Nrf2表达上调，p-JNK、p53表达下调( P<0.05)。 结论:小鼠神经细胞氧糖剥夺/复氧复糖时，蛋白质O-GlcNAc修饰作为内源性保护机制水平增强，可减轻氧化应激损伤，机制可能与调控Nrf2介导的JNK通路有关。

目的:探讨甲状腺功能正常，亚临床甲状腺功能减退和甲状腺功能减退三种不同状态的桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis ，HT)患者血清中甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody ，TgAb)免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig) G糖基化修饰水平的差异。方法:收集天津市第五中心医院2016年12月至2019年8月诊断的TgAb阳性的初发HT患者96例，根据甲状腺功能不同将患者分为甲状腺功能正常组(Eu组，n＝32)，亚临床甲状腺功能减退组(sH组，n＝28)和甲状腺功能减退组(H组，n＝36)，采用抗原特异的凝集素酶联免疫吸附测定法(lectin-enzyme-linked immunosorbent assay，L-ELISA)分别检测TgAb上的岩藻糖、半乳糖及唾液酸的相对含量。结果:Eu组患者TgAb IgG的阳性率低于H组(35.7%比52.7%， P＝0.016)，但在sH组与H组中差异无统计学意义(46.8%比52.7%， P＝0.396)。Eu组，sH组和H组的TgAb末端的核心岩藻糖含量的中位数分别是18.3%，17.7%和16.8%，半乳糖含量的中位数分别是40.2%，38.4%和39.6%，唾液酸含量的中位数分别是98.4%，84.3%和89.6%，其差异均无统计学意义( P值均>0.05)。 结论:不同功能状态的HT患者TgAb IgG的糖基化修饰水平虽没有显著差异，但提示了对TgAb IgG Fc段糖基化修饰的精确研究可能是下一步探讨不同功能状态HT发生机制的方法。

目的:设计新型S1PR3特异性激动剂GPS-725.017，并研究其通过促进巨噬细胞对细菌的清除能力，保护急性肺损伤（acute lung injury, ALI）的作用。方法:以来源于S1PR3受体胞内区段的短肽为母核结构，在其N末端修饰正亮氨酸（norleucine, Nle）和肉豆蔻酸（myristic acid, myr），命名为GPS-725.017。实验小鼠分为假手术组、溶剂组和GPS-725.017治疗组，每组5或10只，各组气管内注射5×10 6 CFU（colony forming unit）大肠杆菌诱导急性肺损伤，GPS-725.017治疗组按10 mg/kg剂量给予GPS-725.017治疗。观察各组小鼠48 h生存率；造模5 h后，检测外周血及肺脏细菌负荷及炎性因子，Western blot法测定肺泡巨噬细胞内Vps34蛋白含量；造模12 h后，取肺组织进行H&E染色，并病理学评分。 结果:与溶剂组相比，GPS-725.017治疗组小鼠生存率显著提高（ P<0.01），血液、肺泡灌洗液细菌CFU低于溶剂组( P<0.001)，血液、肺泡灌洗液中的TNF-α、IL-1β水平显著低于溶剂组（ P<0.001），肺泡巨噬细胞内Vps34蛋白表达水平明显高于溶剂组（ P<0.01），治疗组肺脏病理学损伤较溶剂组明显减轻（ P<0.001）。 结论:S1PR3特异性激动剂GPS-725.017可以特异性激动肺泡巨噬细胞膜上S1PR3受体，上调胞内Vps34蛋白表达水平，从而促进肺泡巨噬细胞清除细菌，明显减轻ALI小鼠的肺部损伤程度，显著提高ALI小鼠的生存率。

DNMT1不仅是一种重要的DNA甲基转移酶，维持子代与亲代甲基修饰的统一，它的N端还含有特异性序列，使其在DNA损伤应答反应中发挥重要作用。DNA损伤应答反应是细胞对DNA损伤反应的统称，包括对DNA损伤信号的识别和放大、招募DNA修复因子启动修复通路和协调周期调控、诱发细胞凋亡。本文对DNMT1的作用、DNA损伤应答反应过程以及DNMT1通过参与损伤信号的感知和传导，调控DNA修复、周期检查点停滞和细胞凋亡参与DNA损伤应答反应过程加以综述。

氧连接的 N-乙酰葡糖胺（ O-linked β- N-acetylglucosamine, O-GlcNAc）修饰是一种在细胞中广泛存在的蛋白质翻译后修饰方式，在相关酶的作用下，将 N-乙酰氨基葡萄糖可逆地连接于丝氨酸/苏氨酸末端。缺血性疾病损伤是由于组织血流灌注不足导致局部组织或细胞发生缺氧损伤的现象，其转归受到 O-GlcNAc修饰的影响。文章通过综述 O-GlcNAc修饰在缺血性疾病损伤中通过介导线粒体分裂、细胞凋亡、内质网应激、细胞能量代谢、自噬及氧化应激现象，从而预防和缓解缺血、缺氧对细胞的损伤，旨在探索 O-GlcNAc修饰在缺血性损伤疾病中发挥的保护作用，并为后续临床上预防和降低缺血性疾病损伤提供新的治疗思路。

目的:探讨脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)在人近端肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)中的作用。方法:以HK-2细胞作为研究对象，用抗霉素A、A23187、2-脱氧葡萄糖构建HK-2细胞IRI模型。将细胞分为对照组及缺血再灌注组(I/R组)。实时荧光PCR(qPCR)法及Western blot法分别检测2组细胞FTO、B细胞淋巴瘤/白血病2相关X基因(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡。比色法检测mRNA N 6-甲基腺苷(m 6A)甲基化水平。 结果:1．与对照组比较，I/R组细胞FTO mRNA(0.15±0.05比1.00±0.23)、Bcl-2 mRNA(0.14±0.07比1.02±0.25)相对表达量降低，Bax(3.10±0.35比1.00±0.13)、cleaved Caspase-3 mRNA(4.21±0.56比1.00±0.09)相对表达量增高，差异均有统计学意义( t＝6.28、5.84、-9.83、-9.84，均 P<0.01)。2.与对照组比较，I/R组FTO蛋白(0.69±0.14比1.37±0.02)、Bcl-2蛋白(0.50±0.12比1.25±0.21)降低，Bax蛋白(1.04±0.08比0.57±0.06)、cleaved Caspase-3蛋白(0.99±0.05比0.36±0.07)相关表达量增高，差异均有统计学意义( t＝8.10、5.49、-8.22、-12.09，均 P<0.05)。3.与对照组比较，I/R组HK-2细胞凋亡率[(61.70±1.01)%比(0.16±0.10)%]增高，差异有统计学意义( t＝63.80， P<0.01)。4.与对照组比较，I/R组总mRNA m 6A水平在总RNA中的百分比[(3.13±0.21)%比(1.10±0.26)%]增高，差异有统计学意义( t＝-10.61， P<0.01)。 结论:FTO介导的RNA m 6A修饰可能通过调控HK-2细胞凋亡影响肾脏IRI。

糖基化修饰是免疫球蛋白G（IgG）结构和功能的一部分，唾液酸位于IgG N-糖链的最末端，通过调节IgG与可结晶片段γ受体及补体的结合而调控IgG抗炎和促炎活性，与自身免疫疾病的发生发展及转归密切相关，在疾病诊断、监测及治疗领域都显示出了巨大潜能，有望成为自身免疫疾病新型标志物和治疗靶点。

近年来，RNA被广泛应用于药物和疫苗等的研发之中，RNA在应用研究中遇到的困难可以尝试在合成RNA的过程中加入经过修饰的核苷酸来克服。基于酶合成的方法主要包括体内转录和体外转录，体内转录可以使用工程支架来促进RNA产物环状化，提高RNA的稳定性，相对经济也是其优点之一，而广泛的下游加工则是该方法的弊端；体外转录是目前RNA合成的最常用的方法，需要设计携带特异性噬菌体启动子片段(S6、T3、T7)的DNA模板，以便RNA聚合酶结合和提供转录启始信号，获得的寡核苷酸长度范围大，生产成本相对较低，可重复性强，但由于3′端存在异质性，可能导致产物末端不均匀。该方法中，仅T7 RNA聚合酶可以接受修饰的核苷酸。获得含有核苷酸类似物的短RNA分子的最佳方法是化学合成，常用的是磷酸酰胺固相合成法，主要步骤为脱三苯甲基(使用三氯或二氯乙酸溶液去除DMT基团)、缩合反应(游离的5′-羟基与活化的核苷3′-磷酸酰胺反应形成新的核苷酸间键)、加帽(使用乙酸酐/鲁替丁/N-甲基咪唑混合物将游离的5′-OH转化为乙酰酯)、氧化(不稳定的亚磷酸盐-P(III)氧化为P(V)磷酸)。化学合成可获得任何短RNA(<20 nt)的准确片段，便于引入修饰的核苷酸，但对于合成长RNA(>100 nt)效率低下，设备非常昂贵。核苷酸修饰可以调节RNA的功能，包括调控基因表达，参与一些病理过程或影响RNA的结构。获得含有修饰核苷酸的RNA分子最方便的方法是化学合成，优点是可以在RNA片段的每个位置加入修饰的核苷酸，将较多种类的修饰结合到两条RNA链中。每一种修饰都可以调节RNA的性质，这严格依赖于核苷酸单位内修饰的位置，包括核碱基、磷酸主链、核糖环等。

目的:鉴定SseK3蛋白宿主中新的生物学底物以及对其功能的影响。方法:通过酵母双杂交系统(yeast-two-hybrid，Y2H)从HeLa cDNA文库中筛选SseK3潜在结合蛋白；通过细胞共表达和体外活性试验检测SseK3对底物蛋白的精氨酸N-乙酰葡萄糖胺化(Arg-GlcNAc)修饰；通过点突变检测SseK3对底物蛋白的修饰位点；通过免疫共沉淀试验检测底物蛋白的Arg-GlcNAc修饰对其互作蛋白结合能力的影响。结果:酵母双杂交和基因测序结果表明，SseK3的一个全新底物是Snapin；SseK3在细胞内和体外均可以Arg-GlcNAc修饰Snapin；修饰位点位于Snapin蛋白C端的119和120位精氨酸；Arg-GlcNAc修饰Snapin抑制了Snapin-SNAP25的结合。结论:本研究成功筛选到SseK3的一个新的宿主底物蛋白Snapin，初步研究了SseK3对Snapin的Arg-GlcNAc修饰及该修饰对Snapin功能的影响，为后续进一步理解细菌的Arg-GlcNAc修饰功能以及在病原微生物感染过程中的作用机制提供理论依据。