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DNMT3a在肺腺癌中的表达及癌细胞迁移的影响分析
编辑人员丨1天前
目的 探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在肺腺癌中的表达水平及影响肺腺癌细胞迁移的分子机制.方法 回顾性分析2023年1~12月在安徽医科大学第一附属医院胸外科接受手术治疗的41例肺腺癌患者临床资料,使用IHC和蛋白质印迹实验(WB)检测并分析DNMT3a在41例患者肺腺癌组织及癌旁组织中的表达水平;通过分析TCGA数据库揭示DNMT3a与肺腺癌患者预后关系.慢病毒介导SK-LU-1和A549细胞系过表达或敲低DNMT3a,通过IHC、WB、实时荧光定量聚合链反应(qRT-PCR)、DNMT3a抑制剂实验观察DNMT3a对蜗牛家族转录因子(Snail)表达的影响;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测过表达或敲低DNMT3a对肺腺癌细胞迁移的影响.结果 DNMT3a高表达对比DNMT3a低表达的肺腺癌患者生存期较短,差异有统计学意义(P<0.01);DNMT3a和Snail在肺腺癌组织中较癌旁组织相比均高表达(P<0.01),且DNMT3a和Snail在肺腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.612,P<0.01).与对照组相比,过表达DNMT3a的SK-LU-1细胞中Snail表达上调并增加了肺腺癌细胞的迁移数量(P<0.01),敲低DNMT3a的A549细胞中Snail表达下调并减少了肺腺癌细胞的迁移数量(P<0.01).结论 DNMT3a在肺腺癌组织中高表达且与不良预后显著相关,DNMT3a通过上调Snail的表达促进肺腺癌细胞的迁移.
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编辑人员丨1天前
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100例骨髓增生异常性肿瘤患者基因突变及其与临床特征间的关系
编辑人员丨1周前
目的:探讨骨髓增生异常性肿瘤(myelodysplastic syndrome,MDS)患者基因突变与临床特征、预后及急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化风险间的相关性.方法:回顾性分析100例连续的初治MDS患者的临床资料,采用第二代测序技术检测患者中34种MDS疾病相关突变基因,分析该队列中不同基因的突变发生率及分布情况,探讨高频基因突变(突变率≥10%)与患者临床特征、预后及转化为AML风险之间的关系.结果:100例MDS患者共检出32种基因突变,有84%患者出现至少1种基因突变,基因突变最多见于MDS伴多系病态造血(MDS with multilineage dysplasia,MDS-MLD)患者(39.3%);≥60岁老年患者中有82.8%(53/64)出现基因突变.基因突变中,ASXL1突变发生率最高(26.0%),其他突变率大于10%的基因(高频基因)还包括TET2、U2AF1、DNMT3A、RUNX1、TP53和SF3B1.ASXL1易与RUNX1共突变,与TP53突变共排斥.在基因突变与临床特征相关性分析中,ASXL1突变组骨髓原始细胞比例高于ASXL1未突变组;U2AF1突变组血小板计数少于U2AF1未突变组,老年患者中DNMT3A突变(85.7%)高于年轻患者(14.3%);RUNX1突变组白细胞计数高于RUNX1未突变组;TP53突变组中位国际预后评分系统-修订版(International Prognostic Scoring System-Revised,IPSS-R)评分(6.0分)高于TP53未突变组(4.5分),P=0.016;TP53突变组中位乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)数值(420 U/L)高于TP53未突变组(222 U/L)(P=0.002).本研究中位随访时间为18.6个月,中位生存时间27.1个月,多因素分析表明,TP53突变是总体生存期(overall survival,OS)短的独立危险因素.随访期间,15例(15%)患者发生AML转化,而DNMT3A基因突变是MDS患者发生AML转化的独立危险因素(HR=3.73).结论:本研究中MDS患者的MDS相关基因突变率为84%,TP53突变与患者不良预后有关,DNMT3A突变与患者易于发生AML转化有关.
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编辑人员丨1周前
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缓解期存在的克隆性造血对伴NPM1突变急性髓系白血病患者化疗后造血恢复的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨缓解期存在的克隆性造血(CH)对伴NPM1突变急性髓系白血病(AML)患者化疗后造血恢复的影响。方法:回顾性分析2016年7月至2019年6月苏州大学附属第一医院收治的初诊伴NPM1突变AML患者86例,对患者诊断时的临床资料、二代测序检测结果和缓解期骨髓基因突变检测结果进行分析。应用Log-rank方法比较造血恢复的差异,采用单因素及多因素Cox比例风险模型分析影响造血恢复的因素。结果:86例AML伴NPM1突变患者中位年龄50(15~69)岁,男39例,女47例,41例患者给予"7+3"强化疗方案诱导治疗,45例患者给予含低剂量阿糖胞苷的低强度方案诱导治疗。86例患者诊断时最常见的突变为FLT3、DNMT3A、TET2、IDH1、IDH2,缓解期存在CH相关突变患者21例,为DNMT3A、TET2、ASXL1、IDH1/IDH2基因突变。缓解期存在CH相关突变组患者的中性粒细胞恢复时间与缓解期无CH组患者比较差异无统计学意义( P=0.282),但前者的血小板恢复时间明显延长[26(95% CI 21~32)d对25(95% CI 23~26)d, P=0.032]。单因素Cox比例风险模型分析提示年龄、诱导化疗方案、缓解期存在CH相关突变为影响血小板恢复的危险因素,多因素Cox比例风险模型分析提示诱导化疗方案( HR=0.454, P=0.001)、缓解期存在CH相关突变( HR=0.520, P=0.027)为影响血小板恢复的独立危险因素。 结论:缓解期存在的CH使AML伴NPM1突变患者化疗后血小板恢复延迟。
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编辑人员丨1周前
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维奈克拉联合阿扎胞苷治疗老年T/髓混合表型急性白血病1例并文献复习
编辑人员丨1周前
目的:探讨老年T/髓混合表型急性白血病(MPAL)患者的临床特点及优化治疗策略。方法:回顾性分析南方医科大学深圳医院2022年12月收治的1例老年T/髓MPAL患者的临床资料,并复习相关文献。结果:患者为73岁女性,因牙龈出血1个月余、发现血小板降低9 d入院。行骨髓形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学(MICM)检查,基因突变筛查检测到DNMT3A、JAK3、NOTCH1,综合诊断为T/髓MPAL,美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分3分,造血干细胞移植并发症指数(HCT-CI)0分,危险分层为衰弱(Frail),予维奈克拉+阿扎胞苷方案治疗1个疗程后达到完全缓解,且耐受性好。结论:老年人T/髓MPAL常见甲基化基因突变,使用维奈克拉+去甲基化药物治疗获得很好的疗效,并且耐受性好。
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编辑人员丨1周前
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老年髓系肿瘤患者的分子学特点分析
编辑人员丨1周前
目的:初步探讨老年髓系肿瘤患者的分子遗传学特点。方法:采用高通量DNA测序技术检测26例急性髓系白血病(AML)及55例骨髓增生异常综合征(MDS)患者49种靶基因突变;采用基因组DNA-PCR联合Sanger测序法检测CALR基因9号外显子、NPM1基因12号外显子、FLT3-ITD及CEBPA的TAD、BZIP两个功能结构域的突变发生情况。结果:(1)77例患者中,总的基因突变发生率为91.0%,每例患者平均突变2次,其中≥3种基因突变共存发生率为42.9%;最常见的基因突变依次为:NPM1,U2AF1,RUNX1,TET2,ASXL1,TP53,DNMT3A,IDH2,BCOR,FLT3-ITD,其余基因突变发生率<10%。(2)双基因突变在AML中的发生率高于MDS组,≥3个基因突变在MDS组的发生率高于AML组( P=0.003,0.011)。NPM1、FLT3-ITD、CEBPA双突变在AML中的发生率高于MDS患者,BCOR、ASXL1突变在MDS组发生率高于AML组( P<0.05)。功能归类后显示,酪氨酸激酶受体基因突变主要发生于AML组,而染色质修饰基因突变主要发生于MDS组,( P=0.004,0.007)。(3)有效随访MDS患者51例,9例在随访过程中发生白血病转化,平均转化时间为6.5个月,其中,伴RUNX1、U2AF1突变者转白率为44.4%,高于其他基因突变。 结论:老年髓系肿瘤有独特的基因突变谱,常见髓系肿瘤基因突变类型及频率在AML及MDS中分布不同,MDS患者中部分基因突变与白血病转化有一定相关性。
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编辑人员丨1周前
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较低危组与较高危组骨髓增生异常综合征患者常见基因突变分析
编辑人员丨1周前
目的:探讨较低危组和较高危组骨髓增生异常综合征(MDS)患者基因突变及基因突变功能组的差异。方法:回顾性病例系列研究。回顾性分析2018年1月至2023年8月就诊于东南大学附属中大医院227例MDS患者的临床资料。根据修订版国际预后积分系统(IPSS-R),将MDS患者分为较低危组(IPSS-R评分≤3.5分)96例与较高危组(IPSS-R评分>3.5分)131例。采用二代测序检测骨髓标本中58个MDS常见基因突变,取基因突变结果中突变率较高的24个基因纳入研究,并根据基因功能将24个突变基因分为8类。比较较低危组与较高危组临床资料、基因突变及基因突变功能组的差异。结果:227例MDS患者中至少检测出1种基因突变的患者为177例(78.0%),其中突变率较高的5种基因依次为ASXL1[21.6%(49/227)]、TET2[18.5%(42/227)]、TP53[15.4%(35/227)]、DNMT3A[13.2%(30/227)]、U2AF1[10.1%(23/227)]。按基因功能分类,最常见突变组为甲基化相关基因[31.3%(71/227)],其次为剪接体相关基因[24.7%(56/227)]。较低危组血小板计数、中性粒细胞计数均高于较高危组,骨髓原始细胞比例、基因突变率及存在≥3种基因突变率均低于较高危组(均 P<0.05)。较低危组中突变率较高的5种基因依次为TET2[21.9%(21/96)]、DNMT3A[14.6%(14/96)]、ASXL1[13.5%(13/96)]、SF3B1[12.5%(12/96)]、U2AF1[8.3%(8/96)],较高危组中突变率较高的5种基因依次为ASXL1[27.5%(36/131)]、TP53[23.7%(31/131)]、TET2[16.0%(21/131)]、DNMT3A[12.2%(16/131)]、U2AF1[11.5%(15/131)],较低危组ASXL1、TP53、ETV6、NRAS基因突变率均低于较高危组(均 P<0.05)。较低危组及较高危组中甲基化相关基因突变比例均最高,但两组比较差异无统计学意义[32.3%(31/96)比30.5%(40/131), χ2=0.08, P>0.05];两组肿瘤因子抑制物相关基因突变、转录因子相关基因突变、染色质修饰相关基因与RAS途径相关基因突变比例比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:较高危组较较低危组MDS患者常见基因突变率高,且基因突变数量多。
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编辑人员丨1周前
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SPAG6基因沉默和地西他滨对SKM-1细胞凋亡和PTEN甲基化的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨SPAG6基因沉默和地西他滨在体内外对SKM-1细胞凋亡和PTEN启动子甲基化的作用。方法:慢病毒载体转染SKM-1细胞沉默SPAG6基因的表达,地西他滨处理细胞后CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot和甲基化特异性PCR检测PTEN的蛋白表达和甲基化情况,并构建非肥胖糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠异体移植瘤模型,TUNEL法观察肿瘤组织凋亡,免疫组化检测PTEN在组织中表达情况。结果:慢病毒转染后SPAG6干扰组SPAG6基因被成功沉默;CCK-8检测结果提示地西他滨处理能够降低SKM-1细胞的存活率,同时流式细胞术检测显示地西他滨处理组的细胞凋亡率[(17.35±3.37)%]高于未处理组[(5.09±2.06)%],且SPAG6基因沉默联合地西他滨处理组的凋亡率最高[(36.34±4.00)%];地西他滨处理后DNMT1的表达降低而PTEN表达升高,同时PTEN启动子甲基化程度降低,而经地西他滨处理后的SPAG6干扰组的PTEN去甲基化引起的蛋白表达升高效果最明显;NOD/SCID小鼠异体瘤移植模型中地西他滨组的肿瘤体积明显小于生理盐水组,而地西他滨处理SPAG6干扰组的小鼠肿瘤体积最小,且经TUNEL检测发现其凋亡程度最高(阳性比值为3.57±0.48)。结论:SPAG6基因沉默在SKM-1细胞中能增强地西他滨诱导的凋亡和PTEN去甲基化作用,并且在NOD/SCID异体瘤移植模型小鼠中能够增强地西他滨的抗肿瘤特性。
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编辑人员丨1周前
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DNA甲基转移酶1在脑胶质瘤中的研究进展
编辑人员丨1周前
脑胶质瘤是起源于神经中枢系统(CNS)恶性程度最高且伴随高死亡率与致残率的原发性肿瘤。DNA甲基转移酶1(DNMT1)是与脱氧核糖核苷酸甲基化作用关系密切的关键酶,在脑胶质瘤中的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关,其高表达可促进脑胶质瘤生物学功能增强及耐药性产生。此外,DNMT1可调控不同基因甲基化的表观遗传学机制也为脑胶质瘤的治疗提供了新靶点,但其治疗效果因其泛甲基化的特点而具有争议。本文旨在对近年来DNMT1在脑胶质瘤中的研究进行综述,系统分析DNMT1在脑胶质瘤发生、治疗及预后中的作用,为脑胶质瘤治疗提供参考。
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编辑人员丨1周前
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地西他滨抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移侵袭
编辑人员丨1周前
目的:探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)抑制剂地西他滨(DAC)对前列腺癌PC3细胞的增殖和迁移侵袭的影响。方法:取对数生长前列腺癌细胞株PC3,分为3组,分别为对照组和实验组(DAC处理组,250 nmol/L和500 nmol/L)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和单克隆检测细胞体外增殖能力;Transwell检测PC3细胞体外迁移和侵袭能力的改变。定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测DAC对DNMT1的影响效率,并检测DAC处理后p21水平改变。组间比较采用 t检验。 结果:DAC使用后显著抑制PC3细胞增殖能力,并呈剂量依赖性。CCK-8实验显示Ctrl组、250 nmol/L DAC和500 nmol/L DAC组的吸光度值分别为1.831±0.105、1.530±0.119和1.329±0.056,与对照组比较实验组差异均有统计学意义( t=3.247, P<0.05; t=7.299, P<0.05)。单克隆实验结果显示Ctrl组、250 nmol/L DAC和500 nmol/L DAC克隆形成数目为(827.67±4.04)、(577.33±2.52)和(283.67±6.03)个,与对照组比较实验组差异均有统计学意义( t=91.072、129.835, P<0.05)。Transwell结果显示,DAC处理组细胞迁移和侵袭能力低于对照组( P<0.05)。Western blot和qPCR结果显示,DNMT1表达随DAC剂量增高表达而逐渐下降,呈剂量依赖性。DAC处理后,PC3细胞的p21表达水平呈剂量依赖性增高。 结论:DAC能够有效抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过调节DNMT1-p21信号通路可能是作用机制之一。
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编辑人员丨1周前
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DNA甲基转移酶1和叉头蛋白转录因子O亚型3a在结肠癌中的表达关系研究
编辑人员丨1周前
目的:通过检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)和叉头蛋白转录因子O亚型(FOXO)3a在结肠癌患者血清中的水平,分析两者在结肠癌中的关系以及联合检测预测结肠癌发生的诊断效能。方法:选取2019年9月至2020年9月西安国际医学中心医院确诊并收治的结肠癌患者105例作为结肠癌组,65例同期经活检确诊的结肠息肉患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测患者血清中DNMT1、FOXO3a水平;Pearson相关分析结肠癌患者血清中DNMT1、FOXO3a的相关性;采用受试者工作特征曲线对DNMT1、FOXO3a水平在结肠癌中的诊断价值进行评估。结果:对照组与结肠癌组患者血清中DNMT1水平分别为0.93±0.28和1.34±0.35,与对照组相比,结肠癌组患者中DNMT1水平显著升高,差异具有统计学意义( t=7.990, P<0.001);两组患者血清中FOXO3a水平分别为1.04±0.39和0.69±0.18,与对照组相比,结肠癌组患者中FOXO3a水平降低,差异具有统计学意义( t=7.940, P<0.001)。DNMT1和FOXO3a的水平在结肠癌患者血清中呈负相关( r=-0.687, P<0.001)。DNMT1预测结肠癌发生的曲线下面积(AUC)为0.843,敏感性为71.40%,特异性为90.80%;FOXO3a预测结肠癌发生的AUC为0.812,敏感性为88.60%,特异性为67.70%;二者联合预测结肠癌发生的AUC为0.859,敏感性为89.50%,特异性为92.30%;与FOXO3a单独检测相比,二者联合检测对结肠癌的预测价值更高( Z=1.982, P=0.047)。 结论:结肠癌患者血清中DNMT1水平升高,FOXO3a水平则降低,二者在结肠癌患者血清中呈负相关,二者联合检测能够有效提高结肠癌的诊断价值。
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编辑人员丨1周前
