目的:探索腺苷受体2A(A 2AR)调控神经肽Y(NPY)的机制及其在椎间盘退行性病变中对髓核细胞凋亡和细胞外基质的影响。 方法:采用随机数字表分组法将30只雄性SD大鼠分为5组，每组6只。S组为对照组，即穿刺大鼠L5～6椎间盘后注射生理盐水；M组为模型组，即通过椎间盘穿刺联合椎间盘内注射肿瘤坏死因子α构建大鼠椎间盘退变模型；A 2AR-小干扰RNA(siRNA)组、NC-siRNA组和CGS-21680组则为构建椎间盘退变模型基础上分别向椎间盘内注射A 2AR的siRNA、阴性对照(NC) siRNA和A 2AR激动剂CGS-21680。采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应检测A 2AR、NPY、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、蛋白激酶A(PKA)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)等蛋白在椎间盘中的表达。组间比较采用单因素方差分析。 结果:在M组中，A 2AR(1.72±0.50比0.95±0.18， F＝11.49， P>0.05)、NPY(0.40±0.03比0.20±0.04， F＝22.08， P<0.05)和bax(0.62±0.52比0.40±0.04， F＝30.97， P<0.01)蛋白表达水平高于S组，而Col-Ⅱ(0.39±0.03比0.75±0.08， F＝16.24， P<0.01)低于S组；在CGS-21680组中，A 2AR(2.70±0.45比1.72±0.50， F＝11.49， P<0.05)，NPY(0.55±0.05比0.40±0.03， F＝22.08， P<0.05)和Col-Ⅱ(0.53±0.11比0.39±0.03， F＝16.24， P>0.05)表达高于M组，而bax表达低于M组(0.48±0.08比0.62±0.52， F＝30.97， P>0.05)；在A 2AR-siRNA组中，各分子表达变化与CGS-21680组相比与M组相反：A 2AR(0.95±0.29比1.72±0.50， F＝11.49， P>0.05)，NPY表达(0.20±0.06比0.40±0.03， F＝22.08， P<0.01)，bax(0.72±0.09比0.85±0.04， F＝28.01， P>0.05)和Col-Ⅱ(0.42±0.14比0.59±0.19， F＝21.62， P>0.05)。 结论:A 2AR可能通过PKA/CREB信号通路上调NPY及其受体起到减少髓核细胞凋亡和保护细胞外基质的作用。

近年来，中医药治疗AD得到广泛关注。中药调控AD的信号通路研究主要集中在脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶B（TrkB）通路、PI3K/Akt通路、MAPK通路、蛋白激酶A（PKA）/cAMP应答元件结合蛋白（CREB）通路、NF-κB通路及Wnt通路这6条通路。

目的:观察腹部推拿对新生缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型大鼠行为学的影响，探讨其作用机制。方法:7日龄SD大鼠采用经典RICE造模法制备HIBD模型。将造模成功大鼠按随机数字表法分为腹部推拿组和模型组，每组12只，选取12只大鼠作为正常组。腹部推拿组在造模24 h后予腹部推拿，连续干预28 d。各组大鼠于干预第7、14、21、28 d进行平衡木试验，采用HE染色观察大鼠海马CA1区形态结构；荧光PCR法测定海马区5-羟色胺受体（5-HTR1A）基因相对表达量，免疫组化染色法测定海马环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶 A（PKA）、cAMP 反应元件结合蛋白（CREB）表达，Western blot法测定突触蛋白（synaptophysin，SYP）蛋白表达量。结果:干预结束后，模型组大鼠海马CA1区细胞呈弥漫性分布，神经元数量减少，出现炎性水肿；腹部推拿组海马CA1区细胞排列层次清晰，炎性水肿改善明显；与模型组比较，腹部推拿组干预第21、28 d平衡木试验评分显著降低（ P<0.05），腹部推拿组5-HTR1A基因［（1.18±0.08）比（0.77±0.04）］相对表达量显著升高（ P<0.05）；腹部推拿组海马区cAMP［（0.32±0.02）比（0.31±0.01）］、PKA［（0.32±0.02）比（0.29±0.01）］、CREB［（0.31±0.02）比（0.28±0.01）］、SYP表达增加（ P<0.05）。 结论:腹部推拿对新生HIBD大鼠的行为学有改善作用，可能是通过调节5-HTR1A/cAMP/PKA信号通路发挥神经修复作用。

目的:评价胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)信号通路在七氟烷后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠80只，8~10周龄，体重300~340 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、心肌缺血再灌注+七氟烷后处理组(ISP组)、心肌缺血再灌注+七氟烷后处理+GLP-1R拮抗剂组(ISPE组)。采用结扎冠状动脉左前降支40 min、再灌注2 h的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。ISP组于再灌注即刻吸入2.4%七氟烷15 min；ISPE组于造模前28 d时开始，腹腔注射GLP-1R拮抗剂Exendin9-39 50 μg/kg(溶于1 ml 0.9%生理盐水中)，1次/d，并于吸入七氟烷前40 min时最后腹腔注射1次，其余处理同ISP组。再灌注结束即刻采集腹主动脉血样，检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平；然后处死大鼠取心脏，采用HE染色法于光镜下观察心肌组织病理学结果，透射电镜下观察心肌细胞超微结构；TTC染色法测定心肌梗死体积，免疫组化染色法检测心肌GLP-1R表达；Western blot法检测心肌GLP-1R、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)的表达，并计算p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值。 结果:与S组比较，I/R组血清CK-MB和LDH水平升高，心肌梗死体积百分比升高，心肌组织GLP-1R表达上调，cAMP和PKA表达下调，p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值降低( P<0.05)；与I/R组比较，ISP组血清CK-MB和LDH水平降低，心肌梗死体积百分比降低，心肌组织GLP-1R、cAMP和PKA表达上调，p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值升高( P<0.05)；与ISP组比较，ISPE组血清CK-MB和LDH水平升高，心肌梗死体积百分比升高，心肌组织GLP-1R、cAMP和PKA表达下调，p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值降低( P<0.05)。 结论:七氟烷后处理可通过激活GLP-1R信号通路，抑制心肌细胞凋亡，减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。

磷酸二酯酶(PDE)通过催化细胞内的环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的水解参与调节神经元可塑性、突触发生、突触传递、记忆形成和认知功能等细胞生理过程及功能发挥.大量基础和临床研究证明PDE4抑制剂主要通过抑制cAMP水解、提高cAMP含量,增强其下游效应,从而改善中枢神经系统疾病的发生和发展.PDE4抑制剂可提高长时程增强效应、海马神经元cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化和记忆相关Arc基因的表达,从而改善认知和记忆障碍以及阿尔茨海默病样症状;通过减轻α-突触核蛋白诱导的细胞毒性,增加miR-124-3p对细胞活性的作用而抵抗帕金森病的发生发展;可激活cAMP/PKA/CREB通路,从而减弱神经炎症和氧化应激,增强神经可塑性,改善精神分裂症;通过抑制海马的晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Toll样受体4和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3通路降低小胶质细胞激活和IL-1β产生,下调HMGB1/RAGE信号通路和抑制炎症因子,在抑郁症中发挥作用;通过减少小脑神经胶质细胞损伤,增加伤害性感受阈值,改善相互学习和记忆缺陷,从而在孤独症谱系障碍的治疗中发挥作用;通过调节cAMP含量影响脆性X智力低下蛋白表达,有望应用于脆性X染色体综合征治疗;促进少突胶质祖细胞分化并增强髓鞘形成而影响多发性硬化症治疗.PDE4与双向情感障碍也有关,可能作为治疗靶点之一.目前还有不少PDE4抑制剂处于中枢神经系统疾病的临床试验阶段.本文综述了PDE4抑制剂治疗中枢神经系统疾病的基础研究和临床试验进展,以期为中枢神经系统疾病的预防和治疗提供新的思路,为中枢神经系统药物的研发提供新策略.

目的 基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路探讨柴胡皂苷(SS)对多发性抽动症(TS)模型小鼠的治疗作用.方法 将小鼠随机分为对照组、TS组、SS低剂量(SS-L)组、SS高剂量(SS-H)组、阳性药物组、SS-H+PKA抑制剂(H-89)组,每组10只.除对照组外,其他各组经腹腔注射亚氨基二丙腈溶液建立TS小鼠模型.造模后,SS-L组、SS-H组分别给予25、100 mg/kg SS腹腔注射,并以生理盐水灌胃;阳性药物组以0.5 mg/kg氟哌啶醇灌胃,并以生理盐水腹腔注射;SS-H+H-89组以100 mg/kg SS、5 mg/kg H-89腹腔注射,并以生理盐水灌胃;TS组及对照组分别以等体积的生理盐水腹腔注射、灌胃.每天1次,连续干预3周.对小鼠运动行为、刻板行为进行评分,用ELISA法检测纹状体组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)以及多巴胺(DA),用苏木精-伊红法观察脑组织形态学变化,用免疫组化法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,用Western blotting法检测cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,TS组脑细胞形态被破坏,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量高(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达低(P均<0.05);与TS组比较,SS-L组、SS-H组、阳性对照组脑细胞形态得到改善,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量低(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达高(P均<0.05);S-H+H-89组逆转SS-H组各指标的变化(P均<0.05).结论 SS可能通过调节cAMP/PKA/CREB信号通路对TS小鼠发挥治疗作用.

目的 探究诺卡酮(NKT)对轻度脑爆震伤(bTBI)大鼠抑郁样行为的缓解作用及其机制.方法 采用生物激波管分别模拟爆炸超压(BOP)为60 kPa、90 kPa和120 kPa的冲击波建立大鼠bTBI抑郁样模型.BOP暴露后14 d,采用悬尾实验及强迫游泳实验对大鼠抑郁样行为进行评估,选取抑郁样行为最为明显的BOP(120 kPa)进行后续实验.30只大鼠随机分为假手术组、bTBI组(120 kPa BOP暴露)、bTBI+NKT组[120 kPa BOP暴露后第1天开始,经口给药给予NKT 10 mg/(kg·d),共14 d],每组10只.BOP暴露后14 d,采用悬尾实验及强迫游泳实验对大鼠抑郁样行为进行评估;采用Western blotting检测海马组织中蛋白激酶A(PKA)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(pCREB)及脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平;免疫组化检测海马齿状回区(DG)增殖细胞核抗原(PCNA)标记的神经发生情况.结果 90 kPa的BOP暴露即可引起大鼠抑郁样行为,而120 kPa组大鼠BOP暴露后产生的抑郁样行为更明显(P<0.05),据此选取120 kPa的BOP暴露进行后续实验.BOP暴露后14 d,与假手术组比较,bTBI组大鼠悬尾实验不动时间延长(P<0.05),强迫游泳实验潜伏期缩短,不动时间延长(P<0.05),海马组织中PKA、pCREB和BDNF蛋白表达水平降低(P<0.05),海马DG区PCNA阳性神经元数量减少(P<0.05);与bTBI组比较,bTBI+NKT组大鼠悬尾实验不动时间缩短(P<0.05),强迫游泳实验潜伏期延长,不动时间缩短(P<0.05),海马组织中PKA、pCREB和BDNF蛋白表达水平升高(P<0.05),海马DG区PCNA阳性神经元数量增加(P<0.05).结论 早期给予NKT治疗可缓解轻度bTBI大鼠的抑郁样行为,其机制可能与NKT通过激活海马PKA/CREB/BDNF信号通路,使pCREB和BDNF表达水平上调,进而促进海马DG区神经发生有关.

目的:探究麦冬皂苷 D 调节 cAMP/PKA/CREB 信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性损伤的影响.方法:将大鼠分为对照组、模型组、麦冬皂苷 D 低剂量组、麦冬皂苷 D 高剂量组和麦冬皂苷D高剂量+H-89(cAMP 抑制剂)组.检测大鼠质量和大鼠结肠长度;酶联免疫吸附法检测血清 IL-17、IL-6、IL-10、TNF-α、cAMP 水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg 细胞比例;HE 染色检测结肠组织病理损伤;Western blot检测大鼠结肠组织中Bax、Bcl-2 以及cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达.结果:治疗结束后,与对照组相比,模型组大鼠结肠组织显著损伤,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP 水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著降低,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17 比例和Th17/Treg比值、Bax 蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,麦冬皂苷D 低、高剂量组大鼠结肠组织显著减轻,体质量、结肠长度、血清 IL-10、cAMP 水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织 Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 蛋白表达显著升高,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中 Th17 比例和 Th17/Treg 比值、Bax 蛋白表达显著降低(P<0.05);H-89 可部分逆转麦冬皂苷D对炎症性肠病大鼠的治疗作用(P<0.05).结论:麦冬皂苷D可降低IBD大鼠炎症反应和结肠组织损伤,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路实现的.

目的 基于cAMP/PKA/CREB通路探讨柴胡皂苷A对失眠大鼠的改善作用及机制.方法 将 75 只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A低剂量组(0.625 mg·kg-1)、柴胡皂苷A高剂量组(2.500 mg·kg-1)、艾司唑仑组(0.1 mg·kg-1),每组 15 只.采用腹腔注射苯丙氨酸(PCPA,0.1 mg·kg-1)复制失眠大鼠模型.观察大鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相,记录慢波睡眠第 1 期(SWS1)、慢波睡眠第 2 期(SWS2)、快速眼球运动睡眠期(REMS)时长以及总睡眠时长(TST);qRT-PCR法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA及钟控基因Rev-erbα、Rorα mRNA的表达水平;免疫荧光法测定海马组织NeuN表达水平;ELISA法测定脑组织中的cAMP水平;Western Blot法测定脑组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα及cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长(P＜0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显缩短(P＜0.05);神经元排列紊乱,NeuN阳性神经元IOD值明显降低(P＜0.05);脑组织 Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA 及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).与模型组比较,给药组大鼠的攻击性明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短(P＜0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显延长(P＜0.05);神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN阳性神经元IOD值明显升高(P＜0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论 柴胡皂苷A可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路改善失眠大鼠的昼夜节律.

目的 基于环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路探讨固本止咳方(GBZK)治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期小鼠的作用机制.方法 60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、GBZK组、地塞米松组,除对照组外,其余组均使用烟草烟雾暴露联合脂多糖复制COPD稳定期小鼠模型.造模成功后,GBZK组予GBZK 0.2 mL/d灌胃,地塞米松组予1.0 mg/kg地塞米松注射液腹腔注射,2次/d,所有小鼠均给药28 d.观察各组小鼠一般情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肺组织匀浆cAMP水平,利用Western blot检测小鼠肺组织匀浆中cAMP、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达情况.结果 与模型组比较,GBZK组小鼠的喘息气促有所改善,肺组织匀浆中cAMP含量及cAMP、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达均提高(P<0.05).结论 固本止咳方可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路,进而发挥对COPD稳定期小鼠的保护作用.