目的:探讨斑点型锌指结构蛋白[speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein) protein, SPOP]在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法:免疫共沉淀分析SPOP对EV71非结构蛋白2A蛋白酶(2A pro)泛素化水平的影响，Western blot检测干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平，过表达或敲低细胞中SPOP后感染EV71，RT-qPCR分析IFN-β转录水平，RT-qPCR和Western blot检测EV71结构蛋白VP1的转录水平及蛋白质水平。 结果:过表达HA-SPOP后感染EV71，发现EV71感染RD细胞受抑，同时EV71-2A pro的泛素水平呈HA-SPOP梯度依赖增多。转染shSPOP质粒进行内源性SPOP敲低后，黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、接头蛋白线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、磷酸化干扰素调节因子3 (p-IRF3)水平呈剂量依赖地减少，而转染HA-SPOP质粒后，MDA5、MAVS、p-IRF3蛋白质水平呈剂量依赖地增加。SPOP高、低表达促进或降低EV71感染的细胞表达IFN-β mRNA，同时抑制和增加VP1在mRNA或蛋白质水平表达。 结论:SPOP可提高EV71-2A pro的泛素化水平从而促进2A pro降解，推测SPOP可通过抑制2A pro对视黄酸诱导基因蛋白-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体(RLR)信号通路中关键分子MAVS和MDA5的降解，从而上调IRF3磷酸化水平促进IFN-β释放，最终活化宿主细胞抗病毒固有免疫抑制EV71复制。

目的:通过对抗黑色素瘤分化相关基因5（MDA5）抗体阳性和抗Jo-1抗体阳性的肌炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）进行基因表达谱的分析，以阐明特发性炎性肌病亚型的病理生理学机制。方法:①用Illumina HT-12 v4表达谱芯片对12例抗MDA5抗体阳性和16例抗Jo-1抗体阳性的肌炎患者及43名健康对照者的PBMCs进行基因表达谱筛查和分析。应用非配对 t检验，经Benjamini-Hochberg校正，选取基因表达信号倍数变化的绝对值≥2且校正 P<0.05为差异表达基因。将差异基因集进行基因本体论数据库（GO）功能富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，以 P<0.05作为显著性富集的阈值。②用实时荧光聚合酶链反应（real time-PCR）对差异表达基因进行验证，采用Kolmogorov-Smirnov检验对连续型变量进行正态性检验，符合正态分布且方差齐性，采用单因素方差分析，不符合正态分布则用Kruskal-Wallis检验， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:①分析抗MDA5抗体和抗Jo-1抗体阳性患者PBMCs的基因表达谱，发现2种肌炎亚型患者PBMCs的基因表达存在明显差异。抗MDA5抗体阳性患者特异性表达上调的差异基因为407个，GO功能富集分析主要富集于固有免疫应答（ P<0.001）、病毒应答（ P<0.001）和干扰素应答（ P<0.001）等生物过程，KEGG通路富集分析主要富集于病毒感染相关通路（ P<0.001）、视黄酸诱导基因Ⅰ（RIG-Ⅰ）样受体通路（ P<0.001）和Toll样受体通路（ P=0.002）等。抗MDA5抗体阳性组中特异性下调的259个差异基因，GO功能富集分析主要富集于免疫应答（ P=0.006）、TGF-β受体信号通路（ P=0.010）和自然杀伤细胞介导的免疫（ P=0.015）等生物过程。抗Jo-1抗体阳性患者特异性表达上调的差异基因有162个，GO功能富集分析主要富集于核小体组装（ P<0.001）、细胞增长的负调控（ P=0.001）、凋亡负调控（ P=0.004）和黏膜固有免疫（ P=0.012）等生物过程，KEGG通路富集分析主要富集于代谢相关信号通路（ P<0.001）和免疫相关通路（ P<0.001）等。②Real time-PCR证实与健康对照组相比RIG-Ⅰ样受体通路中的干扰素诱导的解旋酶C结构域1（IFIH1）（ P=0.037）、干扰素刺激基因15（ P<0.001）和DEAD（Asp-Glu-Ala-Asp）盒多肽58（DDX58）（ P=0.032）以及人单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）（ P<0.001）、人单核细胞趋化蛋白2（MCP-2）（ P<0.001）和转录因子人碱性亮氨酸拉链转录因子激活蛋白1家族样转录因子2（BATF2）（ P<0.001）、炎症信号通路相关的髓样分化因子88（MYD88）（ P<0.001）在抗MDA5抗体阳性肌炎患者的PBMCs呈高表达。 结论:抗MDA5抗体阳性患者PBMCs基因表达谱特征提示其发病机制与固有免疫应答、病毒应答和干扰素应答等生物过程密切相关。

目的:探讨TRIM25、RIG-Ⅰ在肝癌组织中的表达及二者与患者预后的关系。方法:回顾性分析2017年1月至2018年1月南京医科大学附属淮安第一医院收治的82例肝癌患者资料，收集癌组织和癌旁组织（距肿瘤边缘>5 cm）标本。采用免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织TRIM25、RIG-Ⅰ蛋白表达情况。分析患者癌组织TRIM25、RIG-Ⅰ表达与临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier法分析癌组织TRIM25、RIG-Ⅰ不同表达状态患者总生存（OS）。结果:癌组织TRIM25阳性率高于癌旁组织[68.29%（56/82）比21.95%（18/82）， P<0.001]，癌组织RIG-Ⅰ阳性率低于癌旁组织[31.71%（26/82）比74.39%（61/82）， P<0.001]。低分化患者癌组织TRIM25阳性率高于高中分化患者（ P<0.05），而RIG-Ⅰ阳性率低于高中分化患者（ P<0.05）；肝外转移患者癌组织TRIM25阳性率高于未肝外转移患者（ P<0.05），而RIG-Ⅰ阳性率低于未肝外转移患者（ P<0.05）；临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织TRIM25阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期患者（ P<0.05），而RIG-Ⅰ阳性率低于Ⅰ~Ⅱ期患者（ P<0.05）。中位随访27个月（4~48个月），共2例患者失访；至2022年1月随访结束，全组生存率为43.75%（35/80），癌组织TRIM25阳性和阴性患者生存率分别33.33%（18/54）和65.38%（17/26），癌组织RIG-Ⅰ阳性和阴性患者生存率分别64.00%（16/25）和34.55%（19/55）。Kaplan-Meier法分析显示，癌组织TRIM25阴性患者OS优于阳性患者，癌组织RIG-Ⅰ阳性患者OS优于阴性患者，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:肝癌组织TRIM25表达升高，RIG-Ⅰ表达降低。肝癌组织TRIM25、RIG-Ⅰ表达与预后相关。

目的:探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages，BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2，DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法:培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs，流式细胞术检测F4/80 ＋CD11b ＋细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1，GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2，HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4，MCT4)的mRNA表达水平，比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响，qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15，ISG15)及ISG56的mRNA表达水平，流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。 结果:BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI＝3)感染BMDMs后，GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高，在24 h降低( P<0.05)，而HK2 mRNA转录水平在12、24和36 h均高于空白对照组和灭活DENV-2组( P<0.01)；DENV-2(MOI＝1.5)感染后24 h，MCT4 mRNA转录水平及上清液中乳酸含量均上升( P<0.05)。CCK-8结果显示当乳酸浓度为31.25 mmol/L时，上述3种细胞的活力均大于80%。qRT-PCR结果显示，在MOI＝1和2时，35 mmol/L乳酸可增加BMDMs中DENV E基因mRNA的表达水平( P<0.05)；在MOI＝1.5时，35 mmol/L乳酸上调Raw264.7和THP-1细胞中的DENV E基因mRNA表达水平( P<0.001)，以及BMDMs中CD163、TGF-β、RIG-Ⅰ、IFN-β、ISG15和ISG56的mRNA表达水平( P<0.05)，下调CD86 mRNA的表达( P<0.05)，细胞中CD206蛋白的表达增加( P<0.01)，而CD86蛋白的表达下降( P>0.05)。 结论:本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染，该现象与细胞M2型极化有关。

目的 探究维甲酸诱导基因Ⅰ(DDX58)中的单核苷酸多态性位点(SNPs)是否与乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化有关.方法 2009年9月-2010年3月间,选取张家港市20个村的48 417人进行健康检查并定期随访,于2020年11月共纳入842例基线乙肝表面抗原(HBsAg)阳性患者为研究对象,其中无症状感染者674例,慢性乙型肝炎(CHB)患者168例.对2个单核苷酸多态性位点(DDX58 rs9695310、rs10738889)进行基因分型,采用t检验、x2检验、多因素logistic回归等多种统计学方法,探讨其与HBV感染慢性化的关系.结果 rs9695310基因多态性与HBV感染慢性化相关(P=0.004).与无症状感染者相比,rs9695310的突变C等位基因与患者慢性化显著相关(显性模型:OR=1.74,95％CI:1.18～2.54).同时,rs9695310、性别、年龄、血小板、白球比例及总胆固醇是HBV感染慢性化的独立预测因子(P均＜0.05).ROC曲线显示,以上6个独立因素都能够较好地将HBV感染慢性化感染者同无症状感染者进行区分(AUC=0.738).结论 位于DDX58上的rs9695310的突变C等位基因与中国汉族人群HBV感染慢性化具有相关性,可作为HBV感染转归的预测指标.

目的:通过生物信息学方法筛选银屑病合并重度抑郁障碍的关键基因与信号通路,分析两者可能的共病机制,探究具有诊断价值的关键基因,并预测具有潜在疗效的中药.方法:从公共基因芯片数据库(GEO)中分别下载包含银屑病和重度抑郁障碍患者的基因数据集,分别应用Limma筛选出差异表达基因(DEGs),合并两种疾病的DEGs得到共同差异基因(co-DEGs),将交集基因导入metascape数据库进行GO和KEGG富集分析;基于STRING数据库和Cytoscape 3.9.0软件构建的蛋白相互作用网络筛选出关键基因,并使用OmicStudio在线工具对核心基因的诊断价值进行验证,最后通过Coremine Medical平台预测具有潜在疗效的中药.结果:共纳入1个银屑病数据集(GSE30999)、2个重度抑郁数据集(GSE19738和GSE76826)和2个验证数据集(GSE13355和GSE38206),得到1 554个银屑病DEGs和475个重度抑郁障碍DEGs,取交集后获得87个co-DEGs.GO和KEGG分析提示,co-DEGs主要富集在226个生物过程、18个细胞结构、34个分子功能及19条信号通路上.基于蛋白相互作用网络锁定了 9个可能的关键基因,经验证其中7个具有一定的诊断价值,并预测出46味具有潜在疗效的中药.结论:银屑病合并重度抑郁障碍的机制可能与NOD样受体信号通路及RIG-Ⅰ样受体信号通路相关,STAT1、DDX58、MX1、GBP1、IRF7、IFIT3、IFI44、RSAD2、ISG15可能是诊断和治疗的关键基因,生地黄、大青叶、黄芩、莪术、郁金、当归、人参等中药可能成为治疗的潜在药物.

Objective:Anemoside B4(AB4),the most abundant triterpenoidal saponin isolated from Pulsatilla chinen-sis,inhibited influenza virus FM1 or Klebsiella pneumoniae-induced pneumonia.However,the anti-SARS-CoV-2 effect of AB4 has not been unraveled.Therefore,this study aimed to determine the antiviral activ-ity and potential mechanism of AB4 in inhibiting human coronavirus SARS-CoV-2 in vivo and in vitro.Methods:The cytotoxicity of AB4 was evaluated using the Cell Counting Kit-8(CCK8)assay.SARS-CoV-2 infected HEK293T,HPAEpiC,and Vero E6 cells were used for in vitro assays.The antiviral effect of AB4 in vivo was evaluated by SARS-CoV-2-infected hACE2-IRES-luc transgenic mouse model.Furthermore,label-free quantitative proteomics and bioinformatic analysis were performed to explore the potential antiviral mechanism of action of AB4.Type Ⅰ IFN signaling-associated proteins were assessed using Western blotting or immumohistochemical staining.Results:The data showed that AB4 reduced the propagation of SARS-CoV-2 along with the decreased Nucleocapsid protein(N),Spike protein(S),and 3C-like protease(3CLpro)in HEK293T cells.In vivo antivi-ral activity data revealed that AB4 inhibited viral replication and relieved pneumonia in a SARS-CoV-2 infected mouse model.We further disclosed that the antiviral activity of AB4 was associated with the enhanced interferon(IFN)-β response via the activation of retinoic acid-inducible gene I(RIG-1)like receptor(RLP)pathways.Additionally,label-free quantitative proteomic analyses discovered that 17 pro-teins were significantly altered by AB4 in the SARS-CoV-2 coronavirus infections cells.These proteins mainly clustered in RNA metabolism.Conclusion:Our results indicated that AB4 inhibited SARS-CoV-2 replication through the RLR pathways and moderated the RNA metabolism,suggesting that it would be a potential lead compound for the development of anti-SARS-CoV-2 drugs.

目的 应用生物信息学方法分析确定原发性干燥综合征(primary Sj?gren's syndrome,pSS)患者和健康对照者的特征基因,在转录组学水平上为pSS的发病机制提供思路和理论依据.方法 从基因表达综合(gene expression opmnibus,GEO)数据库筛选获取pSS患者和健康对照者的芯片数据,数据集GSE84844和GSE66795用于分析获取目标基因,GSE40611用于验证.采用差异分析、加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA).利用生物信息学分析方法得到关键基因.通过最小绝对值收敛和选择算子(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)回归获得与pSS发病密切相关的特征基因,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下的面积用来评估特征基因对pSS的诊断价值.结果 与健康对照者相比,pSS患者共筛选出55个差异表达基因;基因本体(gene ontology,GO)富集分析显示差异表达基因主要参与了抗病毒反应、正调控Ⅰ型干扰素的产生、抗病毒先天免疫反应等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and geno omes,KEGG)信号通路富集分析发现差异表达基因富集在甲型流感、视黄酸诱导基因蛋白(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)样受体信号通路、坏死性凋亡和乙型肝炎等信号通路;WGCNA联合LASSO回归筛选出4个特征基因,分别为DDX60、EPSTI1、IFI27和IFI44,4个特征基因在验证数据集GSE40611中曲面下面积分别为0.807、0.866、0.804和0.892.结论 DDX60、EPSTI1、IFI27和IFI44是pSS具有诊断意义的特征基因,能够为更深入地探索原发性干燥综合征的发生发展机制提供理论依据.

目的:比较聚肌胞苷酸 Poly(I:C)、地塞米松(DEX)对小鼠胸腺的影响和RLR 通路的改变,为研究病毒感染导致胸腺受损的机制,选择合适的动物模型提供实验依据.方法:将24只8周龄C57BL/6小鼠随机分组,分别给予Poly(I:C)、DEX及生理盐水.观察胸腺指数、胸腺组织学变化、外周血中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量以及初始型CD4+T细胞的比例,并检测胸腺组织RLR/MAVS/IFN-α/β通路的表达情况.结果:Poly(I:C)和DEX都可以导致胸腺萎缩和组织结构破坏,DEX组更严重且皮质区细胞减少更为明显.两组的TRECs均下降.Poly(I:C)组的初始型CD4+T细胞有增加趋势;而DEX组的CD4+T细胞初始/记忆亚群比例改变不明显.DEX组RIG-Ⅰ、MDA5、LGP2和IFN-α/β表达上调明显;而Poly(I:C)组虽略有上调、但无统计学意义.结论:两种造模方法均可诱导胸腺功能受损.DEX 诱导的胸腺损伤更严重且伴有RLR——Ⅰ型IFN通路的大幅上调;而在Poly(I:C)组该通路仅轻微上调.

目的 探讨乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)对Bewo细胞维甲酸诱导基因-I(retinoic acidinducible-Ⅰ,RIG-Ⅰ)和线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)表达的作用.方法 首先以终浓度2 μg/mL的RIG-Ⅰ配体poly(dAT∶dAT)处理Bewo细胞24 h,观察RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达.然后将5μgHBeAg重组质粒pcDNA3.1 (+)-HBe转染Bewo细胞,转染48 h后,以2μg/mL的poly(dAT∶ dAT)刺激24 h.采用实时荧光定量反转录PCR和酶联免疫吸附测定分别检测细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达及上清干扰素-β(interferon-β,IFN-β)水平.并采用免疫荧光染色法观察HBeAg对细胞核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)p65入核的影响.结果 poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(27.86±9.49,21.75±8.04),高于对照组(14.51±6.27,11.59±4.73)(P＜0.01).转染5μg HBeAg重组质粒组poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(13.33±4.23,10.48±3.17)及IFN-β产生[(14.20±5.01)pg/mL],低于对照组[27.86±9.49,21.75 ±8.04;(47.69± 14.3)pg/mL](P＜0.01),但与pcDNA3.1-HBe-5组[11.82±3.58,9.39±3.22;(10.82± 3.75)pg/mL]比较,差异无统计学意义(P＞0.05).且HBeAg可干扰poly(dAT∶dAT)诱导Bewo细胞NF-κB p65入核,抑制NF-κB的激活.结论 HBeAg可下调Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达,并抑制NF-κB入核及IFN-β产生,这可能是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)逃避宿主免疫应答的一种重要策略.