Background::Exploring the underlying mechanism of rituximab resistance is critical to improve the outcomes of patients with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). Here, we tried to identify the effects of the axon guidance factor semaphorin-3F (SEMA3F) on rituximab resistance as well as its therapeutic value in DLBCL.Methods::The effects of SEMA3F on the treatment response to rituximab were investigated by gain- or loss-of-function experiments. The role of the Hippo pathway in SEMA3F-mediated activity was explored. A xenograft mouse model generated by SEMA3F knockdown in cells was used to evaluate rituximab sensitivity and combined therapeutic effects. The prognostic value of SEMA3F and TAZ (WW domain-containing transcription regulator protein 1) was examined in the Gene Expression Omnibus (GEO) database and human DLBCL specimens.Results::We found that loss of SEMA3F was related to a poor prognosis in patients who received rituximab-based immunochemotherapy instead of chemotherapy regimen. Knockdown of SEMA3F significantly repressed the expression of CD20 and reduced the proapoptotic activity and complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity induced by rituximab. We further demonstrated that the Hippo pathway was involved in the SEMA3F-mediated regulation of CD20. Knockdown of SEMA3F expression induced the nuclear accumulation of TAZ and inhibited CD20 transcriptional levels via direct binding of the transcription factor TEAD2 and the CD20 promoter. Moreover, in patients with DLBCL, SEMA3F expression was negatively correlated with TAZ, and patients with SEMA3F lowTAZ high had a limited benefit from a rituximab-based strategy. Specifically, treatment of DLBCL cells with rituximab and a YAP/TAZ inhibitor showed promising therapeutic effects in vitro and in vivo. Conclusion::Our study thus defined a previously unknown mechanism of SEMA3F-mediated rituximab resistance through TAZ activation in DLBCL and identified potential therapeutic targets in patients.

Bone formation and deposition are initiated by sensory nerve infiltration in adaptive bone remodeling.Here,we focused on the role of Semaphorin 3A(Sema3A),expressed by sensory nerves,in mechanical loads-induced bone formation and nerve withdrawal using orthodontic tooth movement(OTM)model.Firstly,bone formation was activated after the 3rd day of OTM,coinciding with a decrease in sensory nerves and an increase in pain threshold.Sema3A,rather than nerve growth factor(NGF),highly expressed in both trigeminal ganglion and the axons of periodontal ligament following the 3rd day of OTM.Moreover,in vitro mechanical loads upregulated Sema3A in neurons instead of in human periodontal ligament cells(hPDLCs)within 24 hours.Furthermore,exogenous Sema3A restored the suppressed alveolar bone formation and the osteogenic differentiation of hPDLCs induced by mechanical overload.Mechanistically,Sema3A prevented overstretching of F-actin induced by mechanical overload through ROCK2 pathway,maintaining mitochondrial dynamics as mitochondrial fusion.Therefore,Sema3A exhibits dual therapeutic effects in mechanical loads-induced bone formation,both as a pain-sensitive analgesic and a positive regulator for bone formation.

目的:从全基因组脑表达的角度揭示人脑结构相似网络(MSN)的生物学基础.方法:基于 194 名正常中老年受试者[男 88 名,女 106 名,平均年龄(57.56±7.76 岁)]的高分辨率三维T1 加权成像(3D-T1WI)和弥散张量成像(DTI)数据,提取7 个影像学特征指标,包括:皮层表面积、皮层厚度、灰质体积、高斯曲度、平均曲度、各向异性分数和平均扩散系数,构建MSN.同时借助艾伦人脑图谱(allen human brain atlas,AHBA)全基因组脑基因表达数据进行基因表达与MSN的空间关联分析.然后,对与MSN显著相关的基因进行富集分析.结果:所有连接密度阈值下 194 名受试者的平均MSN图与无阈值的MSN图均存在显著相关性(Pautocorr<0.05).基因表达-MSN的空间关联分析发现了 770 个与中老年MSN显著相关的基因(bonferroni,Pautocorr<0.05),这些基因主要富集于突触信号转导和中枢神经系统发育等生物学过程,并且与自闭症、精神分裂症和重度抑郁等神经精神疾病的发生有关.其中,194 名受试者的平均MSN与SLC26A4(r=0.619,P=3.311e-17)和SEMA4F(r=0.624,P=1.559e-16)的基因表达量呈正相关,与TRAPPC2B(r=-0.625,P=1.337e-17)和KCNA3(r=-0.617,P=4.349e-17)基因表达量呈负相关.结论:中老年人MSN受突触信号转导和中枢神经系统发育等通路基因的调控,是MSN用于神经精神疾病脑改变研究的生物学基础.

目的:研究慢性心衰(C H F)患者外周血CD14d i mCD16+细胞含量与心室重构、炎症反应的相关性.方法:选择2014年8月~2017年3月期间在四川省第二中医医院诊断为慢性心力衰竭的患者作为研究的CHF组,选择同期在四川省第二中医医院体检的健康人作为研究的对照组.采集外周血并测定CD14d i mCD16+细胞的含量,采集血清并测定心室重构及炎症反应指标.结果:C H F组患者外周血中 CD14dimCD16+细胞的含量以及血清中 PICP、PIIICP、Sema4D、MMP9、MMP14、Gal-3、sST2、TNF-α、sVCAM-1的含量显著高于对照组(P<0.05);高CD14dimCD16+含量CHF患者血清中PICP、PIIICP、Sema4D、MMP9、MMP14、Gal-3、sST2、TNF-α、sVCAM-1的含量显著高于低CD14dimCD16+含量C H F患者(P<0.05).结论:慢性心衰患者外周血中异常升高的CD14d i mCD16+细胞含量能够促进病程中的心室重构、炎症反应.

目的 探讨干扰Sema4D基因的表达对胰腺癌细胞生物学的影响.方法 设计合成Sema4D-siRNA,转染到人胰腺癌细胞系中,将实验分为3组,转染siRNA组、阴性对照组(即转染非特异性对照组)、空白对照组(未经任何处理的胰腺癌细胞).转染48 h后利用RT-qPCR检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化,转染72 h后利用Western-Blot的方法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell小室侵袭试验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变;采用流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡的变化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析比较,进一步两两比较采用LSD-t检验法.结果 转染Sema4D-siRNA 48 h后,转染siRNA组Sema4D mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,3组比较差异有统计学意义(F=421.990,P＜0.001).转染Sema4D-siRNA 72 h后,转染siRNA组Sema4D蛋白明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(F=27.074,P=0.002 3).转染siRNA组48、72、96 h的细胞生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为15.314、62.255、223.493,P值分别为0.004、＜0.001、＜0.001).转染siRNA组穿膜细胞个数明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(42.0±5.9 vs 60.0 ±6.1 vs 61.0 ±4.6,F=37.21,P=0.000 4].转染siRNA组穿膜细胞凋亡率明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义[(16.57±0.31)％ vs (9.50±0.45)％ vs (9.90±0.61)％,F=26.75,P=0.007 4].结论 siRNA能够下调Sema4D基因在胰腺细胞中的表达,可以抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力明显下降,凋亡率下降.

目的:研究肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD及miR-454在直肠癌患者中的表达水平.方法:2016年1～3月,21例直肠癌患者分别检测癌灶组织、癌病灶周围组织以及直肠正常组织中的肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD及miR-454表达水平,分析肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD与miR-454的相关性,探讨三者在直肠癌发生、发展中的作用.结果:癌组织、癌旁组织以及正常组织中的SEMA3F、CYLD与miR-454表达差异均具有统计学意义(P＜0.01).转移组患者癌组织中SEMA3F、CYLD均显著低于无转移组,miR-454显著高于无转移组(P＜0.01).高分化组CRC组织中SEMA3F、CYLD表达水平显著高于中低分化组,miR-454表达显著低于中低分化组(P＜0.01).肿瘤抑制因子CYLD与miR-454具有显著负相关性(r=-0.971,P＜0.01).肿瘤抑制因子SEMA3F与miR-454具有显著负相关性(r=-0.955,P＜0.01).结论:肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD在直肠癌早期可见高表达,随着病情进展表达水平逐渐下降;而miR-454则起到促进直肠癌细胞异常增殖及转移的作用,随着疾病进展表达水平逐渐升高,且与SEMA3F、CYLD均呈显著负相关;肿瘤抑制因子SEMA3F、CYLD及miR-454表达对于直肠癌的诊断及病情进展、预后的评估均具有重要的参考价值.

目的 观察Sema3A对小鼠原代视网膜神经节细胞(RGCs)轴突生长的作用. 方法 生后24 h内的C57BL/6小鼠,颈椎脱臼法处死后取出眼球,剥离出视网膜组织原代培养RGCs,采用Brn3a免疫荧光染色法鉴定RGCs.将培养7d的RGCs分为对照组、0.05 μg/ml Sema3A组、0.10 μg/ml Sema3A组和0.50 μg/ml Sema3A组,分别加入相应质量浓度Sema3A处理2h,采用免疫荧光染色法检测各组细胞中神经元特异性标志物β3-tubulin、树突标志物MAP2的表达,β3-tubulin+/MAP2-鉴定为轴突,采用Image J软件测量轴突长度;选取0.1μg/ml Sema3A处理组和对照组细胞,分别于处理后0.5、1和2h测量轴突长度.根据不同药物处理方式将细胞分为对照组、Sema3A处理组、Y27632处理组和联合处理组,观察并比较各组轴突长度变化.结果 原代培养的细胞Brn3a呈阳性表达,鉴定为RGCs.培养后7d,RGCs趋于成熟,有完整、细长的神经元突起,可见分支.0.05 μg/ml Sema3A、0.10 μg/ml Sema3A、0.50 μg/ml Sema3A组轴突长度分别为(69.35±1.49)、(60.45±1.42)和(93.65±1.86) μm,均明显短于对照组的(109.80±2.29) μm,差异均有统计学意义(均P＜0.01).0.1μg/ml Sema3A组1h和2h后细胞轴突长度分别为(165.00±4.39)μm和(97.63±2.79) μm,明显短于相应时间对照组的(210.40±4.44) μm和(199.00±4.36) μm,差异均有统计学意义(均P＜0.01);对照组、Sema3A处理组、混合处理组和Y27632处理组轴突长度总体比较,差异有统计学意义(F=142.50,P＜0.01),其中Sema3A处理组RGCs轴突长度明显短于对照组和混合处理组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 Sema3A对小鼠原代RGCs轴突生长具有抑制作用,ROCK信号通路抑制剂可减轻Sema3A对轴突生长的抑制作用.

目的 探讨SEMA3A和SEMA3F在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达,及两者与脉管生成的关系.方法 采用免疫组化方法检测SEMA3A和SEMA3F在72例TNBC中的表达,同时用CD34和D2-40标记血管和淋巴管,检测TNBC中微血管密度(MVD)和淋巴管密度(LVD).结果 SEMA3A低表达TNBC的淋巴结转移率高(P＜0.05)和TNM分期高(P＜0.05).SEMA3A的表达与MVD呈负相关关系(r=-0.376,P＜0.05).SEMA3F低表达TNBC的淋巴结转移率高(P＜0.05)和TNM分期高(P＜0.05)、复发率高(P＜0.05).SEMA3F的表达与LVD呈负相关关系(r=-0.371,P＜0.05).MVD升高与TNBC的淋巴结转移率高(P＜0.05)、TNM分期高(P＜0.05)、复发率高(P=0.05)密切相关.LVD升高与TNBC的淋巴结转移率高(P＜0.05)、TNM分期高(P=0.05)、复发率高(P=0.05)密切相关.结论 三阴性乳腺癌中SEMA3A在血管生成中起重要作用,SEMA3F在淋巴管生成中起重要作用.SEMA3A和SEMA3F与三阴性乳腺癌的侵袭、转移关系密切,或许能成为三阴性乳腺癌的新治疗靶点.

目的 分析原发性开角型青光眼(POAG)患者房水的蛋白质表达变化,探寻与疾病发生相关的生物学标志及潜在治疗靶点.方法 采用回顾性病例-对照研究设计.纳入2016年10月至2017年12月由天津医科大学眼科医院收治的行白内障手术的年龄相关性白内障患者10例10眼作为年龄相关性白内障组,行青光眼联合白内障手术的POAG合并白内障患者10例10眼作为POAG合并白内障组.术中借助手术通道用1号针头接1 ml针筒进入前房中部吸取约100μl房水.通过非标记定量蛋白质组学质谱分析技术分析房水中提取的蛋白,采用Maxquant significances A的方法进行差异显著性检验,以P<0.05、差异倍数>2的标准筛选得到2个组患者的差异蛋白,并将生物大数据通过GO功能、KEGG显著性富集分析对差异蛋白的功能及调控的信号通路加以注解.结果 本次蛋白组学分析共检测到97个差异蛋白,其中包括48个上调蛋白和49个下调蛋白.GO分析显著差异蛋白功能涉及诸多方面,其中与炎症反应有关的有脂多糖结合蛋白(LBP)、CD163、C-反应蛋白(CRP)和膜联蛋白A1(ANXA1);与氧化还原有关的蛋白有谷胱甘肽S转移酶P(GSTP1)和硫氧还原蛋白(TXN);与细胞黏附运动有关:软骨寡聚基质蛋白(COMP)、桥粒胶蛋白(DSC2)和层连蛋白(LAMB2);与纤维化有关的有原胶原蛋白(PLOD1)和固生蛋白(TNC);与神经生长有关:颤蛋白(RELN)、脑信号蛋白(SEMA3F)和轴突导向因子(SEMA4B);与代谢相关的蛋白有丙酮酸激酶(PKM)和羧肽酶N亚型2(CPN2)等.KEGG分析表明NrF2/ERK信号通路、TGF-β/NF-κB信号通路表达在2个组细胞间存在差异.结论 POAG患者房水中GSTP1、TXN表达显著降低,可能通过调控NrF2/ERK1/2及TGF-β/NF-κB信号通路,调节细胞黏附性和活性以及细胞外基质表达来参与疾病的发展.GSTP1、TXN可能成为潜在生物学标志及治疗靶点.

目的 探究肝性脑病(HE)大鼠大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中脑信号蛋白3A(Sema3A)及受体神经菌毛素(NRP-1)的表达变化及可能的意义.方法 SD大鼠40只随机分为4组:对照组、HE1 d、15 d、30 d组,每组各10只.胆管结扎并辅以乙酸铵灌胃的方法 制备慢性HE(C型)大鼠模型,进行行为学、神经病学改变的检测;ELISA检测大鼠血清中血氨及其他生化指标;HE染色观察大鼠肝脏和脑组织形态学变化;Real-time PCR检测各脑区Sema3A、NRP-1 mRNA的表达;免疫组化、Western Blot分别检测大脑皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A及NRP-1蛋白的表达变化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 4组间神经反射等级、血氨、HE等级均有统计学差异(F值分别为76.39、417.07、71.56,P值均<0.001),与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组神经反射得分、血氨、HE等级均明显升高(P值均<0.05).4组间TBA、Alb、TBil、AST、ALT、ALP比较差异均有统计学意义(F值分别为1022.61、171.56、685.18、421.01、675.20、2405.04,P值均<0.001),与对照组相比,HE 1 d、15 d、30 d组Alb水平明显降低(P<0.05),其余指标明显升高(P值均<0.05).病理学结果 显示,与对照组相比,造模后大鼠肝脏出现不同程度的变性坏死,炎细胞浸润,大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区体等部位观察到神经细胞不同程度的肿胀、破裂、排列紊乱等病理征象.4组间Sema3A、NRP-1 mRNA比较差异均有统计学意义(Sema3A mRNA:F值分别为273.83、158.84、103.59、128.90,P值均<0.001;mRNA:F值分别为88.78、173.02、156.44、289.09,P值均<0.001);与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A、NRP-1 mRNA相对表达量均较高(P值均<0.05).建模后Sema3A、NRP-1蛋白表达水平上调,免疫组化显示,HE组大鼠前额叶皮层和海马CA1、CA3、DG区Sema3A及NRP-1呈阳性染色.Western Blot显示,4组间大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区Sema3A、NRP-1蛋白表达差异均有统计学意义(Sema3A:F值分别为835.14、774.16、282.60、856.29,P值均<0.001;NRP-1:F值分别为876.59、472.48、402.36、207.47,P值均<0.001);与对照组相比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区内Sema3A、NRP-1蛋白表达均明显升高(P值均<0.05).结论 Sema3/NRP-1在慢性HE大鼠脑组织内表达上调,参与HE神经损伤的病理生理过程.