目的 分析外泌体微小RNA-877-5p(miR-877-5p)通过调控转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)轴诱导铁死亡对肝癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 检测正常肝细胞与肝癌细胞株中miR-877-5p表达量,并对MHCC97H细胞进行转染,分为空白组、miR-877-5p抑制剂组、miR-877-5p模拟物组,检测各组铁死亡相关因子Nrf2、HO-1表达量,观察并分析各组MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡情况.结果 与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞株中HEP3B、HCCLM3、HepG2、MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与肝癌细胞HEP3B、HCCLM3、HepG2相比,肝癌细胞MHCC97H mRNA表达量降低(P<0.05);与空白组相比,miR-877-5p抑制剂组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率降低(P<0.05),溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量升高(P<0.05),miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1表达量降低(P<0.05);与miR-877-5p抑制剂组相比,miR-877-5p模拟物组miR-877-5p mRNA表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4的表达量、增殖活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Nrf2、HO-1的表达量降低(P<0.05).结论 上调外泌体miR-877-5p可抑制Nrf2/HO-1轴的激活,促使铁死亡,抑制肝癌细胞增殖,加快癌细胞的凋亡速度.

JIB-04(Jumonji histone demethylase inihibitor,JIB-04)是一种泛组蛋白赖氨酸去甲基化酶抑制剂,可抑制多种肿瘤发生发展,但其具体机制仍不清楚.本文以肝癌细胞HepG2和Huh7为研究对象,探讨了 JIB-04对肝癌细胞的增殖影响,并揭示其可能的分子机制.CCK-8和EDU检测细胞增殖实验显示,JIB-04明显抑制肝癌细胞HepG2和Huh7活力,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度分别为0.7689 μmol/L及0.7392 μmol/L.流式细胞术检测细胞内ROS水平变化,结果显示,JIB-04可显著激活细胞内ROS的累积.通过谷胱甘肽(glutathione,GSH)检测试剂盒和脂质过氧化物检测试剂盒分别检测细胞内GSH和脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平发现,在2 μmol/L JIB-04处理下,HepG2和Huh7细胞内GSH分别下降88.4％和80.7％,而脂质过氧化物分别升高4.75倍和9.25倍.通过qRT-PCR和Western印迹分析发现,JIB-04显著降低铁死亡相关因子GPX4和SLC7A11的mRNA水平和蛋白质水平,同时铁死亡相关通路蛋白质MDM2明显下调,P53蛋白水平明显上调.机制研究显示,JIB-04可以使赖氨酸特异性去甲基化酶KDM4C的蛋白质水平下调约58％和51％.通过ChIP检测发现,在JIB-04处理肝癌细胞后MDM2基因启动子区域H3K9me3分别提高了 2.19倍和2.14倍,同时qRT-PCR证明,JIB-04处理肝癌细胞后MDM2 mRNA水平显著下调.综上所述,本研究初步揭示了 JIB-04可下调特异性去甲基化酶KDM4C的表达,进而影响MDM2基因启动子区域H3K9me3甲基化水平抑制MDM2基因表达,减少MDM2蛋白与P53蛋白结合,P53蛋白水平表达上调,同时,铁死亡相关蛋白质SLC7A11和GPX4的表达下调,导致细胞内GSH耗竭、ROS与脂质过氧化物积累,最终导致细胞发生铁死亡.

目的:探讨雄蚕益肾方含药血清对H2O2诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤后铁死亡的影响.方法:应用H2O2诱导小鼠TM3 睾丸间质细胞建立氧化应激损伤模型,将诱导成模的TM3 细胞随机分为模型组、雄蚕益肾方组、铁死亡抑制剂 Ferrostatin-1 组、Ferrostatin-1 联合雄蚕益肾方组,分别用空白血清、20%含药血清、2 μmol/L Ferrostatin-1、2 μmol/L Ferrostatin-1+20%含药血清干预,另设置对照组(正常TM3 细胞+空白血清).观察各组细胞形态,检测各组细胞分泌的睾酮、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7 成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)、脂肪酸辅酶A连接酶4(FACL4)、总铁离子及亚铁离子含量.结果:与模型组比较,对照组ROS、MDA、FACL4、总铁和亚铁离子表达均显著降低(P<0.05),睾酮、SOD、谷胱甘肽、FTH1、SLC7A11 及GPX4 表达均显著升高(P<0.05);雄蚕益肾方组能显著促进TM3 细胞分泌睾酮并上调TM3 细胞FTH1、SLC7A11、GPX4、GSH和SOD表达(P<0.05),显著下调ROS、MDA、FACL4、总铁离子和亚铁离子表达(P<0.05).结论:H2O2 暴露后可通过氧化应激诱导小鼠TM3 睾丸间质细胞发生铁死亡,雄蚕益肾方可能通过激活SLC7A11/GSH/GPX4 轴拮抗TM3 细胞氧化应激损伤及铁死亡,这可能是雄蚕益肾方治疗男性迟发性性腺功能减退症的潜在作用机制.

目的:探究竹节参总皂苷(TSPJ)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞铁死亡的作用及调控机制。方法:实验1：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ低剂量组、TSPJ高剂量组、二甲双胍组(Met)，每组各10只。实验2：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C组、TSPJ＋AMPK激动剂AICAR组，每组各10只。除对照组外，其余各组大鼠均采取腹腔注射链脲佐菌素构建DCM模型。各组大鼠给予对应药物干预8周后，检测各组大鼠体重及糖脂代谢水平；超声心动图检测大鼠心功能指标；酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平；苏木精-伊红(HE)染色和电镜观察心肌组织病理变化；试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛、活性氧簇(ROS)及Fe 2＋水平；Western印迹法检测心肌组织铁死亡、铁自噬以及AMPK/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/UNC-51样激酶1(mTOR/ULK1)信号通路相关蛋白表达。 结果:与对照组相比，DCM组大鼠左心室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、舒张早期与晚期血流速度峰值比值(E/A)均显著降低，舒张末期左心室内径(LVEDd)增加，血清LDH、cTnI、CK-MB升高，心肌组织SOD、GSH降低，丙二醛、ROS和Fe 2＋增加，转铁蛋白受体1(TFR1)、核受体共激活因子4(NCOA4)、LC3-II/LC3-I、Beclin-1、磷酸化AMPK及磷酸化ULK1表达水平升高，谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、磷酸化mTOR表达水平降低。与DCM组相比，各治疗组大鼠上述指标均得到显著改善。与TSPJ组相比，AMPK激动剂AICAR能够逆转TSPJ对DCM大鼠心肌细胞铁死亡及AMPK/mTOR/ULK1通路介导的铁自噬作用。 结论:TSPJ能够通过调控AMPK/mTOR/ULK1介导的铁自噬抑制DCM大鼠心肌细胞铁死亡，改善心肌损伤。

目的:探讨橙皮苷诱导慢性髓性白血病细胞系K562细胞发生铁死亡的作用及分子机制。方法:通过CCK-8、EDU-594、Transwell法检测橙皮苷对K562细胞活力、增殖和迁移的影响。采用流式细胞术检测K562细胞的凋亡率。采用C11-BODIPY和FerroOrange检测细胞中脂质过氧化和Fe 2+水平。通过Western blot法检测细胞中铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达水平。采用SLC7A11过表达质粒转染细胞后，同样检测脂质过氧化及Fe 2+水平。 结果:橙皮苷可呈剂量依赖性降低K562细胞活力，IC 50值为0.544 μmol/L，选取0.4、0.8 μmol/L的橙皮苷行后续实验。EDU-594、Transwell法和流式细胞术检测显示，0.4、0.8 μmol/L橙皮苷作用24 h后K562细胞增殖和迁移率明显降低，细胞凋亡率明显提高，与对照组比较差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。同时Western blot法检测显示，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，促凋亡蛋白Bax及Caspase-3表达升高。与对照组比较，橙皮苷可以提高细胞内脂质过氧化和Fe 2+水平（ P值均<0.05）。铁死亡抑制剂（Fer-1）与橙皮苷联合给药可以逆转橙皮苷对K562细胞的作用。0.8 μmol/L橙皮苷作用组铁死亡相关基因SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白水平明显降低（ P值均<0.05）。SLC7A11过表达可以抑制橙皮苷作用，减轻铁死亡。 结论:橙皮苷可通过调控SLC7A11/GPX4轴，促进K562细胞铁死亡。

目的:通过体外细胞模型，探讨蠲痹汤对骨关节炎（OA）的作用机制。方法:将ATDC5细胞分为4组：正常组、OA组、蠲痹汤组和Fer-1组。OA组加入10 ng/ml白细胞介素（IL）-1β诱导炎症杜尔伯科改良伊格尔（DMEM）培养基；蠲痹汤组加入IL-1β＋蠲痹汤诱导炎症DMEM培养基；Fer-1组加入IL-1β＋Fer-1诱导炎症DMEM培养基。进行蛋白质印迹法（Western blot）试验检测软骨细胞的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2），Collagen Ⅱ、Aggrecan、基质金属蛋白酶13（MMP-13）、p53、ACSL4、SLC7A11和GPX-4的表达，使用细胞免疫荧光染色检测GPX-4的表达。利用化学发光法检测软骨细胞的代谢产物丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）、Fe 2＋、线粒体内铁的含量。多组比较采用单因素方差分析。 结果:Fer-1组和蠲痹汤组的TNF-α（3.282±0.261、2.255±0.253）、iNOS（5.046±0.478、3.443±0.039）、COX-2（3.484±0.333、2.450±0.467）蛋白相对表达水平低于IL-1β组（4.384±0.601、6.863±0.637、4.812±0.496），差异有统计学意义（ t＝3.848、7.432、5.579、10.500、4.289、7.629， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的MMP-13（2.738±0.224、4.276±0.663）、p53（3.364±0.898、4.289±0.936）、ACSL4（2.897±0.767、2.776±0.594）蛋白相对表达水平低于IL-1β组（5.779±0.018、7.413±1.635、6.077±0.847），差异有统计学意义（ t＝10.640、5.258、4.752、3.666、6.048、6.279， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的Collagen Ⅱ（0.752±0.143、0.609±0.073）、Aggrecan（0.663±0.139、0.570±0.022）、SLC7A11（0.623±0.037、0.400±0.034）、GPX-4（0.686±0.041、0.537±0.065）蛋白相对表达水平高于IL-1β组（0.298±0.049、0.268±0.154、0.097±0.021、0.163±0.063），差异有统计学意义（ t＝4.661、3.895、4.631、3.538、23.700、13.660、12.890、9.226， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的GPX-4（15.476±2.519、12.133±0.703）荧光强度高于IL-1β组（5.141±0.153），差异有统计学意义（ t＝8.117、5.491， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的线粒体内铁（9.689±2.680、11.043±1.818）荧光强度低于IL-1β组（16.604±3.262），差异有统计学意义（ t＝3.675、2.955， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的MDA[（8.755±0.390）、（10.915±0.379） nmol/ml]、Fe 2＋[（4.200±0.041）、（5.189±0.083） nmol]含量低IL-1β组[（13.130±0.430） nmol/ml、（7.109±0.071） nmol]，差异有统计学意义（ t＝14.960、7.573、59.230、39.090， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的GSH[（7.215±0.382）、（6.988±1.246） μmol/g prot]含量高于IL-1β组[（4.826±0.426） μmol/g prot]，差异有统计学意义（ t＝4.240、3.838， P<0.05）。 结论:蠲痹汤通过调控SLC7A11-GSH-GPX4轴抑制软骨细胞铁死亡减轻炎性反应和细胞外基质降解。

目的 基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制.方法 60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型.将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5 mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14 d.观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O2)、亚铁离子(Fe2+)含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNA H19、miR-19b3p mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05).与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O2、Fe2+含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNA H19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O2、Fe2+含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNA H19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05).结论 归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关.

目的:探讨高糖培养对人肾小管上皮细胞HK-2 氧化应激的影响及其相关机制.方法:传代培养HK-2 细胞,并将细胞分为 4 组:对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L 葡萄糖+24.5 mmol/L 甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和高糖+Ferrostatin-1 组(5.5 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L Ferrostatin-1).采用CCK-8 法检测细胞的增殖活性;使用流式细胞术检测细胞凋亡情况;利用ROS和GSH试剂盒测定细胞内ROS和GSH水平;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测NRF2、SLC7A11、GPX4 蛋白表达水平;进行细胞线粒体荧光染色,观察并检测各组细胞的线粒体荧光密度.结果:与对照组相比,高糖可以抑制HK-2 细胞的增殖活性(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),升高细胞内ROS水平(P<0.05),降低GSH水平(P<0.05),下调NRF2、SLC7A11(System X(c))、GPX4 蛋白表达(P<0.01),降低线粒体荧光光密度(P<0.01).Ferrostatin-1 干预后,高糖介导的细胞增殖抑制、凋亡促进、升高 ROS、降低 GSH 等效应均被削弱(P<0.05),同时NRF2、GPX4 蛋白表达水平上调(P<0.01),线粒体荧光光密度增加(P<0.01).结论:高糖可显著抑制人肾小管上皮细胞HK-2 的增殖活性,其机制可能与抑制NRF2 信号轴相关蛋白的表达,促进细胞发生氧化应激,诱导线粒体损伤有关;而铁凋亡抑制剂Ferrostatin-1 能削弱高糖对细胞产生的上述氧化损伤作用,提示铁凋亡参与了高糖诱导HK-2 细胞的损伤.

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制.方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10 μmol/L)组、TPL(10 μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20 μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20 μmol/L)组、TPL(10 μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20 μmol/L)组.qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系.结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05).TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05).过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05).miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05).miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05).结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关.

目的 探讨伊曲康唑对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞铁死亡的诱导作用及其可能机制.方法 (1)将MDA-MB-231细胞和BT-549细胞分别分为对照组及不同浓度药物组,分别加入完全培养基、不同浓度(2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L)的伊曲康唑处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,并计算伊曲康唑的半数抑制浓度(IC50).(2)将MDA-MB-231细胞和BT-549细胞分为对照组(加入完全培养基)、伊曲康唑组(5 μmol/L的伊曲康唑)、伊曲康唑+铁死亡抑制剂组(分别加入5 μmol/L的伊曲康唑和Ferrostatin-1)与铁死亡抑制剂组(加入5 μmol/L的Ferrostatin-1).检测对照组和伊曲康唑组两种细胞的脂质过氧化物水平和谷胱甘肽水平;检测4组细胞活性,以及溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平.结果 (1)MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的活性随伊曲康唑浓度的增加而降低,伊曲康唑对MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的IC50分别为4.648 μmol/L和4.612 μmol/L.(2)伊曲康唑组MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的谷胱甘肽水平较对照组降低,脂质过氧化物水平较对照组升高(P<0.05).(3)与对照组比较,伊曲康唑组MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的活性、SLC7A11及GPX4蛋白表达水平降低(P<0.05);与伊曲康唑组比较,伊曲康唑+铁死亡抑制剂组MDA-MB-231细胞和BT-549细胞的活性、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平升高(P<0.05).结论 伊曲康唑可能通过调节SLC7A11/GPX4轴来诱导细胞铁死亡,从而抑制TNBC细胞的增殖.