目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）牛磺酸上调基因1（TUG1）通过调控自噬对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及作用机制。方法:构建放射抵抗的宫颈癌细胞株HeLa/IR和SiHa/IR。用细胞克隆形成实验评估HeLa/IR和SiHa/IR细胞的放射敏感性；实时反转录PCR（RT-qPCR）检测各组细胞中lncRNA TUG1的表达；蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞中自噬蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅱ/LC3Ⅰ、p62的表达。将NC-siRNA、TUG1-siRNA、TUG1-siRNA+雷帕霉素（自噬激活剂）转染至HeLa/IR和SiHa/IR细胞，分别命名为NC-siRNA组、TUG1-siRNA组、TUG1-siRNA+雷帕霉素组。用RT-qPCR检测lncRNA TUG1的转染效率；Western blot检测沉默lncRNA TUG1对自噬蛋白表达的影响；流式细胞术分别检测沉默lncRNA TUG1对HeLa/IR和SiHa/IR细胞增殖能力和凋亡的影响。采用 t检验分析两组之间的差异，单因素方差分析进行多组间的比较。 结果:与HeLa、SiHa细胞比较，HeLa/IR、SiHa/IR细胞的存活分数显著升高，细胞中lncRNA TUG1的表达均显著升高，自噬蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均明显升高，p62蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与NC-siRNA组比较，TUG1-siRNA组HeLa/IR、SiHa/IR细胞中lncRNA TUG1的表达、细胞活力明显降低，细胞凋亡率明显升高，Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达明显降低，p62蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与TUG1-siRNA组比较，TUG1-siRNA+雷帕霉素组HeLa/IR细胞中Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均明显升高，p62蛋白表达明显降低，细胞活力明显降低，细胞凋亡率明显升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:沉默lncRNA TUG1可通过调节自噬增强宫颈癌细胞的放射敏感性。

目的:探讨miR-3607-3p对宫颈癌细胞的恶性表型的作用及相关作用机制。方法:OncoLnc生物信息学网站分析miR-3607-3p的表达与宫颈癌患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常宫颈上皮细胞(H8)和宫颈癌细胞系(Hela、HCC94、SiHa、C33A)中miR-3607-3p的表达情况。SiHa细胞体外转染阴性对照核苷酸序列为阴性对照(NC)组，转染miR-3607-3p模拟序列为miR-3607-3p组。qRT-PCR检测转染后的SiHa细胞中miR-3607-3p表达变化。采用CCK-8法和划痕实验检测转染前后SiHa细胞的恶性生物学行为变化。qRT-PCR和Western blot检测转染前后肌动蛋白结合蛋白2(PFN2)基因表达变化，双荧光素酶报告基因实验检测miR-3607-3p与PFN2的靶向关系。结果:miR-3607-3p表达水平高的宫颈癌患者生存期显著长于miR-3607-3p低表达患者( P<0.01)。与H8细胞相比，miR-3607-3p在人宫颈癌细胞系中异常低表达( P<0.05)，其中SiHa细胞系中表达最低( P<0.01)。NC组和miR-3607-3p组miR-3607-3p表达分别为(1.04±0.31)和(9.28±1.76)，转染miR-3607-3p模拟序列后SiHa细胞miR-3607-3p表达水平明显高于NC组( P<0.01)，增殖活性和划痕愈合率明显低于NC组(均 P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-3607-3p直接靶向结合PFN2( P<0.01)。qRT-PCR和Western blot结果显示，miR-3607-3p组的PFN2 mRNA和蛋白表达均低于NC组，增殖蛋白CDK3、CDK2表达低于NC组，上皮表型相关蛋白Claudin-1、ZO-1表达高于NC组(均 P<0.01)。 结论:miR-3607-3p与宫颈癌患者的生存期相关，上调miR-3607-3p表达可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移，其机制可能与靶向抑制PFN2有关。

目的:观察宫颈癌Siha细胞在临床常规分割放疗模式的电离辐射诱导后上皮间质转化(EMT)的发生情况，以及外泌体在此过程中的作用。方法:利用临床常规分割外照射(6 MV-X射线，50 Gy/25次)模式的电离辐射处理宫颈鳞癌细胞系Siha，通过形态学观察、EMT标志物检测和Transwell小室实验评价Siha细胞EMT的发生；分离纯化细胞上清液中外泌体，利用透射电镜、纳米粒径示踪分析(NTA)，观察其形态与分泌量；最后加入抑制剂GW4869(10 μmol/L)明确外泌体作用。结果:经电离辐射处理后，存活的Siha细胞发生了EMT现象：梭形间质样细胞出现，上皮标志物E-cadherin表达下调( t＝9.66， P<0.05)，间质标志物N-cadherin表达上调( t＝41.61， P<0.05)，Transwell穿膜和穿透基质胶的细胞数目增多( t＝6.11、13.22， P<0.05)。此外，辐射诱导后，Siha细胞外泌体分泌增加( t＝7.51， P<0.05)，而GW4869负性调控后，其细胞外泌体的分泌随之减少( t＝7.28， P<0.05)，电离辐射诱导的EMT也发生了逆转。 结论:临床常规分割放疗模式的电离辐射可通过诱导外泌体的分泌促进宫颈癌Siha细胞上皮间质转化。

目的:探讨miRNA-5193（miR-5193）对子宫颈癌Caski细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定子宫颈癌细胞株C33A、SiHa、Caski和正常子宫颈细胞株Ect1/E6E7中miR-5193的表达水平。将Caski细胞分成对照组（不转染，正常培养）、miR-5193阴性对照（miR-NC）组（转染miR-NC模拟物）、miR-5193组（转染miR-5193模拟物）、miR-NC+顺铂组（10 μg/ml顺铂处理转染miR-NC模拟物的细胞）、miR-5193+顺铂组（10 μg/ml顺铂处理转染miR-5193模拟物的细胞）、miR-5193+顺铂+NC组（10 μg/ml顺铂处理共转染Foxp3阴性对照载体、miR-5193模拟物的细胞）、miR-5193+顺铂+Foxp3组（10 μg/ml顺铂处理共转染Foxp3过表达载体和miR-5193模拟物的细胞）。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖情况；流式细胞术PI单染法检测细胞周期，Annexin V- FITC/PI双染法检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测细胞CDK2、p27、C-caspase-3蛋白表达。应用生物信息学软件预测miR-5193靶基因，采用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果:子宫颈癌C33A、SiHa、Caski细胞中miR-5193相对表达量均低于正常子宫颈Ect1/E6E7细胞（0.56±0.06、0.41±0.03、0.23±0.02比1.00±0.10，均 P<0.05）。与对照组、miR-NC组比较，miR-5193组、miR-NC+顺铂组、miR-5193+顺铂组细胞增殖活性（吸光度值）降低（0.58±0.06、0.59±0.07比0.38±0.04、0.40±0.05、0.23±0.02，均 P<0.05），细胞凋亡率升高[（2.5±0.2）%、（2.7±0.3）%比（12.6±1.2）%、（11.9±1.5）%、（18.9±1.7）%，均 P<0.05]，G 0/G 1期细胞比例升高[（50.4±4.2）%、（51.3±6.3）%比（62.3±3.2）%、（61.9±5.8）%、（71.4±5.4）%，均 P<0.05]，p27、C-caspase-3蛋白表达水平升高，CDK2蛋白表达水平下降。软件预测miR-5193靶基因为Foxp3，并由荧光素酶报告系统确认。与miR-5193+顺铂+NC组相比，miR-5193+顺铂+Foxp3组细胞增殖活性（吸光度值）升高（0.24±0.03比0.65±0.05， t＝21.094， P<0.01），G 0/G 1期细胞比例降低[（71.0±6.4）%比（60.3±4.1）%， t＝4.196， P<0.01]，细胞凋亡率降低[（19.6±1.6）%比（11.5±1.2）%， t＝11.880， P<0.01]，细胞中p27、C-caspase-3蛋白表达水平下降，CDK2、Foxp3蛋白表达水平升高。 结论:体外miR-5193可能通过靶向抑制Foxp3基因提高子宫颈癌Caski细胞对顺铂的敏感性。

目的:研究岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞形态改变的影响。方法:用不同浓度的岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞进行处理，采用CCK8法检测SiHa细胞体外增殖情况和半抑制浓度(IC 50)。设置不做药物处理的对照组与药物浓度为IC 50值处理的实验组。Transwell小室迁移、侵袭实验分别检测实验组与对照组细胞体外迁移、侵袭能力的变化；激光共聚焦显微镜下观察实验组与对照组细胞体外凋亡形态变化；流式细胞术检测实验组与对照组细胞凋亡率。 结果:岗松总黄酮可抑制宫颈癌SiHa细胞增殖，具有浓度依赖性，作用48 h后其IC 50值为110.8 mg/L。迁移实验中对照组穿膜细胞数为(644.00±10.54)个，实验组穿膜细胞数为(266.00±5.57)个，差异有统计学意义( t＝54.942， P<0.001)。侵袭实验中对照组穿膜细胞数为(298.00±14.36)个，实验组穿膜细胞数为(85.00±8.62)个，差异有统计意义( t＝38.247， P<0.001)。激光共聚焦显微镜观察发现，实验组可见细胞膜皱缩失去原有的形态，细胞核呈现大小不等、不规则形态的碎片，核边集等典型的凋亡形态；对照组未见凋亡形态细胞。流式细胞术检测结果显示，对照组凋亡率为(2.95±1.36)%，实验组凋亡率为(27.54±1.94)%，差异有统计学意义( t＝-17.949， P<0.001)。 结论:岗松总黄酮对体外培养的宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭具有明显的抑制作用，并促进其凋亡。

目的:探讨hnRNP E1对HPV16早期基因E2、E6表达的调控及宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法:采用体外细胞实验方法，对HPV16阳性人宫颈鳞癌SiHa细胞株采用hnRNP E1cDNA质粒上调hnRNP E1表达，于上调前、后采用Real-time PCR和Western blot分别检测各组细胞HPV16 E2、E6 mRNA和蛋白表达水平，同时，应用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡。采用SPSS 22.0和Graphpad Prism 7.0软件进行相关资料分析。结果:随着转染时间的增加（24、48、72 h），hnRNP E1过表达组的SiHa细胞活性及处于增殖状态的细胞数逐渐减少（ P<0.05），而G0/G1期细胞比例增高，S、G2/M期细胞比例及增殖指数降低（ P<0.05），晚期凋亡率和细胞总凋亡率逐渐增加（ P<0.05）。hnRNP E1过表达组HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空质粒组，差异有统计学意义（ P<0.05），且随着HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平的降低，SiHa细胞增殖指数下降，而总凋亡率有增加趋势。3组间HPV16 E2 mRNA表达量差异无统计学意义（ P=0.427），HPV16 E2蛋白未被检测到。 结论:hnRNP E1可抑制HPV16 E6的转录和翻译，进而抑制宫颈癌细胞增殖，促使凋亡，hnRNP E1可作为抑制宫颈癌变的潜在靶标。但本研究未发现hnRNP E1与HPV16 E2在SiHa细胞中的关系。

目的:通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的 E6、 E7致癌基因，探索预防和治疗宫颈癌的新方法。 方法:以SiHa细胞系为研究对象，设计靶向其内整合的HPV16 E6和 E7基因的小引导RNA(small guide RNA，sgRNA)，将其克隆入CRISPR/Cas9质粒，并应用其将 E6、 E7基因敲除，随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果，并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。 结果:设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒，经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后，可以引发靶点DNA的突变，致使 E6和 E7基因密码子改变，无法正确表达。 E6、 E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降( t检验，pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比， P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比， P＝0.0007)，促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复，细胞的恶性度降低。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）RP13-349O20.2在子宫颈癌组织中的表达水平，及其体外对子宫颈癌细胞迁移、侵袭能力和化疗敏感性的影响及可能机制。方法:利用GEPIA.CANCER网站（数据更新时间2023年6月）分析RP13-349O20.2表达水平与253例子宫颈癌患者总生存的关系。回顾性收集2020年1月至2022年8月徐州医科大学附属滕州市中心人民医院40例子宫颈癌患者癌组织和癌旁组织（距离肿瘤边缘>2 cm），采用人正常子宫颈上皮细胞株H8和人子宫颈癌细胞株HCC94、C33A、Hela、HCC1106、SiHa进行体外细胞实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测子宫颈癌组织和癌旁组织、各细胞株中RP13-349O20.2的相对表达量。向RP13-349O20.2相对表达水平最高的C33A细胞分别转染RP13-349O20.2的小干扰RNA（siRNA）及其阴性对照序列的siRNA，分别为si-RP13-349O20.2组和si-Con组。采用划痕愈合实验检测两组C33A细胞的迁移能力，Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力，CCK-8法检测C33A细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性（以吸光度值表示细胞增殖能力，吸光度值越低，增殖能力越弱，则对药物敏感性越强）。双荧光素酶报告基因实验验证RP13-349O20.2和miRNA-493-5p（miR-493-5p）、miR-493-5p和Nectin-4的靶向关系。采用qRT-PCR检测两组C33A细胞miR-493-5p和Nectin-4 mRNA的相对表达量，蛋白质印迹法检测两组细胞Nectin-4蛋白和PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果:根据GEPIA.CANCER网站数据分析显示，RP13-349O20.2低表达患者的总生存较高表达患者好（ P<0.01）。40例子宫颈癌患者癌组织和癌旁组织中RP13-349O20.2相对表达量分别为4.04±0.32和1.18±0.14，差异有统计学意义（ t＝8.29， P<0.01）。与H8细胞比较，人子宫颈癌细胞株HCC94、C33A、Hela、HCC1106、SiHa细胞中RP13-349O20.2表达水平均高（均 P<0.01）。si-Con组和si-RP13-349O20.2组C33A细胞中RP13-349O20.2相对表达量分别为7.30±0.30和1.01±0.27，差异有统计学意义（ t＝15.62， P<0.01）。si-Con组和si-RP13-349O20.2组C33A细胞划痕抑制率分别为（32±9）%和（75±6）%（ t＝3.97， P<0.01），侵袭细胞数分别为（106±12）个和（36±8）个（ t＝4.79， P<0.01）。在5、10、20、40、80 μmol/L 5-氟尿嘧啶作用24 h后，si-RP13-349O20.2组C33A细胞吸光度值均低于si-Con组。双荧光素酶报告基因实验证实P13-349O20.2与miR-493-5p存在靶向关系（ P<0.01），miR-493-5p与Nectin-4存在靶向关系（ P<0.01）。si-Con组和si-RP13-349O20.2组C33A细胞miR-493-5p的相对表达量分别为1.02±0.13和5.48±0.85（ t＝5.21， P<0.01），Nectin-4 mRNA的相对表达量分别为5.65±0.33和0.99±0.34 （ t＝9.87， P<0.01）。si-RP13-349O20.2组C33A细胞中Nectin-4蛋白表达水平较si-Con组低（ t＝9.21， P＝0.001），PI3K-AKT信号通路蛋白p-STAT3、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平均低于si-Con组（均 P<0.01）。 结论:子宫颈癌组织中RP13-349O20.2水平较高，且其高表达可能预示患者预后不良。体外干扰RP13-349O20.2表达能够抑制子宫颈癌细胞迁移、侵袭能力，促进子宫颈癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性，其机制可能与miR-493-5p/Nectin-4信号通路和PI3K-AKT信号通路有关。

目的:探讨山柰酚通过调控circFBXW7对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:采用山柰酚低、中、高剂量（15、30、60 μmol/L）处理SiHa细胞24 h，未经处理的SiHa细胞为对照组。CCK-8检测山柰酚对SiHa细胞增殖的影响，Transwell检测山柰酚对SiHa细胞迁移和侵袭的影响，并采用实时荧光定量聚合酶链反应检测SiHa细胞中circFBXW7的表达量。pcDNA、pcDNA-circFBXW7分别转染至SiHa细胞，si-NC、si-circFBXW7分别转染至SiHa细胞后加入60 μmol/L山柰酚处理24 h，考察circFBXW7及其敲除circFBXW7对SiHa细胞增殖、迁移、侵袭的影响，并采用Western Blot检测 E-钙黏蛋白、 N-钙黏蛋白的表达水平。 结果:与对照组相比，山柰酚低、中、高剂量组的细胞增殖、迁移及侵袭能力均下降（均 P<0.05），且呈剂量相关性，circFBXW7的表达量升高（ P<0.05）。转染pcDNA-circFBXW7后，circFBXW7表达量升高（ P<0.05），同时促进山柰酚对SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭（均 P<0.05）；转染si-circFBXW7后，circFBXW7表达量降低（ P<0.05），同时抑制山柰酚对SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭（均 P<0.05）可减弱增殖、迁移及侵袭的抑制作用。与对照组相比，山柰酚低、中、高剂量组的 E-钙黏蛋白表达上调， N-钙黏蛋白表达下调（均 P<0.05），且呈剂量相关性；SiHa细胞转染pcDNA-circFBXW7后， E-钙黏蛋白的表达上升， N-钙黏蛋白的表达降低（均 P<0.05）；转染si-circFBXW7后， E-钙黏蛋白的表达降低， N-钙黏蛋白的表达上升（均 P<0.05）。 结论:山柰酚可通过促进circFBXW7表达而减弱SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

目的:构建人乳头状瘤病毒（HPV）16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞（KC），为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法:两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞（HFK），利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染HPV16 E6/E7基因，连续培养30代以上，筛选出永生化KC，分为3组：①空白对照组：传代2次的原代HFK；②实验组：传代2次的原代HFK感染LV5-HPV16 E6/E7，感染细胞记录为A0代，感染后以传代次数记录（A1、A2……）；③阳性对照组：HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹实验分别检测空白对照组、实验组、阳性对照组HPV16 E6/E7 mRNA、蛋白及CK14蛋白的表达，CCK-8及Transwell Insert方法检测细胞的增殖及侵袭能力。裸鼠致瘤实验检测实验组A30、阳性对照组SiHa细胞的致瘤能力。结果:成功分离原代HFK。LV5-HPV16 E6/E7重组质粒感染原代HFK后，空白对照组细胞无荧光表达，连续传代后出现衰老表现，实验组A30细胞体积、形态较原代HFK无明显变化，且荧光表达率为100%。与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E6 mRNA表达水平显著升高（ t值分别为7.12、8.07、6.53、5.66； P值分别< 0.001、< 0.001、= 0.001、= 0.005）；与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E7 mRNA表达水平也显著升高（ t值分别为3.20、4.29、3.75、4.22； P值分别为0.024、0.008、0.013、0.014）。空白对照组未见HPV16 E6/E7蛋白的表达，而A30及SiHa细胞可见HPV16 E6/E7蛋白的表达。CCK-8实验显示，实验组A10、A20、A30细胞增殖水平显著高于空白对照组（ t值分别为6.49、7.55、9.43； P值分别为0.003、0.002、0.001），而A1的增殖水平与空白对照组比较，差异无统计学意义（ t = 2.40， P = 0.074）。Transwell Insert侵袭实验显示，A30不能穿过基底膜，SiHa细胞可穿过基底膜被染成蓝色。裸鼠接种A30细胞2个月后无肉眼可见肿瘤，组织学亦显示无肿瘤形成，裸鼠接种SiHa细胞后可于皮下形成肿瘤。 结论:通过采用慢病毒技术转染HPV16 E6/E7基因成功建立人永生化角质形成细胞，可作为HPV相关研究中的理想细胞模型。