目的:探讨转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)基因通过诱导程序性死亡因子配体1(PD-L1)表达,促进乳腺癌细胞免疫逃逸的作用机制.方法:qRT-PCR和Western blot法检测人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、SK-BR-3和正常乳腺上皮细胞系MCF10A中SOX2、PD-L1、T细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域分子3(TIM3)和核受体亚家族4A组成员1(NR4A1)的mRNA表达量及对应蛋白表达量.分别构建SOX2敲减质粒NC和si-SOX2并转染MDA-MB-231,与细胞因子诱导的杀伤细胞构建共培养体系,连续培养48h,MTT法检测细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测T细胞杀伤率,ELISA检测T细胞活化标志物IL-2和IFN-γ,qRT-PCR检测T细胞耗竭标志物PD-1、TIM3和NR4A1 mRNA表达量.结果:与MCF10A相比,MDA-MB-231与SK-BR-3中SOX2、PD-L1、TIM3、NR4A1的mRNA表达量及对应蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).与空白组和NC组相比,si-SOX2组SOX2 mRNA和PD-L1蛋白表达量明显下降,细胞增殖率显著下降,细胞凋亡率增加,T细胞杀伤率增加,IL-2和IFN-γ水平升高,PD-1、TIM3和NR4A1 mRNA表达量降低(P＜0.05).结论:SOX2基因可能通过诱导PD-L1高表达,进而促使乳腺癌细胞免疫逃逸的能力增强,沉默SOX2表达可以增强T细胞杀伤力,抑制肿瘤增殖,SOX2基因有望成为乳腺癌干预的重要分子靶点.

目的 探讨安罗替尼联合抗程序性死亡受体-1(抗PD-1)单抗通过抑制血管内皮生长因子/原癌基因(VEGF/c-Kit)调控Wnt/β-catenin通路来抑制肺腺癌的可能机制.方法 建立C57小鼠荷瘤模型,并分为阴性对照组、安罗替尼组、抗PD-1单抗组和安罗替尼联合抗PD-1单抗组,每组8只.连续给药25 d后,比较各组小鼠肿瘤体积的变化.采用基因富集分析(GSEA)探讨癌症基因图谱(TCGA)数据库中肺腺癌(LUAD)队列中c-Kit和VEGF富集的相关通路;采用CIBERSORTx分析c-Kit和VEGFR对22种免疫细胞浸润的影响;分析c-Kit和VEGFR与免疫相关分子的相关性.采用细胞转染敲低c-Kit表达并分组,对照组为正常LLC细胞,si-c-Kit组为siRNA敲低c-Kit表达,安罗替尼处理组为安罗替尼处理LLC细胞.采用Western Blot实验检测各组细胞c-Kit、Wnt1、β-catenin、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、PD-L1、c-Myc、c-Jun表达.结果 与阴性对照组比较,安罗替尼组、PD-1单抗组、安罗替尼联合PD-1单抗组均可抑制肿瘤的生长,差异有统计学意义(P＜0.05);与安罗替尼组、PD-1单抗组比较,安罗替尼联合PD-1单抗组可抑制肿瘤的生长,差异有统计学意义(P＜0.05).GSEA表明,IFN-γ通路富集在c-Kit低表达样本中,Wnt/β-catenin通路富集在c-Kit高表达样本中,血管生成及IL-6/JAK/STAT3通路富集在VEGFR高表达样本中,差异均有统计学意义(P＜0.05).CIBERSORTx分析发现,c-Kit高表达样本中有更少的抗肿瘤免疫细胞以及更多的免疫抑制细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).VEGFR低表达样本中有更多的抗肿瘤免疫细胞以及更少免疫抑制细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).c-Kit与颗粒酶A(GZMA)、颗粒酶B(GZMB)、IFN-γ等促免疫分子呈负相关(r＜0,P＜0.05),与CD274(PD-L1)、转化生长因子β(TGF-β)、T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域-3(TIM3)等免疫抑制分子呈正相关(r＞0,P＜0.05).VEGFR与GZMA、TNF-α、GZMB、IFN-γ等免疫促进分子均呈负相关(r＜0,P＜0.05),与CD274(即PD-Ll)、TIM3、PD-1、低氧诱导因子-1A(HIF1A)、淋巴细胞激活基因-3(LAG3)、TGF-β、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)等免疫抑制分子均呈正相关(r＞0,P＜0.05).Western Blot实验证实,安罗替尼或敲低c-Kit均抑制了 Wnt/β-catenin通路及下游分子,调控TNF-α相关分子的表达.结论 安罗替尼联合抗PD-1药物可以更好地抑制肿瘤生长,其可能机制是安罗替尼通过靶向c-Kit抑制Wnt/β-catenin通路调节免疫微环境,促进抗肿瘤免疫细胞浸润,有助于提高抗PD-1单抗抑制肿瘤生长的疗效.

目的:探讨超声造影定量分析联合血清甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、可溶性T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3(sTim-3)对原发性肝癌肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗疗效的预测价值.方法:选择2020年1月至2022年10月海军军医大学第二附属医院收治的原发性肝癌患者94例.行TACE治疗2个月,采用改良的实体瘤疗效评价标准评估患者疗效,根据不同疗效分为疗效不良组(n=32)和疗效良好组(n=62).所有患者均行超声造影检查,比较两组超声造影定量分析参数、治疗前血清AFP、VEGFR-2、sTim-3水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声造影定量分析参数联合血清AFP、VEGFR-2、sTim-3对原发性肝癌TACE治疗疗效的预测价值.结果:经TACE治疗,62例患者疗效良好、32例患者疗效不良,治疗有效率为65.96％.疗效良好组术前超声造影达峰时间、等增强开始时间显著长于疗效不良组(P＜0.05).疗效良好组术前血清AFP、VEG-FR-2、sTim-3水平显著低于疗效不良组(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,超声造影定量分析联合血清AFP、VEGFR-2、sTim-3对原发性肝癌TACE治疗疗效预测的曲线下面积(AUC)为0.950,灵敏度为84.85％,特异度为82.12％,高于各指标单独检测.结论:超声造影定量分析参数、血清AFP、VEGFR-2、sTim-3水平可预测原发性肝癌患者TACE治疗的疗效,且联合诊断的预测效能更高.

目的 通过流式细胞术检测T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3(Tim-3)在急性冠脉综合征(ACS)患者CD3+T细胞中的表达情况,并分析其与血清炎症指标的相关性.方法 选取ACS患者47例(ACS组),稳定型心绞痛共43例(SAP组)和健康者共40例(对照组),采用流式细胞法检测所有研究对象的外周血CD3+T细胞的Tim-3表达,分析Tim-3表达与患者临床特征及肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的关系.结果 ACS组的TNF-α、CRP和LDL-C显著高于SAP组和对照组(P<0.05),其中ACS组外周血CD3+T细胞中Tim-3表达率显著高于SAP组和对照组(P<0.05),SAP组外周血CD3+T细胞中Tim-3表达率显著高于对照组(P<0.05),心肌梗死患者中的CD3+T细胞中Tim-3的表达率显著高于不稳定型心绞痛患者(t=3.122,P=0.003),且不同狭窄程度患者的CD3+T细胞中Tim-3的表达率差异有统计学意义(P=0.004),重度狭窄的患者显著高于轻、中度患者(P<0.05),CD3+T细胞中Tim-3的表达率和TNF-α、CRP和LDL-C均呈正相关(P<0.001).结论 ACS患者中外周血CD3+T细胞高表达Tim-3,其与患者的病情和冠状动脉狭窄程度以及炎症反应具有相关性.

目的 纯化抗人T细胞免疫球蛋白粘蛋白3(TIM-3)单克隆抗体4E8,检测TIM-3单克隆抗体4E8的体外生物学功能.方法 利用单克隆抗体纯化技术获取4E8;用细胞转染技术获得表达人TIM-3分子的细胞系,流式细胞术检测4E8与人TIM-3分子结合的能力以及阻断人TIM-3融合蛋白(TIM-3 Ig-huFc)与凋亡细胞表面TIM-3配体磷脂酰丝氨酸(PtdSer)结合的能力;混合淋巴细胞反应(MLR)及ELISA法检测4E8对CD4+T细胞分泌IFN-γ的影响.结果 4E8可与人TIM-3分子结合,但不可阻断TIM-3与PtdSer的结合.与阴性对照组(958.3±153.2)相比,4E8(10μg/mL组:2563±150.3,3.33μg/mL组:1981±211.5)可增强MLR实验中CD4+T细胞分泌IFN-γ的能力,差异有统计学意义(P<0.05).并且与单独使用4E8(10μg/mL组:1981±211.5,0.33μg/mL组:844±76.2)相比,4E8与程序性死亡受体1(PD-1)抗体nivolumab联合使用(10μg/mL组:3049±80.5,0.33μg/mL组:1957±321.3)有协同作用,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功纯化出抗人TIM-3单克隆抗体4E8.4E8具有增强CD4+T细胞分泌IFN-γ的能力,但对CD4+T细胞的作用不依赖于阻断TIM-3与其配体PtdSer的结合.

脓毒血症是重症监护室(ICU)患者死亡的重要原因之一,主要是由潜在或明确的感染因素所导致的全身炎症反应综合征.其主要特征是大量的微生物进入血液循环,触发机体过度的炎症反应而导致的一些列炎症和免疫损伤.大量的研究证实,机体免疫抑制在脓毒血症所致的多器官功能衰竭过程中起着重要作用.Tim-3/Galectin-9共抑制通路是重要的免疫负调控信号通路,其在脓毒血症所致的免疫抑制中的调控作用的相关研究逐渐受到关注.本文简要阐述并总结了Tim-3/Galectin-9通路在脓毒血症所致的免疫抑制中所发挥的调控作用.

目的:探讨加减青蒿鳖甲汤对自发SLE动物模型MR/lpr小鼠肾组织IL-17、Tim-3的表达以及肾脏病变的影响.方法:24只MR/lpr小鼠分为3组,每组8只,模型组予生理盐水,中药干预的2组分别予高、低剂量的加减青蒿鳖甲汤水煎剂浓缩液.用药6周后,ELISA法检测小鼠血清ds-DNA抗体浓度;观察小鼠肾脏病理改变;免疫组化法检测肾组织IL-17、Tim-3的表达水平.结果:中药高剂量组组MRL/lpr小鼠血清ds-DNA抗体浓度显著低于模型组(P=0.001)和中药低剂量组(P=0.007);中药高剂量组(P=0.000)和中药低剂量组(P=0.000)小鼠狼疮肾炎肾组织活动性指数(AI)评分均显著低于模型组;中药高剂量组IL-17表达的肾髓质评分(P=0.028)及总评分(P=0.024)较模型组均有显著性差异;小鼠肾组织Tim-3表达水平评分在各组间无显著差异;小鼠肾组织IL-17表达水平总评分与血清ds-DNA抗体浓度呈正相关(r=0.5859,P=0.0026).结论:高剂量的加减青蒿鳖甲汤可能通过抑制IL-17在肾组织的表达而发挥抑制MRL/lpr小鼠肾损害、控制SLE病情进展的作用,但对MR/lpr小鼠肾组织Tim-3的表达无显著影响.

目的 探讨血清内皮素-1(ET-1)、T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子-3(TiM-3)表达水平联合彩超在先天性心脏病患者诊断中的应用价值.方法 回顾性选择2015年1月至2017年10月上海市健康医学院附属嘉定区中心医院收治的73例先天性心脏患者作为观察组,另选取同期检查的73例正常人作为对照组,两组均给予心脏彩超检查.比较两组对象血清ET-1及TiM-3水平差异,观察ET-1、TiM-3和心脏彩超单独检测和联合检测对先天性心脏病的诊断效能.结果 观察组血清ET-1和TiM-3水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);单独的ET-1、TiM-3、心脏彩超诊断先天性心脏患者,诊断特异度差异显著(P<0.05),心脏彩超诊断的特异度显著高于ET-1、TiM-3(P<0.05);ET-1与TiM-3水平检测联合心脏彩超诊断的灵敏度显著高于ET-1+彩超、TiM-3+彩超(P<0.05);ET-1、TiM-3和心脏彩超系列联合检测诊断的特异度显著高于IL-1+彩超、TiM-3+彩超(P<0.05),ET-1、TiM-3和心脏彩超系列联合检测的灵敏度显著低于平行联合检测(P<0.05),特异度显著高于平行联合检测(P<0.05).结论 血清ET-1、TiM-3表达水平检测联合心脏彩超对于先天性心脏病的诊断具有重要价值,与单项指标相比较,ET-1与TiM-3水平检测联合心脏彩超诊断先天性心脏病具有较高的灵敏度和特异度.

目的 了解系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清中T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3,Tim-3)水平表达情况,并探索其启动子区-1516G/T位点基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与深圳地区SLE患者之间的遗传易感性.方法 收集2015年3月～ 2018年11月来深圳市福田区风湿病专科医院就诊并确诊为SLE患者1 0 5例为研究组,并选择同期来医院体检的健康人群120名为对照组,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Tim-3含量,同时采用聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对Tim-3启动子区-1516G/T位点基因SNPs多态性进行分析.结果 SLE组患者血清中Tim-3水平为29.61±8.34pg/mL,明显高于对照组健康人群的13.97±4.28pg/mL,差异有统计学意义(t=3.0251,P＜0.05);SLE组患者Tim-3启动子区-1516G/T TT基因型和T等位基因检出率分别为18.10％和33.33％,明显高于对照组的5.83％和20.00％,差异有统计学意义(x2=3.0241-4.7265,P＜ 0.05);TT基因型SLE患者血清中Tim-3浓度为38.02±11.63pg/mL,明显高于GT基因型的31.24±9.06pg/mL和GG基因型的27.50±7.32pg/mL,差异有统计学意义(t=2.1954～2.8162,P＜0.05).结论 Tim-3水平在SLE患者血清中呈高度表达,尤其TT基因型SLE患者增加更为明显,且Tim-3启动子区1516G/T位点基因多态性变异与深圳地区SLE遗传易感性有关,其中TT基因型和T等位基因可能是本地区SLE患者发病的易感基因之一.

目的:探讨T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3(Tim-3)在早期自然流产中的作用及其与Th17/Treg细胞的关系.方法:选取2016年12月至2017年3月广州医科大学附属深圳沙井医院收治的30例早期自然流产患者作为研究组,另选取30例同期正常早孕自愿行人工流产者作为对照组.采集两组血液及子宫蜕膜,比较外周血单核细胞中Tim-3在CD4+T、CD4+T Th17、CD4+T Treg细胞上的表达水平及Th17/Treg Ratio,分析Tim-3与Th17/Treg细胞相关性,并比较两组外周血与子宫蜕膜Tim-3、白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)水平.结果:研究组外周血单核细胞中CD4+T Treg Tim-3低于对照组,CD4+T Tim-3、CD4+T Th17 Tim-3、Th17/Treg Ratio高于对照组(P<0.05);研究组Tim-3表达与Th17/Treg细胞呈正相关(r=0.898,P<0.05);研究组外周血Tim-3、IL-6、IL-17、TGF-β高于对照组(P<0.05);研究组子宫蜕膜Tim-3、IL-6、IL-17阳性表达率高于对照组(P<0.05);两组子宫蜕膜TGF-β阳性表达率无明显差异(P<0.05).结论:早期自然流产中Tim-3呈现异常表达状态,与Th17/Treg细胞失衡、相关细胞因子改变有关,与Th17/Treg Ratio呈正相关,Tim-3有望成为临床判断早期自然流产发生的特异性指标.