目的 研究D-半乳糖(D-galactose,D-gal)对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤以及淫羊藿素(icaritin,ICT)的改善作用机制.方法 首先将TM4细胞分为正常对照组、不同浓度D-gal处理组,Western blot检测TM4细胞连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin 和 Cx43)以及 ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平的变化;随后MTT筛选ICT药物浓度,并将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、D-gal处理+不同浓度ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平变化;分子对接研究ERα与ICT之间的相互作用,并预测两者之间的亲和力;最后将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、ERα抑制剂组、D-gal+ICT组、ERα抑制剂+ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化.结果 D-gal可浓度依赖性下调连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin 和 Cx43)以及 ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平;给予ICT药物后,上述蛋白表达水平均明显上调;ERα和ICT分子对接结果显示,ERα的Asp351氨基酸残基与ICT之间形成2个距离为3.4 ?和2.4 ?的氢键,且两者之间的对接结合能小于-7 kcal·mol-1;ERα抑制剂处理TM4细胞后,上述蛋白表达水平均明显下调,给予ICT后,上述蛋白表达水平未有明显变化.结论 D-gal可导致TM4细胞连接功能损伤,而ICT可改善其损伤,机制可能与上调ERα/FAK信号通路相关.

目的 基于网络药理学与体外实验探讨淫羊藿素抗非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体-酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药的分子机制.方法 利用PubChem和化合物靶点预测(Swiss Target Prediction)数据库下载淫羊藿素的简化分子线性输入规范(SMILES)号及作用靶点,通过人类基因(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库收集NSCLC耐药疾病靶点,将药物与疾病交集靶点导入STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)情况,运用Cytoscape 3.9.1软件内置插件计算节点拓扑参数值并筛选核心靶点,采用生物信息学分析平台(DAVID)数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)富集分析,构建"淫羊藿素-关键靶点-疾病-通路"图.使用Pymol和Autodock Tools 1.5.7软件进行分子对接.体外实验选用NSCLC耐药株PC9OR研究淫羊藿素对细胞增殖、集落形成、迁移、侵袭和凋亡能力的影响,并对富集得到的核心靶点及关键通路进行验证.结果 共筛选到淫羊藿素治疗NSCLC耐药的潜在作用靶点1 952个.通过PPI网络节点拓扑参数值筛选得到13个核心靶点,涉及蛋白激酶B(AKT1)、雌激素受体α(ESR1)、B淋巴细胞瘤2(BCL2)、表皮生长因子受体(EGFR)等基因.KEGG通路富集分析显示,癌症相关通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶 B(PI3K-AKT)信号通路、EGFR-TKIs耐药通路等可能在淫羊藿素治疗NSCLC EGFR-TKIs耐药的过程中起关键作用.GO富集分析显示,细胞功能涉及信号传导、凋亡过程的负调控、DNA转录的正调控等.分子对接显示淫羊藿素与各核心靶点均具有较强的结合能力.细胞实验表明,淫羊藿素抑制耐药细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭及促进细胞凋亡,并下调ESR1、AKT1、EGFR等mRNA表达水平以及PI3K-AKT通路磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的关键蛋白水平.结论 淫羊藿素可能通过多靶点调控PI3K-AKT通路抑制EGFR-TKIs耐药细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭及促进细胞凋亡,从而发挥抗NSCLC EGFR-TKIs耐药的作用.

目的:探讨淫羊藿素调控miRNA-329（miR-329）、miRNA-1236（miR-1236）抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法:采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞株HepG2，对照组仅加入二甲基亚砜（DMSO），培养36 h后采用CCK-8法检测淫羊藿素对HepG2细胞的半数抑制浓度（ IC50）及细胞增殖率。使用400 μg/L甲胎蛋白（AFP）处理HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h后，CCK-8法检测AFP对HepG2细胞增殖的影响。构建AFP-3'UTR荧光素酶报告质粒pmirGLO-AFP-3'UTR质粒，将pmirGLO空白载体质粒、pmirGLO-AFP-3'UTR质粒及miR-329或miR-1236的模拟物或抑制剂、相应的模拟物的对照质粒（NC）、相应的抑制剂的对照质粒（INC）分别共转染HepG2细胞，培养24 h后双荧光素酶报告基因检测miR-329和miR-1236对荧光素酶活性的影响。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测淫羊藿素对HepG2细胞AFP、miR-329和miR-1236表达的影响。使用miR-329、miR-1236的模拟物和抑制剂分别转染HepG2细胞，检测miR-329、miR-1236对AFP水平的影响。 结果:2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组细胞增殖率分别为（80.4±2.3）%、（73.2±1.6）%、（51.7±3.3）%、（38.2±4.6）%、（29.5±4.3）%和（94.0±2.9）%，差异有统计学意义（ F＝75.65， P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组HepG2细胞增殖率分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。淫羊藿素对HepG2细胞的 IC50为10 μmol/L。2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组AFP mRNA的相对表达量分别为0.83±0.06、0.69±0.02、0.53±0.07、0.45±0.01、0.33±0.07和1.00±0.01，差异有统计学意义（ F＝42.67， P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组AFP mRNA的相对表达量分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。400 μg/L AFP作用HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h，细胞增殖率分别为（102±5）%、（138±13）%、（186±24）%、（260±12）%、（311±15）%、（348±25）%，差异有统计学意义（ F＝27.483， P<0.01）；AFP作用不同时间分别与0 h细胞增殖率比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。与对照组比较，不同浓度淫羊藿素均能够促进miR-329和miR-1236表达（均 P<0.01）。miR-329和miR-1236模拟物与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均降低了约40%；miR-329、miR-1236抑制剂与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均增加约1.5倍。miR-329和miR-1236均可降低AFP蛋白和mRNA的表达水平（均 P<0.05）。 结论:淫羊藿素体外通过增加miR-329和miR-1236表达，促进miR-329、miR-1236与AFP-3'UTR的结合，抑制AFP mRNA的稳定性和翻译活性，抑制AFP表达，从而抑制肝癌细胞增殖。

目的:研究淫羊藿素(Icaritin)对儿童复发急性淋巴细胞白血病697细胞的抗白血病效应，并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养697细胞，分为对照组和淫羊藿素组(5、10、20 μmol/L)。采用CCK8法检测淫羊藿素对697细胞的增殖抑制作用，采用Hochest33258染色和流式细胞检测法检测淫羊藿素对697细胞的凋亡诱导作用；应用Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyt-C和Caspase3蛋白的表达。结果:淫羊藿素在5～20 μmol/L浓度范围内作用24～72 h对697细胞有增殖抑制作用，这种作用呈剂量和时间依赖关系( r＝0.76， r＝0.89)；淫羊藿素在5～20 μmol/L浓度范围内作用48 h对697细胞有凋亡诱导作用( P<0.05)；10、20 μmol/L淫羊藿素作用697细胞48 h后，697细胞Bcl-2蛋白的表达显著减少( P<0.05)，而Bax，Cyt-C和Caspase3裂解片段等蛋白表达显著增高( P<0.05)。 结论:淫羊藿素可通过抑制697细胞增殖及诱导其凋亡而发挥抗白血病效应，其机制可能通过上调促凋亡蛋白Bax、Cyt-C和下调抗凋亡Bcl-2而诱导697细胞凋亡。

目的:探讨在放射性膀胱炎模型中淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)对膀胱的保护作用和机制。方法:2021年7月至2022年3月取10周龄SD雄性大鼠18只，采用随机数字表法分为对照组、模型组、治疗组，每组各6例。模型组和治疗组予单一剂量为20 Gy的X线盆腔区域辐照，照射后24 h，治疗组予ICAⅡ 4.5 mg/(kg·d)灌胃，对照组和模型组予相同体积的溶剂(10%无水乙醇、20%异丙醇、30%聚乙二醇和40%去离子水的混合物)灌胃，连续4周，药物洗脱1周。采用多导电生理仪检测3组大鼠的膀胱容量和膀胱漏尿点压力，评估膀胱功能。取3组大鼠的膀胱标本行HE染色、Masson染色、ELISA、TUNEL法和蛋白质印迹法检测，比较3组大鼠膀胱组织的病理变化(膀胱黏膜厚度、平滑肌与胶原纤维的比值)、氧化应激水平(超氧化物歧化酶SOD、丙二醛)、细胞凋亡率、炎症因子(IL-6、NF-kB)和抗氧化应激信号通路因子(Nrf2、HO-1)蛋白表达量的变化。结果:建模4周后，模型组的膀胱容量[(1.01±0.12)ml与(1.58±0.21)ml， P＝0.001]、膀胱漏尿点压力[(38.79±4.12)cmH 2O(1 cmH 2O＝0.098 kPa)与(60.59±3.81)cmH 2O， P＝0.001]、膀胱壁平滑肌与胶原纤维比值[1.78±0.17与3.15±0.57， P＝0.001]、SOD[(6.31±0.73)U/mg与(14.67±1.04)U/mg， P＝0.001]低于对照组，差异均有统计学意义。模型组的膀胱黏膜厚度[(47.33±1.78)μm与(20.83±2.33)μm， P＝0.001]、丙二醛[(1.01±0.13)nmol/mg与(0.49±0.03)nmol/mg， P＝0.001]、IL-6(0.87±0.11与0.33±0.10， P＝0.001)、NF-kB(0.71±0.14与0.29±0.07， P＝0.001)、细胞凋亡率[(11.60±3.04)%与(3.91±1.40)%， P＝0.007]高于对照组，差异均有统计学意义。治疗组的膀胱容量[(1.27±0.13)ml， P＝0.030]、膀胱漏尿点压力[(47.83±2.50)cmH 2O， P＝0.004]、平滑肌与胶原纤维比值(2.78±0.68， P＝0.015)、SOD [(10.48±0.85) U/mg， P＝0.001]高于模型组，膀胱黏膜厚度[(31.94±3.20)μm， P＝0.001]、丙二醛[(0.64±0.09)nmol/mg， P＝0.001]、IL-6(0.69±0.11， P＝0.035)、NF-kB(0.45±0.06， P＝0.002)、细胞凋亡率[(6.05±0.60)%， P＝0.030]低于模型组。模型组Nrf2蛋白表达量(0.73±0.08与0.58±0.11， P＝0.023)高于对照组，但下游抗氧化因子HO-1蛋白表达量差异无统计学意义(0.50±0.14与0.35±0.06， P＝0.060)。治疗组Nrf2蛋白表达量(0.88±0.03， P＝0.027)和HO-1蛋白表达量(0.68±0.07， P＝0.026)均高于模型组。 结论:ICAⅡ可减轻放射性膀胱炎损伤，其作用机制可能与抗氧化应激和减轻炎症反应有关。

该研究探索了淫羊藿苷诱导肝癌细胞铁死亡的机制.通过生物信息学方法筛选淫羊藿苷的潜在靶点;构建了蛋白-蛋白互作网络与通路富集,利用分子对接技术评估了淫羊藿苷与靶点的结合能力;通过预测患者生存率来构建一套临床预测模型;同时采用cell counting kit-8(CCK-8)、EdU和克隆形成实验检测肝癌细胞的活性和增殖情况;比色法试剂盒及BODIPY 581/591 C1荧光探针用来检测细胞内铁离子和脂质过氧化水平.采用RT-qPCR和Western blot检测GPX4、xCT、PPARG和FABP4的mRNA和蛋白水平,以确定这些铁死亡相关基因在淫羊藿苷效应中的表达变化.通过生物信息学分析筛选出的6个干预靶点AR、AURKA、PPARG、AKR1C3、ALB、NQO1构成一个风险评分系统,有助于评估肝癌患者生存预后.结合患者年龄和TNM分期,开发了 1个Nomogram临床预测模型,以预测肝癌患者1、3、5年的生存.实验研究结果发现,淫羊藿苷能有效地抑制肝癌细胞HepG2的活性和增殖,并能显著调节Fe2+、MDA、脂质过氧化ROS水平,降低GSH水平,揭示其潜在的诱导肝癌细胞铁死亡的能力.淫羊藿苷能降低GPX4和xCT的表达(P＜0.01),诱导肝癌细胞铁死亡,可能与抑制PPARG、FABP4有关(P＜0.01).综上,淫羊蕾苷通过PPARG/FABP4/GPX4通路,诱导肝癌细胞铁死亡,为利用中药淫羊蕾苷预防或治疗肝癌提供了实验基础.

卵巢癌是女性生殖系统三大癌症之一,其病死率位居妇科恶性肿瘤之首.淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效,临床常用于生殖系统疾病的治疗.本文通过综述国内外相关文献,发现淫羊藿主要活性成分淫羊藿苷、淫羊藿素和淫羊藿次苷Ⅱ,主要从促进细胞凋亡、影响细胞的侵袭和转移、阻滞细胞周期、诱导细胞自噬、促进细胞焦亡等5个方面发挥抗卵巢癌作用,可见淫羊藿可以通过多靶点、多途径治疗卵巢癌.

消化道肿瘤预后差且缺乏有效治疗药物,是导致人类死亡的主要原因之一.淫羊藿(黄檗科)作为补肾壮阳中药用药历史悠久,现代研究表明淫羊藿及其主要活性成分淫羊藿苷(Icaritin,ICA)具有多途径、多靶点的抗肿瘤特性,是有广泛应用前景的抗消化道肿瘤药物,其成药阿可拉定已在肝癌、宫颈癌患者中显示出良好疗效.通过梳理淫羊藿苷调节肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖和迁徙,调控肿瘤免疫等机制,综述近年来淫羊藿苷在消化系统肿瘤中的研究进展,以期加快淫羊藿苷药理作用分子机制的探索和发现,为临床新药研发提供参考依据.

目的 探究淫羊藿素(icaritin,ICA)抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 以Huh7肝癌细胞为研究对象并在体外培养;设置200、100、50、20、10、5、2、1、0.5 μmol/L不同浓度的ICA给药干预72 小时之后,采用0.5%结晶紫染色分析ICA对Huh7 肝癌细胞生存的影响;将Huh7 肝癌细胞给与ICA高(10 μmol/L)、中(5 μmol/L)、低(2.5 μmol/L)三个浓度,每个浓度设置三个复孔,通过克隆形成实验检测ICA对Huh7 肝癌细胞增殖能力的影响;Huh7 肝癌细胞给与ICA IC50 值浓度,对照孔及ICA给药孔分别在0、6、12、24 小时在倒置显微镜下拍照,通过细胞划痕分析ICA对肝癌细胞迁移能力的影响;并且用流式细胞术对细胞周期进行分析.另外,通过蛋白印迹对增殖相关蛋白,如增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated protein kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等蛋白的表达水平进行分析.结果 ICA可以明显抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,并且使肝癌细胞的细胞周期在 G1 期发生阻滞(P＜0.05).另外,研究发现 ICA 可以下调p-FAK及其下游调节蛋白p-ERK、cyclin D1 以及p-Akt、p-mTOR、p-S6 的表达水平.结论 ICA可能通过调控FAK及下游ERK/cyclin D1 和Akt/mTOR信号通路从而抑制肝癌细胞的增殖生长.

目的 探索淫羊藿素对鼻咽癌细胞放射增敏作用以及机制.方法 通过MTT实验和克隆形成实验,观察淫羊藿素对鼻咽癌HONE1和HNE1细胞增殖能力的影响,筛选出给药剂量以及照射剂量.建立鼻咽癌细胞γ射线照射模型以及淫羊藿素给药模型,将细胞分为空白组、淫羊藿素组、照射组和淫羊藿素与照射联合组.通过流式细胞术检测4组细胞活性氧(ROS)的变化、周期分布以及细胞凋亡情况,通过Western blot实验检测DNA损伤标志蛋白γ-H2AX、周期相关蛋白CDC25C、p-CDC25C、和CyclinB1以及铁死亡标志蛋白ACSL4和GXP4的表达情况.构建HONE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察淫羊藿素与放射联合对肿瘤组织的生长情况的影响.结果 淫羊藿素以剂量依赖性方式抑制鼻咽癌细胞活力,增强放射对鼻咽癌细胞增殖能力的抑制作用.流式细胞术及Western blot实验显示,淫羊藿素与放射联合后促进鼻咽癌细胞ROS增多,γ-H2AX表达上调(P<0.001).与单纯照射组相比,联合组会使鼻咽癌细胞发生G2期阻滞,CDC25C和CyclinB1表达下调,p-CDC25C表达上调(P<0.01).联合组会促进鼻咽癌细胞发生细胞凋亡,铁死亡蛋白ACSL4表达上调而GXP4表达下调(P<0.001).与空白组相比,其余3组的肿瘤生长速度明显减慢.与照射组相比,联合组肿瘤生长速度减慢,瘤体重量下降(P<0.001).结论 淫羊藿素可在体内、体外均增强鼻咽癌对放射的敏感性,可能主要是通过增强细胞活性氧促进鼻咽癌细胞发生铁死亡来达到放射增敏的作用.