目的:观察比伐芦定对急性冠脉综合征(ACS)经皮冠状动脉介入术(PCI)术病人凝血功能、心肌梗死溶栓试验(TIMI)血流分级及心肌缺血标志物的影响.方法:选取2020年7月—2022年7月青岛市胶州中心医院收治的拟行PCI术的ACS病人,按照围术期抗凝用药方案不同分为肝素组(给予肝素抗凝)和比伐芦定组(给予比伐芦定抗凝),经倾向性匹配评分(卡钳值0.02)筛选出基线资料均衡可比病人,两组各纳入60例病人,比较两组活化凝血时间(ACT)值、TIMI血流分级及术后出血情况;比较两组术前、术后24 h凝血功能指标[促凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)及纤维蛋白原(FIB)]、心肌缺血标志物[肌钙蛋白T(cTnT)、缺血修饰白蛋白(IMA)和血清miR-204];比较两组术前、术后4周心脏功能指标[左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室舒张末容积(LVEDV)和左房直径(LA)]变化以及随访1年内主要心血管不良事件(MACE)发生率.结果:注射药物后5 min、术后即刻、停止注射后2 h,比伐芦定组ACT值明显高于肝素组(P＜0.05);比伐芦定组术后出血发生率为3.33％,低于肝素组的13.33％(P＜0.05);术后24 h,两组APTT、TT、PT水平明显延长(P＜0.05),FIB水平明显降低(P＜0.05),且比伐芦定组APTT、TT、PT较肝素组延长(P＜0.05),FIB水平低于对照组(P＜0.05).术后即刻、术后7 d,比伐芦定组TIMI血流分级优于肝素组(P＜0.05);术后24 h,两组cTnT、IMA水平均明显降低(P＜0.05),miR-204水平明显升高(P＜0.05),且比伐芦定组改善程度明显优于肝素组(P＜0.05);术后4周,两组病人LVEF水平均明显升高(P＜0.05),LVEDD、LVEDV、LA水平均明显降低(P＜0.05),且比伐芦定组改善程度明显优于肝素组(P＜0.05).术后1年,比伐芦定组不良心血管事件(MACE)发生率为11.67％,低于肝素组的23.33％,但两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:比伐芦定应用于ACS病人PCI治疗,可明显降低病人凝血功能,促进冠状动脉血流,改善心肌缺血状况及心脏功能,预后良好.

目的:构建小鼠miR-204过表达重组慢病毒载体，并在二氧化硅（SiO 2）诱导的小鼠肺上皮细胞（MLE-12细胞）中验证miR-204与DVL3的靶向调控作用。 方法:于2019年10月，从小鼠基因组中应用聚合酶链式反应（PCR）法扩增出pre-miR-204基因，测序后将扩增产物克隆到pLenti-CMV-EGFP慢病毒载体，通过PCR筛选及测序对阳性克隆进行鉴定。将miR-204过表达慢病毒载体转染至293T细胞，进行慢病毒的包装和滴度测定，研究分为SiO 2对照组、病毒对照组及miR-204病毒组，实时荧光PCR检测miR-204和DVL3基因的表达。 结果:构建miR-204慢病毒表达载体Lv-miR-204-5p经PCR和测序鉴定正确，并获得滴度为9.57×10 8 IU/ml的病毒稀释液；实时荧光PCR检测结果显示，miR-204病毒组MLE-12细胞中miR-204基因的表达高于SiO 2对照组和病毒对照组，DVL3基因的表达低于SiO 2对照组和病毒对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:miR-204过表达慢病毒载体可能在SiO 2诱导的MLE-12细胞中抑制DVL3基因的表达。

目的:探讨希佩尔-林道(VHL)腺苷到肌苷编辑(ATIE)与人表皮生长因子受体2阳性(Her-2 +)乳腺癌患者预后的关系及其机制。 方法:基于癌症基因组图谱数据库筛选与Her-2 +乳腺癌患者预后关联的VHL ATIE。随机选取2014年至2019年广东省妇幼保健院相关患者81例，直接测序法检测ATIE位点的水平。采用荧光定量聚合酶链反应和蛋白印记法检测VHL表达。细胞计数试剂盒检测乳腺癌细胞耐药的半数抑制浓度(IC 50)。生存分析采用Cox回归，组间比较采用 t检验和方差分析，相关分析采用Spearman等级相关检验。 结果:数据库分析显示VHL转录本3996位腺苷到肌苷编辑(c.A3996I； HR＝3.612，95% CI＝1.093~11.940， P<0.05)、c.A3914I( HR＝4.985，95% CI＝1.442~17.230， P<0.05)与Her-2 +乳腺癌患者预后显著相关。直接测序法证实c.A3996I真实存在，低编辑患者组的死亡风险高于高编辑组( HR＝3.980，95% CI＝1.075~14.740， P<0.05)，且淋巴结转移2/3期患者组c.A3996I的编辑水平显著低于淋巴结转移1期和无转移患者组[(9.923±5.741)%比(13.980±7.532)%和(17.820±9.424)%， F＝5.140， P<0.01]。该位点编辑水平与增殖细胞核抗原表达( r＝－0.282， P<0.05)呈负相关。c.A3996I编辑水平与VHL信使RNA( r＝0.406， P<0.05)和蛋白( r＝0.467， P<0.01)表达水平呈显著正相关，且在c.A3996I低编辑组，miR-143-5p与VHL的表达呈显著负相关( r＝－0.145， P<0.05)，但在高编辑组中两者无相关( r＝0.051， P>0.05)。并且，耐曲妥珠单抗乳腺癌细胞VHL的表达显著低于正常细胞(0.540±0.116比1.011±0.195， t＝4.159， P<0.01)，未敲低VHL的乳腺癌细胞IC 50低于敲低组(5.489 μg/ml比22.120 μg/ml， F＝22.440， P<0.01)，且敲低VHL的乳腺癌细胞迁移能力显著上升(1 634±204比1 140±252， t＝3.049， P<0.05)。 结论:c.A3996I编辑可抑制VHL表达及其功能而影响Her-2 +乳腺癌患者预后。

目的:探讨氟暴露对小鼠海马神经元细胞（HT22细胞）微小核糖核酸（microRNA，miRNA，miR）-204、脑源性神经营养因子（BDNF）、酪氨酸激酶B（TrkB）表达的影响。方法:将HT22细胞暴露于0（对照）、2、4、6、8、10 mg/L氟化钠（NaF）。培养24 h后，CCK-8法检测细胞活性，根据细胞存活率结果，选取0.0（对照）、2.5、5.0、10.0 mg/L NaF，作用于未转染和转染（加入miR-204激动剂）的HT22细胞24 h，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）法分别检测细胞中miR-204表达，BDNF、TrkB mRNA和蛋白表达。结果:与对照组比较，各染氟组细胞存活率降低（ P均< 0.01）。未转染细胞中，与对照组比较，miR-204表达升高（ P < 0.05或< 0.01）；5.0、10.0 mg/L染氟组BDNF mRNA表达降低（ P均< 0.01），各染毒组BDNF蛋白表达降低（ P < 0.05或< 0.01）；各染毒组TrkB mRNA表达降低（ P < 0.05或< 0.01），5.0、10.0 mg/L染氟组TrkB蛋白表达降低（ P均< 0.01）。转染细胞中，与对照组比较，各染毒组miR-204表达升高（ P均< 0.01），BDNF、TrkB mRNA和蛋白表达下降（ P均< 0.01）。细胞存活率与染氟浓度呈负相关（ r = - 0.989， P < 0.01）；染氟浓度与BDNF、TrkB mRNA、蛋白表达呈负相关（ r = - 0.746、- 0.853、- 0.889、- 0.827， P均< 0.01）；miR-204表达与染氟浓度呈正相关（ r = 0.889， P < 0.01），与BDNF、TrkB mRNA和蛋白表达呈负相关（ r = - 0.766、- 0.770，- 0.594、- 0.523， P均< 0.01）；TrkB mRNA和蛋白表达与BDNF mRNA和蛋白表达呈正相关（ r = 0.657、0.869， P均< 0.01）。 结论:氟降低HT22细胞活性，作用机制可能与上调miR-204表达后抑制了BDNF-TrkB通路有关。

目的:探讨微小RNA(miR)-204对糖尿病视网膜病变大鼠模型的保护作用及其机制。方法:30只SD大鼠随机数字表格法分为对照组、模型组和miR-204组，每组10只，其中miR-204组大鼠经尾静脉注射过表达miR-204的腺相关病毒；对照组和模型组大鼠注射等体积对照腺相关病毒。注射30 d后，模型组和miR-204组大鼠通过高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病视网膜病变模型。治疗4周后，分析3组大鼠视网膜血管通透性和视网膜厚度；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组大鼠外周血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析3组大鼠视网膜细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)分析3组大鼠视网膜组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:miR-204组大鼠视网膜组织miR-204表达水平(2.12±0.17)明显高于对照组和模型组miR-204表达水平(1.05±0.11、0.93±0.05)，差异有统计学意义( t＝16.480、21.130， P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜厚度[(147.99±9.09) μm]明显高于模型组[(126.63±9.15) μm]，差异有统计学意义( t＝5.236， P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜厚度[(15.41±2.39) μg/g]明显低于对照组[(27.61±1.87) μg/g]，差异有统计学意义( t＝12.770， P<0.05)。miR-204组大鼠血清炎性因子TNF-α和IL-6表达水平[(40.51±4.04)、(39.47±4.70) ng/ml]明显低于模型组[(77.54±7.55)、(54.63±4.27) ng/ml]，差异有统计学意义( t＝13.670、7.907， P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜细胞凋亡率[(8.78±0.81)%]明显低于模型组[(19.94±2.34)%]，差异有统计学意义( t＝14.222， P<0.05)。miR-204组大鼠视网膜组织Caspase-3和HMGB1蛋白表达水平(1.64±0.12、1.83±0.19)明显低于模型组(1.64±0.12、1.83±0.19)，差异有统计学意义( t＝6.719、8.409， P<0.05)。 结论:miR-204可显著抑制视网膜血管通透性，抑制炎症和细胞凋亡，可能与抑制HMGB1和细胞凋亡通路有关。

目的:探讨长链非编码RNA尿路上皮癌相关1(UCA1)基因对子宫内膜癌细胞增殖、迁移、凋亡和免疫逃逸的影响及其分子机制。方法:收集2017—2019年于河南省人民医院行子宫全部或部分切除的内膜样腺癌患者的子宫内膜癌组织和癌旁正常组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测UCA1和miR-204-5p的表达，采用细胞计数试剂盒8法、Transwell法、流式细胞术检测细胞增殖迁移和凋亡能力，双荧光素酶报告分析UCA1与miR-204-5p的靶关系。将HEC-1A-sh-NC或HEC-1A-sh-UCA1细胞与外周血单核细胞(PBMC)或细胞因子诱导的杀伤细胞进行体外共培养，探讨UCA1在免疫逃逸中的作用。结果:子宫内膜癌组织中UCA1的表达水平(17.08±0.84)高于癌旁正常子宫内膜组织(3.00±0.37)，miR-204-5p的表达水平(0.98±0.16)低于癌旁正常子宫内膜组织(2.00±0.20，均 P<0.05)。Pearson相关性分析显示，miR-204-5p的表达与UCA1的表达呈负相关( r＝－0.330， P＝0.030)。UCA1和miR-204-5p的表达与子宫内膜癌国际妇产科联盟分期、淋巴结转移及血管浸润有关(均 P<0.05)。sh-UCA1组细胞的吸光度( A)值(0.58±0.11)和细胞迁移数[(199.68±18.44)个]均低于sh-NC组[分别为1.24±0.17和(374.76±24.83)个]，sh-UCA1组细胞凋亡率[(28.64±7.80)%]高于sh-NC组[(14.27±4.38)%，均 P<0.05]。效应细胞和靶细胞不同比例培养后，HEC-1A-sh-UCA1组细胞存活率均低于HEC-1A-sh-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。UCA1存在与miR-204-5p结合的位点。UCA1+anti-miR-204-5p组细胞的 A值(1.74±0.08)和细胞迁移数[(426.00±18.00)个]均高于对照组[分别为1.00±0.03和(284.00±8.00)个]，UCA1+anti-miR-204-5p组细胞凋亡率[(5.42±0.93)%]低于Control组[(14.82±1.48)%，均 P<0.05]。当与PBMC共培养时，HEC-1A-sh-UCA1细胞可以诱导更高的干扰素γ(IFN-γ)表达，PHA组及PHA+pre-miR-204-5p组细胞中IFN-γ的表达水平分别为2.42±0.49和1.88±0.26，均高于PHA+pre-NC组(0.85±0.10，均 P<0.05)。体外与细胞因子诱导的杀伤细胞(不同比例)共培养时，HEC-1A-sh-UCA1细胞则具有较低的存活率，HEC-1A-pre-miR-204-5p组细胞存活率均低于HEC-1A-pre-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:UCA1/miR-204-5p可能在人子宫内膜癌中发挥重要作用。

目的:探讨miR-29a调控横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma，RMS)细胞A-204增殖的作用及分子机制。方法:人RMS细胞系A-204购自中国医学科学院细胞库。依据转染的DNA将细胞分为对照组、miR-29a组、E2F7组和miR-29a+E2F7组。采用CCK-8实验检测RMS细胞系A-204细胞的增殖活性，生物信息学方法预测miR-29a的潜在靶点，通过荧光素酶报告基因实验验证其靶向作用，反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription-real time quantitative PCR，RT-qPCR)实验及蛋白质免疫印迹实验检测靶点分子E2F7的表达，流式细胞术检测细胞周期，细胞体外克隆形成实验检测细胞生长活性。结果:在RMS细胞系A-204细胞中，与对照组相比，miR-29a组的A-204细胞在转染后的48 h和72 h细胞增殖活性显著下降，差异具有统计学意义[(1.97±0.15)比(1.69±0.11)、(4.69±0.32)比(2.73±0.28)， t＝3.70、7.98， P值均<0.05)]。荧光素酶报告基因实验检测结果表明，与对照组相比，miR-29a组的E2F7荧光素酶活性显著下降，差异具有统计学意义[(44.90±5.62)比(11.67±4.55)， t＝7.96， P<0.05]。RT-qPCR及Western blot检测结果显示，与对照组相比，miR-29a组E2F7 mRNA及蛋白表达水平显著下调，差异具有统计学意义[(0.95±0.04)比(0.59±0.07)，(1.04±0.06)比(0.28±0.02)， t＝7.73、16.89， P值均<0.05]；流式细胞染色结果显示，与对照组相比，E2F7组细胞G1期细胞比例显著下降，G2/M期比例显著升高，差异具有统计学意义[%：(82.60±2.75)比(70.83±1.99)、(18.54±0.73)比(12.66±0.37)， t＝6.00、12.44， P值均<0.05]；细胞克隆形成实验结果表明，与对照组相比，E2F7组细胞克隆数显著下降，差异具有统计学意义[个：(59.70±3.90)比(68.80±4.30)， t＝3.01, P<0.05]。与miR-29a组相比，miR-29a+E2F7组A-204克隆形成数明显增加，G1期细胞比例显著升高，G2/M期细胞比例显著下降，组间差异具有统计学意义[(32.70±4.20)比(54.70±6.20)，(79.59±1.58)%比(90.12±2.34)%、(12.34±0.52)%比(5.59±0.28)%， t＝5.09、6.46、19.80， P值均<0.05]。 结论:mi R-29a可以通过下调E2F7的表达阻断RMS细胞有丝分裂，抑制细胞增殖。

目的:探讨miR-204通过Wnt信号通路对骨质疏松症小鼠成骨细胞增殖的影响及机制分析。方法:雌性昆明小鼠分为：对照组、假手术组和骨质疏松症组，采用双侧卵巢切除法建立去卵巢骨质疏松小鼠模型并进行鉴定；提取小鼠原代成骨细胞并鉴定；细胞转染并检测miR-204的表达水平；MTT检测各组细胞活力；各组细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的检测；Transwell检测各组细胞的侵袭能力；细胞流式术检测各组细胞凋亡情况；细胞流式术检测各组细胞Caspase-3活性；双荧光素酶报告基因检测miR-204和 β-catenin、LRP-5间的相互作用；Western blot检测Wnt信号通路相关蛋白表达情况。 结果:骨质疏松症组小鼠骨密度较对照组和假手术组明显降低（ P=0.007， P=0.057），表明骨质疏松症小鼠造模成功。miR-204的表达水平在miR-204模拟物组明显提高（ P=0.072），在miR-204抑制剂组下降（ P=0.031）；miR-204模拟物组成骨细胞活力和ALP活性提高（ P=0.007， P=0.043），miR-204抑制剂组成骨细胞活力和ALP活性下降（ P=0.007， P=0.035）；miR-204模拟物组成骨细胞的侵袭能力明显增强（ P=0.006），miR-204抑制剂组成骨细胞的侵袭能力下降（ P=0.036）；miR-204模拟物组成骨细胞的凋亡能力和Caspase-3活性下降（ P=0.041， P=0.045），miR-204抑制剂组成骨细胞的凋亡能力和Caspase-3活性增强（ P=0.005， P=0.039）；miR-204与 β-catenin、LRP-5之间有靶向关系；miR-204模拟物组成骨细胞中 β-catenin和LRP-5蛋白表达均上调（ P=0.043， P=0.009），miR-204抑制剂组成骨细胞中 β-catenin和LRP-5蛋白表达均下调（ P=0.041， P=0.032）。 结论:miR-204可能促进成骨细胞的增殖，激活Wnt信号通路，对骨质疏松症有一定的保护作用。

目的 探究纳武利尤单抗联合安罗替尼治疗Ⅲb～Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的效果及对微小RNA-1269(miR-1269)、miR-204-5p表达的影响.方法 选取Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者82例,患者分配为 对照组、观察组,各41例,使用随机数字表法,对照组采用安罗替尼治疗,观察组在对照组的基础上采用纳武利尤单抗治疗;比较两组患者的疗效、治疗前后肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、miR-1269、miR-204-5p表达水平和不良反应的发生率.结果 观察组患者治疗后疾病控制率(87.80％,36/41)显著高于对照组(68.29％,28/41)(x2=4.556,P=0.033);与治疗前相比,治疗后观察组和对照组的CEA、CYFRA21-1、miR-1269水平显著降低,miR-204-5p水平显著升高(P＜0.05);治疗后与对照组相比,观察组的CEA、CYFRA21-1、miR-1269水平显著降低,miR-204-5p水平显著升高(P＜0.05);不良反应两组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 纳武利尤单抗联合安罗替尼治疗Ⅲb～Ⅳ期NSCLC患者可降低患者肿瘤标志物的水平,调节miR-1269、miR-204-5p的表达,效果更好.

目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。