目的:探讨连翘苷对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对环状RNA_0054537(circ_0054537)/微小RNA(miRNA，miR)-409-3p的调控作用。方法:体外培养肝癌细胞Hep3B，使用不同剂量(5、10、20 μmol/L)的连翘苷处理Hep3B细胞；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力；采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0054537、miR-409-3p的表达量；双荧光素酶报告实验检测circ_0054537、miR-409-3p的靶向关系；Hep3B细胞中分别转染si-circ_0054537、pcDNA-circ_0054537，采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:连翘苷可明显降低细胞活力[(1.276±0.110)个比(1.031±0.090)、(0.637±0.050)、(0.507±0.040)个， F＝244.841， P<0.05]，增高凋亡率[(7.34±0.62)%比(12.44±1.03)%、(22.86±2.12)%、(28.16±2.71)%， F＝244.841， P<0.05]，减少迁移细胞数[(154.15±12.76)个比(124.06±10.04)、(78.05±7.25)、(61.13±5.83)个]及侵袭细胞数[(112.04±10.08)个比(89.43±8.13)、(57.11±5.12)、(43.08±4.05)个， F＝186.018、166.514， P<0.05]，抑制circ_0054537的表达[(1.00±0.10)比(0.40±0.04)， t＝16.713， P<0.05]，促进miR-409-3p的表达[(1.02±0.11)比(3.42±0.31)， t＝21.889， P<0.05]；转染si-circ_0054537可明显抑制细胞活力[(1.264±0.10)比(0.686±0.06)]、迁移[(151.96±11.17)比(79.03±7.21)]及侵袭能力[(115.28±11.05)比(68.14±6.43)， t＝14.869、16.457、11.062， P<0.05]，增高凋亡率[(7.26±0.71)%比(23.79±2.06)%， t＝22.759， P<0.05]；双荧光素酶报告实验证实circ_0054537可靶向结合miR-409-3p；转染pcDNA-circ_0054537可明显逆转连翘苷对Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的调控作用。 结论:连翘苷可通过下调circ_0054537的表达而上调miR-409-3p的表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及促进细胞凋亡。

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1 和miR-409-3p表达水平.双荧光素酶检测 LncRNA CBR3-AS1 和 miR-409-3p及 hnRNPA2B1 和miR-409-3p的靶向关系.将Hep G2 细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1 组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组.平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9 蛋白的表达变化.小鼠移植瘤实验检测LncRNA CBR3-AS1对肝癌肿瘤生长及miR-409-3p/hnRNPA2B1 的影响.结果 与癌旁组织比较,癌组织中LncRNA CBR3-AS1 表达显著升高,miR-409-3p表达显著降低(P<0.05).StarBase预测显示LncRNA CBR3-AS1 与miR-409-3p有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与LncRNA CBR3-AS1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组LncRNA CBR3-AS1 表达明显下降,miR-409-3p表达明显上升(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组miR-409-3p表达明显下降(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).生物信息学分析显示miR-409-3p与hnRNPA2B1 有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与hnRNPA2B1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组miR-409-3p表达明显上升,hnRNPA2B1 表达明显下降(P<0.05);与 miR-409-3p mimics+pcDNA 组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组 hnRNPA2B1 表达明显上升(P<0.05),与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,小鼠注射转染si-CBR3-AS1 的细胞后,移植瘤体积生长缓慢.与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组移植瘤中LncRNA CBR3-AS1 表达水平下降,miR-409-3p表达水平升高(P<0.005).免疫组化检测结果显示,si-CBR3-AS1 组移植瘤中,hnRNPA2B1 蛋白表达水平显著降低(P<0.005).结论 LncRNA CBR3-AS1 在肝癌中表达升高,下调LncRNA CBR3-AS1 的表达,可上调miR-409-3p表达,从而下调hnRNPA2B1 表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡.

目的 探讨宫颈癌中微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)、血管内皮生长因子(VEGF)、Grb2协同结合蛋白2(Gab2)表达与调强适形放疗同步化疗疗效及治疗后3年生存情况的关系.方法 采用回顾性研究方法,选取2019年1月至2020年2月在新疆医科大学附属肿瘤医院治疗的宫颈癌患者138例,均给予调强适形放疗同步化疗.同时随访所有患者疗效及治疗后3年生存情况,分为化疗有效组(n=92)和治疗无效组(n=56)、死亡组(n=26)和存活组(n=112).观察不同临床特征、疗效、预后患者宫颈癌组织miRNA-409-3p、VEGF、Gab2表达水平.结果 低分化宫颈癌组织miRNA-409-3p相对表达量明显低于中高分化宫颈癌组织,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于中高分化宫颈癌组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).FIGO分期Ⅲ期宫颈癌组织miRNA-409-3p相对表达量明显低于Ⅱ期宫颈癌组织,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于Ⅱ期宫颈癌组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗有效组患者miRNA-409-3p相对表达量明显高于治疗无效组,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于治疗无效组,差异均有统计学意义(P＜0.05).死亡组患者miRNA-409-3p相对表达量明显高于存活组患者,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于存活组患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).miRNA-409-3p、VEGF、Gab2表达预测疗效有效的ROC曲线下面积分别为0.647、0.779和0.616,预测价值较好(P＜0.05).miRNA-409-3p、VEGF、Gab2表达预测死亡的ROC曲线下面积分别为0.715、0.653和0.785,预测价值较好(P＜0.05).结论 宫颈癌组织miRNA-409-3p表达下调,而VEGF、Gab2表达上调,与调强适形放疗同步化疗疗效及预后有关,其中VEGF预测疗效有一定价值,而Gab2预测预后有一定价值.

目的 探讨微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)氧化应激、凋亡、炎症的影响及作用机制.方法 将对数期的HRCEC细胞分为对照组、高渗葡萄糖(HG)组、HG+miR-con组、HG+miR-409-3p 组、HG+si-con 组、HG+si-CACNB2 组、HG+miR-409-3p+pcDNA 和 HG+miR-409-3p+pcDNA-CACNB2 组.采用荧光定量 PCR(qPCR)法检测 miR-409-3p 的相对表达量,Western blotting(WB)法检测L-型电压依赖型钙通道β(CACNB2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量,流式细胞术(F C M)检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(E LIS A)检测炎症因子水平,酶标仪及试剂盒检测氧化应激相关指标,双荧光素酶检测(LRA)验证miR-409-3p与CACNB2调控关系.结果 HG组miR-409-3p相对表达量低于对照组,CACNB2 mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-409-3p可靶向结合CACNB2,在HRCEC细胞中负向调控CACNB2的表达.与HG+miR-con组相比,HG+miR-409-3p组的乳酸脱氢酶(LDH)及谷胱甘肽(GSH)水平升高(P＜0.01),CACNB2蛋白表达量、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平降低(P＜0.01);与 HG+miR-con 组相比,HG+miR-409-3p 组 Cleaved caspase-3、Bax 蛋白表达量,细胞凋亡率,白细胞介素(IL)-6、IL-18及IL-1β水平均降低,同时,细胞间黏附分子(ICAM)蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.01).敲减CACNB2具有相似的作用,过表达CACNB2可逆转miR-409-3p过表达对HRCEC细胞氧化应激、细胞凋亡、炎症反应的影响.结论 miR-409-3p抑制HRCEC细胞的氧化应激、凋亡、炎症与下调CACNB2表达有关.

目的 探索长链非编码RNA(lncRNA)SNHG12通过微小RNA(miR)-409-3p/锌指E盒结合的同源盒蛋白1(ZEB1)轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响.方法 选取2021年2月至2022年2月于河南省南阳市中心医院诊治的50例宫颈癌患者组织及癌旁组织标本、正常宫颈上皮细胞以及宫颈癌细胞系 HeLa、SiHa、CaSki,检测组织及细胞中lncRNA SNHG12与miR-409-3p的表达水平.取宫颈癌细胞系 HeLa分为sh-NC组(转染阴性对照载体)、sh-SNHG12组(转染SNHG12敲低载体)、mimics NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-409-3p mimics组(转染miR-409-3p模拟物)、sh-NC+inhibitor NC组(共转染sh-NC与抑制物阴性对照)、sh-NC+miR-409-3p inhibitor组(共转染sh-NC与miR-409-3p抑制物)、sh-SNHG12+inhibitor NC组(共转染sh-SNHG12与inhibitor NC)、sh-SNHG12+miR-409-3p inhibitor组(共转染sh-SNHG12与miR-409-3p inhibitor);未转染细胞为对照组.依次采用qRT-PCR、双荧光素酶实验检测SNHG12与miR-409-3p表达水平及两者的靶向关系;MTT法、流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡率;Western blot检测神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、ZEB1、Snail和波形蛋白(vimen-tin)的表达水平.结果 SNHG12与 miR-409-3p存在靶向关系,与sh-NC组、对照组相比,sh-SNHG12组细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达显著增加,细胞增殖率、SNHG12、ZEB1、N-cadherin、Snail、vimentin表达显著降低(P<0.05);与mimics NC组、对照组相比,miR-409-3p mimics组细胞凋亡率、miR-409-3p、E-cadherin蛋白表达显著增加,细胞增殖率、ZEB1、N-cadherin、Snail、vimentin表达显著降低(P<0.05);miR-409-3p inhibitor可逆转敲低SNHG12对HeLa细胞发挥的上述作用(P<0.05).结论 敲低SNHG12表达可通过靶向负调控 miR-409-3p/ZEB1轴,减少 HeLa细胞增殖以及上皮间质转化,促进细胞凋亡.

目的 探讨血清微小RNA(miR)-409-3p表达水平在乳腺癌早期诊断中的潜在价值.方法 采用实时荧光定量PCR检测50例乳腺癌患者外周血、肿瘤组织和癌旁组织以及50例健康女性外周血miR-409-3p表达水平,分析miR-409-3p表达在血清与组织中变化趋势的相关性.结果 乳腺癌患者肿瘤组织中miR-409-3p表达水平低于癌旁组织,乳腺癌患者血清中miR-409-3p表达水平亦低于健康女性(P＜0.05).乳腺癌患者血清中miR-409-3p变化趋势与组织中保持一致.结论 血清miR-409-3p表达能反映乳腺癌的发生,有可能成为乳腺癌早期临床诊断的重要标记物.

目的 探讨趋化因子CXCL3及微小RNA-409-3p(miR-409-3p)在原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中的表达及意义.方法 采用荧光定量RT-PCR法检测30例ITP患者(ITP组)和30例健康体检者(对照组)外周血miR-409-3p mRNA的表达,ELISA法检测血清中CXCL3的表达,分析CXCL3和miR-409-3p mRNA表达与血小板数量的相关性.结果 ITP组血清中CXCL3的表达高于对照组[(81.72±32.98) pg/ml vs.(62.30± 15.93) pg/ml](P＜0.05);但ITP组与对照组miR-409-3p mRNA表达比较差异无统计学意义(6.04±2.59 vs.5.40±3.04)(P＞0.05).ITP组CXCL3表达与miR-409-3p mRNA表达不存在相关关系(r=0.006,P＞0.05),且CXCL3和miR-409-3p mRNA表达与血小板数量亦不存在相关关系(r=-0.115和0.197,P＞0.05).结论 CXCL3在ITP患者外周血中高表达,提示其可能参与了ITP的发病过程.

目的 探讨微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响.方法 将HeLa细胞分为正常对照组、NC对照组和miRNA-409-3p mimic组,RT-PCR法检测不同宫颈组织及转染miR-NA-409-3p mimic后各组细胞中miRNA-409-3p mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测Fip200、LC3、Caspase-3蛋白的表达.结果 宫颈癌组织中miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平显著低于正常宫颈组织和癌旁组织(P<0. 05);通过转染miRNA-409-3p mimic后,miRNA-409-3p mimic组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组显著上调(P<0. 05),NC对照组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组无统计学差异(P>0. 05). miRNA-409-3p mimic组HeLa细胞增殖率较正常对照组和NC对照组显著降低(P<0. 05).给予顺铂干预后,miR-NA-409-3p mimic组细胞增殖显著被抑制(P<0. 05);同时,miRNA-409-3p mimic组细胞中Fip200蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于正常对照组和NC对照组(P<0. 05).结论 miRNA-409-3p在宫颈癌组织中低表达,可能与宫颈癌的发生发展有关,上调miRNA-409-3p水平可以抑制HeLa细胞增殖,增加HeLa细胞对顺铂的敏感性.

目的 探讨依巴斯汀联合马齿苋治疗特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的临床疗效及对miR-186-5p、miR-409-3p水平、免疫状态的影响.方法 2014年10月至2017年10月在新疆医科大学附属中医医院就诊的112例AD患者被随机分为对照组和观察组,每组56例.对照组口服依巴斯汀,观察组在对照组基础上进行马齿苋塌渍治疗.比较治疗前、治疗2周、4周的症状评分和临床有效率,比较治疗前后外周血Th17/Treg、IL17水平以及皮损边缘皮肤标本的miR-186-5p、miR-409-3p表达.结果 治疗前,2组各指标均无显著差异,治疗2,4周后,观察组症状评分显著低于对照组(P＜0.05);治疗2,4周时观察组的总有效率分别为66.07％,80.36％,显著高于对照组35.72％,57.14％(P＜0.05).治疗后2组Th17％、Th 17/Treg、IL-17均显著下降,且观察组显著低于对照组(P＜0.05);2组miR-186-5p、miR-409-3p表达均显著下降,且观察组显著低于对照组(P＜0.05).结论 依巴斯汀联合马齿苋能有效改善AD临床症状,提高疗效,下调皮肤中miR-186-5p、miR-409-3p的表达,降低血清Th17/Treg表达,改善炎症状态.