目的:分析靶向乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对表达HBsAg的肝癌细胞的杀伤作用。方法:构建HBsAg-CAR基因，通过慢病毒载体将其转导入T细胞(健康捐献者的血液中获取)，制备HBsAg-CAR-T细胞。制备CD19-CAR-T细胞作为Mock组，未转导的T细胞为Untransduced组。上述三种效应细胞分别与肝癌细胞共同培养，检测三组细胞对肝癌细胞的杀伤作用及抗肿瘤细胞因子(肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、白细胞介素2等)释放水平。建立免疫缺陷NPG小鼠PLC/PRF/5肝癌皮下成瘤模型，随机分组，尾静脉注射HBsAg-CAR-T细胞(实验组， n＝5)或未转导的T细胞(对照组， n＝5)，注射后第15天测量肿瘤体积。 结果:体外培养过程中，HBsAg-CAR-T细胞具有较高的增殖能力及存活率，CAR的表达稳定。与表达HBsAg的肝癌细胞共培养后，HBsAg-CAR-T组释放的抗肿瘤细胞因子明显高于Mock组及Untransduced组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；HBsAg-CAR-T组对HBsAg表达阳性的肝癌细胞的杀伤率明显高于Mock组及Untransduced组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。实验组NPG小鼠肿瘤体积为(250.8±62.8)mm 3，低于对照组小鼠肿瘤体积(757.5±102.6)mm 3，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:HBsAg-CAR-T细胞能够特异性识别并杀伤HBsAg阳性肝癌细胞，并释放高水平的抗肿瘤细胞因子。

目的:探讨乙肝病毒编码X蛋白促进甲胎蛋白表达的分子机制。方法:非参数检验-秩和检验评估肝癌患者HBV感染与否与AFP表达水平间的相关性；在PLC/PRF/5肝癌细胞系中转染HBV、HBx及P53真核表达质粒，36 h Western blot和qRT-PCR分别在蛋白质和mRNA水平检测HBV和HBx对P53和AFP表达的影响，以及P53对AFP表达的影响；在PLC/PRF/5细胞中转染包含AFP基因启动子和沉默子的荧光素酶报告质粒，通过检测荧光素酶活性改变明确沉默子区域，再将包含沉默子的报告载体与HBV/HBx质粒共转染PLC/PRF/5细胞，通过检测荧光素酶活性的改变验证HBV/HBx对AFP基因沉默子区域的作用；用ChIP实验验证P53在AFP基因沉默子区域的结合，并证实HBx对P53与作用序列结合能力的影响。结果:统计分析发现HBV感染与AFP表达之间存在明显相关性，HBV阳性肝癌患者的血清AFP值总体中位数为296.8 ng/ml，而HBV阴性患者的AFP总体中位数为71.5 ng/ml( P＝0.02)，HBV阳性肝癌患者的AFP表达水平明显高于HBV阴性肝癌患者；P53可以抑制AFP表达( P<0.001)，而HBV和HBx均能抑制P53表达( P＝0.0011、 P＝0.0027)，并促进AFP表达( P＝0.0014、 P<0.001)；HBV和HBx可以作用于AFP基因沉默子区域，促进基因转录( P<0.001、 P＝0.0019； P＝0.0046、 P＝0.0015)；P53与AFP基因沉默子的结合作用能够被HBx所够削弱。 结论:HBx可通过抑制P53表达，并且抑制P53在AFP基因沉默子区域的结合，以此促进AFP基因转录，并进一步促进AFP蛋白表达。

目的:研究人肝癌组织中S期激酶相关蛋白2（SKP2）表达与预后的关系以及肝癌细胞中SKP2表达对人肝癌细胞放射敏感性的影响。方法:使用TCGA数据库中肝癌组织和正常对照组织的测序结果，分析 SKP2基因在肝癌组织中的表达情况及其与患者预后的关系。使用Western blot检测肝癌细胞放射照射前后SKP2蛋白水平表达变化。利用CRISPR/Cas9技术敲除肝癌细胞 SKP2基因的启动子和第1外显子，建立 SKP2基因敲除的PLC/PRF/5和Hep3B肝癌细胞系模型，并进一步进行放射照射。用克隆形成实验检测 SKP2基因敲除细胞的放射敏感性变化情况。 结果:对TCGA数据库分析结果显示，与正常组织比较， SKP2基因在肝癌组织中表达升高。对 SKP2高、低水平肝癌患者总体生存率进行K-M法分析，结果显示 SKP2高表达肝癌患者预后相对较差，其5年生存率为34.6%， SKP2低表达肝癌患者则为50.6%（ HR=2.18，95% CI为1.46~3.27， P<0.001）。体外细胞实验显示肝癌细胞受到放射照射后SKP2表达水平明显升高。在CRISPR/Cas9敲除SKP2 -/-肝癌细胞中，克隆形成实验结果显示SKP2 -/-肝癌细胞的放射敏感性较SKP2 +/+明显增加。 结论:SKP2基因在肝癌组织中表达升高，且高表达者较低表达者预后差。放射可上调PLC肝癌细胞SKP2的表达水平，而敲除 SKP2后其放射敏感性明显增加。

目的:探讨 miR-548b-3p是否可以通过下调诱骗受体3(DcR3)的表达进而调节肝癌细胞的恶性生物学性状。 方法:通过实时荧光定量PCR检测Hep3b、HepG2、Huh7.5.1、PLC、97H等5种常见肝癌细胞系中 miR-548b-3p的水平，实验用肝癌细胞系购自上海市肿瘤研究所。裸鼠皮下成瘤性实验包括 miR-548b-3p过表达和低表达两部分： miR-548b-3p过表达实验包括Huh7.5.1- miR-548b-3p细胞组和Huh7.5.1-NC细胞组； miR-548b-3p低表达实验组包括PLC- miR-548b-3p-sponge组和PLC-NC细胞组，每组分别5只裸鼠。实验用裸鼠为雄性Balb/c品系，体重20~25 g，4~6周龄。利用Starbase软件预测 miR-548b-3p与 DcR3是否存在结合位点；双荧光素酶报告实验验证 DcR3是否为 miR-548b-3p的靶基因。通过拯救实验验证 miR-548b-3p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响是否通过 DcR3来实现。采用Graphpad Prism 9进行统计分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差( ± s)表示，组间比较采用 t检验。 结果:实时荧光定量PCR以2 －ΔΔCt相对表达量为参数进行比较，假设Hep3b相对表达量为1，HepG2相对表达量为0.902，Huh7.5.1相对表达量为0.712，PLC相对表达量为1.293，97H相对表达量为0.818，最后结果表明， miR-548b-3p表达最高的是PLC细胞，表达最低的是Huh7.5.1细胞；裸鼠皮下成瘤性实验表明，实验4周后，Huh7.5.1- miR-548b-3p组成瘤体积为(444.77±142.34) mm 3，Huh7.5.1-NC组成瘤体积为(918.80±139.21) mm 3；PLC- miR-548b-3p-sponge组成瘤体积为(407.49±58.50) mm 3，PLC-NC组成瘤体积为(218.62±47.55) mm 3；利用Starbase软件预测到 miR-548b-3p与 DcR3存在结合位点；双荧光素酶报告实验证明 DcR3是 miR-548b-3p的靶基因；拯救实验验证 miR-548b-3p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响是通过 DcR3来实现的。 结论:miR-548b-3p可调节肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学性状，并且是通过下调 DcR3的表达水平来实现的。

慢性淋巴细胞白血病（CLL）/小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）在西方发病率高，是成人最常见的白血病，我国的发病率低于西方，但呈不断增长趋势。小分子靶向药物布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂（BTKi）、促凋亡蛋白Bcl-2抑制剂（BCL-2i）维奈克拉（Ven）等治疗CLL/SLL具有疗效好、不良反应小、口服方便等特点 [1,2,3,4]，显著优于传统化学免疫治疗，CLL治疗逐渐进入以BTKi为代表的无化疗时代 [3]。我国已批准第一代BTKi伊布替尼及国产第二代BTKi泽布替尼、奥布替尼治疗CLL。BTKi单药治疗CLL缓解率高、生存期长，但由于缓解深度不高，很少达到完全缓解（CR），微小残留病（MRD）阴性者更少，所以BTKi单药需要长期治疗，长期治疗存在以下缺陷：经济负担、耐药相关的克隆演变、依从性差等。目前报道BTKi的主要耐药机制为BTK和磷脂酶C-γ2（PLC-γ2）基因突变等 [5,6]。由于BTKi单药治疗的局限性，在既往疗效评估标准上结合以MRD阴性为治疗目标的新药联合或新药与传统化学免疫治疗（CIT）联合的固定周期治疗正逐渐成为研究的热点 [6,7,8,9]。本研究分析报道本中心BTKi联合苯达莫司汀、利妥昔单抗（BR）方案一线治疗CLL/SLL的疗效及安全性。

胰腺导管腺癌的发病机制与多条关键致癌信号通路包括Ras/MAPK、PI3K/AKT、PLCγ/PKC以及JAK/STATs等密切相关，而细胞外基质及微生物等对肿瘤发病的作用也逐渐被认识。越来越多新的潜在治疗靶点被发现，临床上对多种特异性治疗靶点抑制剂的应用取得了一定效果。化疗、靶向治疗、免疫治疗和基质靶向药物等联合治疗策略是胰腺导管腺癌未来的研究方向。

目的:探讨驱动蛋白家族20A(KIF20A)和星形细胞上调基因-1(AEG-1)与原发性肝癌(PLC)临床病理特征关系。方法:采用免疫组织化学法检测2011年2月～2019年8月广东医科大学附属医院收治69例PLC、33例肝硬化和17例正常肝组织中KIF20A和AEG-1表达，各组间比较采用 χ2检验。 结果:KIF20A在正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中的阳性表达率分别为5.88%(1/17)、33.33%(11/33)、73.91%(51/69)，两两之间比较差异有统计学意义( t＝ 4.635、26.407、15.422， P<0.05)，KIF20A表达水平与PLC血管浸润和TNM分期明显相关( t＝6.067、7.753， P<0.05)；AEG-1在正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中的阳性表达率分别为11.76%(2/17)、42.42%(14/33)、72.46%(50/69)，两两之间比较差异有统计学意义( t＝ 4.847、21.022、8.618， P<0.05)，AEG-1表达水平与PLC血管浸润、肿瘤大小、TNM分期明显相关( t＝ 4.804、6.355、6.355， P<0.05)。 结论:检测KIF20A和AEG-1有助于评估PLC患者病情。

目的:研究血浆甲基化SEPT9基因（mSEPT9）在原发性肝癌患者中的表达及临床意义。方法:选取2016年5月至2018年10月在西安就诊393例患者资料，其中原发性肝癌组75例、肝硬化组50例、健康对照组268例。应用聚合酶链式反应荧光探针法检测3组外周血浆mSEPT9表达阳性率，并分析其与肝癌临床特征的相关性，同时与电化学发光法检测的甲胎蛋白阳性率进行比较。采用 χ2检验或连续性校正的 χ2检验进行统计学分析。 结果:实际有效样本数为367例。肝癌组64例，肝硬化组42例，健康对照组261例，其中获得肝癌病理组织者34例。血浆mSEPT9阳性率在肝癌组明显高于肝硬化与健康对照组[分别为76.6%（49/64）、35.7%（15/42）、3.8%（10/261）]，差异均有统计学意义（ χ2 = 176.017， P <0.001）。肝癌患者血浆mSEPT9检测灵敏度（76.6%）明显优于甲胎蛋白（54.7%），差异具有统计学意义（ χ2 = 6.788， P < 0.01）。血浆mSEPT9联合甲胎蛋白检测较其单一检测灵敏度及特异度均明显提高（分别为89.7%、特异度96.3%）。肝癌患者年龄≥50岁、临床分期Ⅱ期以上及病理示中低分化者血浆mSEPT9阳性表达较高，差异均有统计学意义（ χ2 = 6.41、9.279、6.332， P值均<0.05）。随访期间血浆mSEPT9表达阳性的肝癌患者生存时间明显短于阴性者[分别为（310±26）、（487±59），差异具有统计学意义（Log Rank， P = 0.039）]。 结论:血浆mSEPT9检测在我国肝癌患者中的阳性率高于甲胎蛋白，且与年龄及临床分期、组织分化程度相关，并有一定生存预测价值，故检测该基因在原发性肝癌患者无创诊断及预后评估中具有重要的临床意义，有潜在的临床应用价值。

目的:探讨鼠双微体基因2(MDM2)和细胞分裂周期蛋白20(CDC20)在原发性肝癌(PLC)组织中的表达、及其与PLC临床病理特征的关系。方法:收集2016年3月至2021年9月临沂市人民医院和山东医学高等专科学校附属医院病理确诊的25例正常肝组织标本、41例肝硬化组织标本、81例PLC组织标本，采用免疫组织化学方法检测上述组织中MDM2和CDC20表达，采用 χ2检验分析两者的表达与PLC临床病理特征的关系。 结果:正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中MDM2阳性表达率分别为12.00%(3/25)、36.59%(15/41)、62.96%(51/81)，两两之间比较差异有统计学意义( χ2＝ 4.733、19.854、7.627， P<0.05)；MDM2表达水平与PLC肿瘤大小、癌细胞分化程度、TNM分期(TNM stage)和血管浸润明显相关( χ2＝5.006、7.836、5.871、4.669， P<0.05)。正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中CDC20阳性表达率分别为16.00%(4/25)、34.21%(19/41)、67.90%(55/81)，两两之间比较差异有统计学意义( χ2＝6.297、5.302、20.852， P<0.05)；CDC20表达水平与PLC血管浸润、肿瘤大小、TNM分期明显相关( χ2＝6.860、5.299、6.800， P<0.05)。 结论:MDM2和CDC20在PLC组织中表达上调，MDM2和CDC20表达可能与PLC的发生、发展、转移有关，MDM2和CDC20有助于预测PLC进展和预后。

目的:探讨微小RNA-129-3p(miR-129-3p)通过靶向E2F转录因子5(E2F5)影响肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的恶性生物学行为。方法:荧光定量聚合酶链反应检测不同肝癌细胞株与正常肝细胞株中miR-129-3p及E2F5的表达；构建过表达miR-129-3p的HepG2细胞株，噻唑蓝细胞增殖实验、平板克隆实验检测细胞增殖及克隆形成能力；细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法检测蛋白表达；双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法验证miR-129-3p和E2F5的靶向关系。实验分组如下：细胞未经转染(NC)组；转染对照miR-con(miR-con)组；转染miR-129-3p(miR-129-3p)组；共转染miR-129-3p和空载体pcDNA (miR-129-3p+pcDNA)组；共转染miR-129-3p和pcDNA-E2F5(miR-129-3p+pcDNA-E2F5)组。结果:肝癌细胞株MHCC-97H、HepG2、LM3、Hep3B、PLC、Huh7中miR-129-3p的表达量均低于正常肝细胞株HL-7702，差异具有统计学意义(均 P<0.05)。与NC组和miR-con组相比，miR-129-3p组的细胞克隆数[(86.56±20.84)比(511.29±45.03)和(509.78±40.81)]、细胞迁移率[(3.03±1.29)%比(15.01±2.30)%和(14.99±2.31)%]、迁移相关蛋白MMP-2相对表达量[(0.51±0.22)比(1.87±0.30)和(1.84±0.35)]和穿膜细胞数[(33.10±1.58)比(101.23±0.31)和(100.96±3.44)个]均降低，差异有统计学意义(均 P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明miR-129-3p可负性靶向调控抑制E2F5表达。 结论:miR-129-3p在肝癌细胞中低表达，过表达miR-129-3p可通过靶向E2F5抑制肝癌细胞恶性生物学行为。