患者，女，40岁，2020年1月诊断为"骨髓增生异常综合征EB-2（WPSS评分3分）"，分别于2020年1月、2020年3月和2020年5月应用地西他滨去甲基化治疗。移植前骨髓原始粒细胞占0.020，微小残留病（MRD）0.77%，WT1基因定量18.658%，NPM1-A基因突变定量1.244%。预处理方案：阿糖胞苷4 g·m -2·d -1，移植前10 d（-10 d）、-9 d，地西他滨20 mg·m -2·d -1，-10 d~-6 d，白消安3.2 mg·kg -1·d -1，-8 d~-6 d，环磷酰胺1.8 g·m -2·d -1，-5 d、-4 d，兔抗人胸腺细胞球蛋白2.5 mg·kg -1·d -1，-5 d~-2 d，司莫司汀250 mg/m 2，-3 d，移植物抗宿主病（GVHD）预防方案：西罗莫司、霉酚酸酯联合短程甲氨蝶呤。患者于2020年8月18日行单倍型造血干细胞移植（女供母，HLA 6/12，AB+供A+），回输供者外周血干细胞单个核细胞（MNC）9.63×10 8/kg，CD34 +细胞3.84×10 6/kg。移植后11 d（+11 d）粒细胞及血小板植活。+3 d患者发生呕血，给予禁食水、抑酸治疗。患者高热，血培养、病毒、细菌、真菌筛查均为阴性，给予广谱抗生素抗感染治疗后体温未降。+8 d，患者出现皮疹。+9 d，患者发生上腹部烧灼感伴腹泻，考虑急性GVHD，加用甲泼尼龙2 mg·kg -1·d -1，体温降至正常。+13 d，患者血脂明显升高（甘油三酯38.18 mmol/L，总胆固醇8.65 mmol/L）。患者间断恶心、呕吐伴上腹不适，+14 d，患者出现乳糜血（甘油三酯41.70 mmol/L，总胆固醇7.49 mmol/L），停西罗莫司（此时西罗莫司浓度17.7 μg/L），改为环孢素A治疗GVHD，甘油三酯降至3.80 mmol/L，总胆固醇降至6.15 mmol/L。+25 d，患者出现嗜睡，恶心、呕吐好转，血巨细胞病毒、EB病毒DNA阴性，环孢素A浓度165.5 μg/L。+26 d，患者昏睡，定向力、计算力障碍、四肢肌力下降，腰穿脑脊液压力100 mmH 2O，氯114.3 mmol/L，葡萄糖8.30 mmol/L，蛋白0.55 g/L。脑脊液细菌培养、真菌培养及抗酸杆菌均阴性，脑脊液神经免疫病检测：血清和脑脊液中AQP4、MOG、MBG抗体均为阴性。脑脊液和外周血病毒PCR筛查均阴性，脑脊液病原体二代测序（NGS）阴性。TMA筛查阴性。头颅平扫+增强磁共振成像（MRI）：双侧颞叶深部（海马区）及室管膜下区、左侧颞叶皮层多发异常信号并下丘对侧斑片明显强化灶。右侧小囊幕增厚并明显强化。结合患者近1个月进食差，伴有恶心、呕吐、腹泻，考虑不除外Wernicke脑病，给予维生素B 1 200 mg每8 h 1次治疗，+27 d患者神志转清，肢体肌力明显好转。患者维生素B 1<1.0 μg/L，明确诊断为Wernicke脑病，继续补充维生素B 1治疗。复查头颅MRI：双侧颞叶（及海马区）及室管膜下区多发异常信号并双侧下丘、右侧小脑幕明显强化灶，较前部分病变信号明显减低，范围减小。+30 d，复查骨髓完全缓解（CR），MRD阴性，NPM1基因突变阴性，短串联重复序列-聚合酶链反应（STR-PCR）完全供者型。+36 d，间断谵妄，给予奥氮平对症治疗后好转，+50 d，患者谵妄好转，停用奥氮平。随访至移植后8个月，患者无明显神经、精神症状及体征，环孢素A血浓度50 μg/L，原发病处于完全缓解状态，MRD阴性，STR-PCR完全供者型。头颅MRI：双侧颞叶（及海马区）及室管膜下区多发异常信号并双侧下丘脑、右侧小脑幕病变强化灶明显减低，范围明显缩小。

近年来,作为能量代谢的中枢,下丘脑在肥胖发生发展中的作用己愈发得到重视.下丘脑中存在一类控制神经发生的干细胞,称为下丘脑神经干细胞(hypothalamic neural stem cell,ht NSC),其除了具有成体神经发生的作用外,还可感受机体代谢状态并作出反应,表现为改变分化方向与分泌外泌体功能、抑制炎症通路活化等,从而调节机体能量代谢平衡.通过对下丘脑及htNSC的研究,可深入了解肥胖时机体能量代谢紊乱背后的机制,并寻找针对肥胖及代谢综合征的潜在治疗靶点.

“肝肾同源”理论体系主要包括“乙癸同源”的调控机制和“肾肝同治”的治疗法则.李瀚旻教授带领科研团队经过20多年的努力,在继承“肝肾同源”理论的基础上,做出了一系列重要的创新性工作.重点阐发肝主藏血与肾主藏精相生、肝主疏泄与肾主闭藏统一、肝主生发与肾主涵养协调的“乙癸同源”调控机制和维持“肾精-肝血相生”、“闭藏-疏泄统一”、“生发-涵养协调”的“肾肝同治”的治疗法则.将“肝肾同源于精血”的认识推进到“肝肾同源于脑、下丘脑-垂体-肝轴、神经-内分泌-免疫网络、神经-内分泌-免疫-肝再生调控网络、髓-肝转化和干细胞及其组织微环境”,极大地深化和提高了“肝肾同源”的理论认识.创新“髓失生肝”的病因病机,根据肝损伤与肝再生失衡是“肝肾精虚”诸证生物学基础的新认识,揭示补肾“开源节流”的配伍规律.在临床应用方面提出“肝肾精虚”证的客观量化标准,确定“髓”为中心的治疗靶点,强调早期干预的临床应用时机.

目的 探索琼玉膏抗衰老以及下丘脑nf-kb炎症通路的激活与GnRH1基因甲基化相关性的可能分子机制.方法 ①观察比较6只24月龄自然衰老SD大鼠和6只2月龄青年SD大鼠下丘脑衰老相关蛋白及其基因mRNA的表达水平:Western Blot检测GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a的蛋白表达水平;Real-Time PCR检测GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a基因mRNA的表达水平;使用SPSS19.0统计软件做统计学分析.MSP法检测老年鼠和青年鼠GnRH1基因甲基化情况.②通过分离新生SD大鼠下丘脑神经元干细胞,建立D-半乳糖诱导的下丘脑神经元干细胞衰老模型,比较正常神经元干细胞组、D-半乳糖衰老组以及不同浓度琼玉膏干预组之间炎性因子及NF-κB表达的差异.结果 ①GnRH1、Sirt1、DNMT1的蛋白及其基因mRNA表达水平在老年鼠中明显降低,与青年鼠比较有显著性差异(P＜0.05);DNMT3a的蛋白及基因mRNA表达水平在老年鼠中无明显变化,与青年鼠比较无显著性差异(P＞0.05);老年鼠中GnRH1基因出现部分甲基化,青年鼠中GnRH1基因未发生甲基化.②D-半乳糖诱导建立的神经元干细胞衰老模型呈现炎性指标高表达以及NF-κB信号通路激活;琼玉膏可抑制炎性因子、nuclear P65的表达水平以及NF-κB的转录活性;并且,随着琼玉膏浓度从45 μg/ml增加到90μg/ml,其提前干预D-半乳糖诱导的神经元干细胞衰老的作用也相应增强.结论 琼玉膏抗衰老的可能分子机制在于降低下丘脑神经元干细胞炎性因子表达和NF-κB转录活性,进而能够逆转衰老进程中Gn-RH1基因甲基化及其表达水平下降.

目的 优化体外诱导人胚胎干细胞向类下丘脑弓状核神经细胞分化方案、提高分化效率;明确分化神经细胞中是否表达生殖功能调控相关基因.方法 利用接受辅助生殖技术治疗患者捐赠的冷冻胚胎建立人胚胎干细胞系CCRM14;饲养层上培养CCRM14,经纯化后消化为单细胞、诱导其向下丘脑神经细胞分化.分化策略:神经分化早期抑制转化生长因子β和骨形态发生蛋白信号通路;接着激活sonic hedgehog信号通路,促使下丘脑神经前体细胞生成;随后抑制Notch信号通路,添加脑源性神经营养因子诱导类下丘脑弓状核神经细胞的分化与成熟.分化不同时期采样,利用RT-qPCR、细胞免疫荧光、流式细胞术方法鉴定分化细胞.结果 依据本优化分化方案,CCRM14分化为下丘脑神经前体细胞的效率达95％以上,分化的细胞表达下丘脑弓状核神经细胞特异性标志物POMC和NPY/AGRP,同时表达参与生殖功能调控基因KISS1和AR.结论 该类分化细胞有作为细胞模型用于研究下丘脑弓状核在生殖相关疾病发生过程中调控机制的潜力.

粒细胞集落刺激因子是一种骨髓干细胞动员剂,目前临床主要用于预防和治疗肿瘤放疗或化疗后引起的白细胞减少症.越来越多的证据表明,粒细胞集落刺激因子通过多种信号通路对中枢神经系统有着重要的保护功能.动物实验显示,粒细胞集落刺激因子可通过抗凋亡、抗炎、稳定血脑屏障、抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴、促进神经血管再生及动员造血干细胞等多种机制的共同作用,在新生儿缺氧缺血性脑病中发挥脑保护的作用.文章综述了粒细胞集落刺激因子在治疗新生儿缺氧缺血性脑病中的信号传导通路、脑保护机制,以及粒细胞集落刺激因子联合其他药物治疗新生儿缺氧缺血性脑病的方法.

目的:研究体外诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)向下丘脑神经祖细胞分化,并以此为细胞模型,观察不同浓度雄激素对下丘脑神经祖细胞分化的影响.方法:鉴定hESC细胞株CCRM22,体外诱导CCRM22向下丘脑神经祖细胞分化,对其进行初步的细胞生物学鉴定;在分化培养基中添加1×10-8mol/L、1× 10-7mol/L睾酮(以无水乙醇为助溶剂对照),收集不同分化时期细胞,比较分化效率;利用RT-qPCR、流式细胞术、免疫荧光检测等方法鉴定分化细胞,并检测生殖功能调控相关基因的表达.结果:CCRM22分化为下丘脑神经祖细胞的效率超过85％,但睾酮处理降低其分化效率;分化细胞表达神经细胞标志物NESTIN以及下丘脑神经祖细胞特异性标志物NKX2.1,同时表达KISS1和雄激素受体(androgen receptor,AR),且AR的表达水平与睾酮浓度呈正相关.结论:成功诱导hESC分化形成下丘脑神经祖细胞,高浓度睾酮处理抑制hESC向下丘脑神经祖细胞分化,该细胞模型可应用于后续体外研究多囊卵巢综合征女性孕早期高雄激素环境对后代下丘脑神经细胞分化和发育的影响.

目的:采用蛋白质组学法探讨C57BL/6J小鼠下丘脑和海马组织中神经干细胞(NSCs)中蛋白质表达差异,阐明不同来源(区域)NSCs中蛋白表达谱不同的原因,为下丘脑和海马组织NSCs的基础研究和移植治疗提供参考.方法:提取出生24 h内C57BL/6J小鼠原代下丘脑和海马组织NSCs,经传代进行扩增和纯化.观察细胞形态表现,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和Sox2的表达,采用串联质谱标签(TMT)蛋白质组学法分析下丘脑和海马组织NSCs中的差异表达蛋白质,对得到的差异蛋白质进行生物信息学分析.结果:形态表现检测,下丘脑和海马组织NSCs均表现出不透明和折光率高的典型神经球形态.免疫荧光检测,下丘脑和海马组织NSCs中Nestin和Sox2阳性表达率随培养代数增加而升高,在第4代达到98％以上,但下丘脑和海马组织NSCs比较差异无统计学意义(P>0.05).蛋白质组学分析,与海马组织比较,下丘脑组织NSCs中有6种蛋白表达水平明显升高(P<0.05和P<0.01),4种蛋白表达水平明显降低(P<0.05和P<0.01).基因本体(GO)分析,差异蛋白质主要参与包括突触传递中多巴胺摄取的负调控等8种生物过程、rRNA甲基转移酶活性等6类分子功能和高尔基体膜的组成部分等6种细胞组分.基因组百科全书(KEGG)通路分析,差异蛋白质主要参与包括囊泡运输中的SNARE相互作用等7条信号通路.结论:体外培养的原代C57BL/6J小鼠下丘脑和海马组织NSCs的形态表现和NSCs标志物表达无差异.某些特定蛋白质表达有差异,差异表达蛋白质主要在突触传递、囊泡转运和代谢等方面发挥作用,在不同区域NSCs的定分化倾向和功能特异性方面可能起重要作用.

右归丸治疗骨质疏松症的作用机制主要为促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化、抑制BMSCs向脂肪细胞分化进而促进成骨细胞分化、增殖,以及通过调控AMPK/mTOR、Wnt/β-catenin等信号通路,下丘脑-垂体-肾上腺轴和神经肽网络来调节骨代谢,从而防治骨质疏松症.

下丘脑正中隆起(mdian eminence,ME)是神经元和少突胶质细胞的可能生态位,营养因素可能通过诱导ME区细胞变化而调控下丘脑功能.为了确定生理条件下休眠的下丘脑干细胞是否存在饮食诱导的可塑性,本研究使用正常饲料、高脂饮食和生酮饮食(一种低碳水、高脂肪的饮食)等不同喂养方式,比较了不同饮食条件下小鼠ME区伸展细胞(tanycytes,TCs)和少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的增殖情况,首次发现生酮饮食可诱导促进ME区OPCs增殖,阻断脂肪酸氧化通路可抑制生酮饮食诱导的OPCs增殖.本研究初步揭示了饮食诱导对ME区OPCs的影响,为进一步研究ME区OPCs的功能提供了启示.