目的 观察增液润燥汤对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺组织相关mRNA和蛋白及外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)表达的影响.方法 将SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组和造模组,造模组通过免疫诱导法建立SS小鼠模型,对照组不予处理,将成模小鼠随机分为模型组、白芍总苷组和增液润燥汤低、中、高剂量组,每组3只.白芍总苷组予白芍总苷溶液0.234 mg/g灌胃,增液润燥汤低、中、高剂量组予增液润燥汤4、8、12 mg/g灌胃,对照组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续60 d.计算小鼠日饮水量、唾液流率、颌下腺指数,HE染色观察小鼠颌下腺组织形态,qPCR检测颌下腺组织同源异形盒基因A1(HOXA1)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、白细胞介素-17(IL-17)、叉头框蛋白P3(FOXP3)mRNA和miR-181c-3p表达,Western blot检测颌下腺组织HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17、FOXP3蛋白表达,流式细胞仪检测外周血Th17、Treg比例.结果 与对照组比较,模型组小鼠日饮水量增加,唾液流率、颌下腺指数降低,颌下腺组织淋巴细胞浸润明显,HOXA1、STAT3、IL-17 mRNA表达升高,FOXP3 mRNA和miR-181c-3p表达降低,HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17蛋白表达升高,FOXP3蛋白表达降低,Th17比例、Th17/Treg升高,Treg比例降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,增液润燥汤各剂量组小鼠日饮水量减少,唾液流率升高,颌下腺组织淋巴细胞浸润均有不同程度减轻,HOXA1、IL-17 mRNA表达降低,FOXP3 mRNA和miR-181c-3p表达升高,HOXA1蛋白表达降低,FOXP3蛋白表达升高,Th17比例、Th17/Treg降低,Treg比例升高,增液润燥汤高剂量组颌下腺指数升高,STAT3 mRNA、蛋白表达及p-STAT3、IL-17蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 增液润燥汤可能通过上调miR-181c-3p、FOXP3表达,下调HOXA1、p-STAT3、STAT3、IL-17表达,调节Th17/Treg细胞平衡,改善SS所致颌下腺功能和组织损伤.

目的 基于转录组学探讨参芪抑瘤方对胃癌前病变(PLGC)模型大鼠的干预机制.方法 采用复合因素造模法构建PLGC大鼠模型.将大鼠随机分为空白组、模型组、叶酸组(0.002 g/kg)和参芪抑瘤方高、中、低剂量组(39.6、19.8、9.9 g/kg),每组10只,分别予相应溶液灌胃,连续90 d.观察大鼠一般状况,HE染色观察胃黏膜形态,免疫荧光染色检测胃组织增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,转录组学筛选差异表达mRNA并富集差异表达通路,ELISA检测胃组织Bcl-xL、C-myc、周期蛋白D1(Cyclin D1)含量,RT-qPCR检测胃组织Bcl-xL、C-myc、Cyclin D1 mRNA表达,Western blot检测胃组织白细胞介素-6(IL-6)、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.05),胃黏膜结构紊乱,胃组织PCNA蛋白表达升高(P<0.05),胃组织Bcl-xL、C-myc、Cyclin D1含量及mRNA表达升高(P<0.05),IL-6、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,参芪抑瘤方高、中剂量组大鼠体质量不同程度升高(P<0.05),各给药组大鼠胃黏膜异常形态均有不同程度改善,参芪抑瘤方各剂量组PCNA蛋白表达降低(P<0.05);转录组测序结果显示,JAK-STAT信号通路在空白组与模型组、模型组与参芪抑瘤方高剂量组中均有显著差异;参芪抑瘤方高、中剂量组大鼠胃组织Bcl-xL、C-myc、Cyclin D1含量及mRNA表达降低(P<0.05),IL-6、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达降低(P<0.05).结论 参芪抑瘤方能改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常形态,其机制与调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路从而抑制细胞增殖有关.

目的:观察人白细胞抗原G(human leukocyte antigen G，HLA-G)在人T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus type 1，HTLV-1)阳性T细胞中的表达情况，研究其在影响HTLV-1感染发生发展中的作用。方法:采用Western blot及real-time PCR检测HLA-G在HTLV-1阳性T细胞系(MT2和MT4)中的表达。构建HLA-G基因沉默的siRNA，用于敲低MT2和MT4细胞中的HLA-G，在mRNA和蛋白质水平观察HLA-G对HTLV-1蛋白Tax、P19表达的影响，同时在RNA水平监测HLA-G基因沉默后MT2和MT4细胞中细胞因子的表达变化。CCK8法观察MT2和MT4细胞的增殖能力，Western blot检测信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)通路相关蛋白。结果:与HTLV-1阴性T细胞(Jurkat和MOLT4)比较，MT2和MT4细胞均高表达HLA-G分子。siRNA敲低MT2和MT4细胞中的HLA-G后，HTLV-1 Tax和P19的mRNA和蛋白质表达水平均下降，抗病毒因子IFN-γ和TNF-α表达升高，MT2和MT4细胞的增殖能力和STAT3磷酸化水平均降低。结论:HTLV-1能诱导T细胞高表达免疫耐受分子HLA-G，抑制HLA-G表达可促进抗病毒因子的产生，降低IL-6及STAT3磷酸化水平，从而有效抑制HTLV-1的复制。

目的:探讨间质干细胞成骨过程中外泌体转运的miRNA-222-5p对肌腱细胞损伤的修复作用及其机制。方法:收集、分离和鉴定间质干细胞外泌体。小鼠跟腱切断后1周安乐死后取其肌腱，分离培养肌腱细胞，得到肌腱细胞损伤模型（损伤组）；将成骨分化过程中的间质干细胞与肌腱细胞共培养（共培养组）；将miRNA-222-5p模拟物转染进间质干细胞，成骨分化过程中的间质干细胞与肌腱细胞共培养（miRNA-222-5p组）。通过克隆形成、Transwell观察间质干细胞分泌外泌体及外泌体转运的miRNA-222-5p对肌腱细胞损伤修复的能力；qPCR、Western-blot和荧光染色检测成软骨和成骨相关蛋白的相对mRNA和相对蛋白表达水平；通过Western-blot检测信号通路因子的表达。结果:电镜观察外泌体直径为40~100 nm，形态为典型的杯口状结构。外泌体标志蛋白热休克蛋白70、多配体聚糖结合蛋白1、肿瘤转移抑制因子9、肿瘤转移抑制因子63和肿瘤易感基因101的相对表达量分别为2.56±0.22、2.06±0.42、1.96±0.32、1.94±0.38、1.86±0.33，与正常对照组比较差异均有统计学意义（ P<0.05）。克隆形成试验后细胞群落数量：损伤组（4.00±0.58）个、共培养组（7.25±0.48）个、miRNA-222-5p组（16.00±1.35）个，差异有统计学意义（ F=46.550， P<0.001）。Transwell试验后细胞数量：损伤组（37±4）个、共培养组（78±3）个、miRNA-222-5p组（168±8）个，差异有统计学意义（ F=454.100， P<0.001）。qPCR、Western-blot和荧光染色检测结果显示，与损伤组相比，共培养组细胞中Sry相关HMG盒9、Ⅱ型胶原纤维α1基因、蛋白聚糖、骨形态发生蛋白2、Runt相关转运因子2和骨桥蛋白的mRNA和蛋白质表达量增加；与共培养组相比，miRNA-222-5p组细胞mRNA和蛋白质表达量均增加（ P<0.05）。Western-blot结果显示，与损伤组相比，共培养组核因子κB、细胞外调节蛋白激酶2、信号传导与转录激活因子3、信号传导与转录激活因子5和细胞信号转导分子2的表达水平升高；与共培养组相比，miRNA-222-5p组的表达升高（ P<0.05）。 结论:间质干细胞与跟腱细胞共培养可促进跟腱细胞成骨分化，同时间质干细胞来源的外泌体可通过转运miRNA-222-5p进一步促进跟腱细胞成骨分化。其机制可能与损伤肌腱中信号通路因子核因子κB、细胞外调节蛋白激酶2、信号传导与转录激活因子3、信号传导与转录激活因子5和细胞信号转导分子2的表达上调有关。

目的:探讨骨碎补总黄酮(TFRD)对幼兔激素性股骨头缺血坏死病程及凋亡相关蛋白表达的影响及其可能机制。方法:动物实验研究。选用2月龄健康新西兰白兔110只，按随机数字表法分为对照组(10只)、模型组(50只)、TFRD组(50只)。模型组及TFRD组行双侧臀肌交替注射醋酸泼尼松龙注射液(7.5 mg/kg)，每周2次，对照组同部位同频次注射等体积生理盐水(0.3 mL/kg)；TFRD组于第1次注射醋酸泼尼松龙开始每天灌服TFRD溶液(35 mg/kg)，对照组及模型组每日灌服等体积生理盐水6 mL，连续8周。根据是否发病将模型组分为模型发病组及模型未发病组；将TFRD组分为TFRD发病组及TFRD未发病组。造模结束后，取双侧股骨头行病理学检查；酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组股骨头组织中磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(P-JAK2)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(P-STAT3)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)及凋亡相关因子表达情况；实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、SOCS3相对表达情况。结果:模型组坏死发生率22.86%(8/35)；TFRD组坏死发生率15.79%(6/38)。微型计算机断层扫描技术示：与模型发病组比较，TFRD发病组骨体积分数和骨小梁厚度较高，骨小梁分离度较低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。病理染色示：TFRD未发病组较其他实验组骨小梁形态更完整、骨小梁周围可见成骨细胞、空骨陷窝更少，病理变化得到明显改善。ELISA显示：与模型发病组比较，TFRD发病组P-JAK2、P-STAT3、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)相关X蛋白、半胱氨酸蛋白酶3表达均下降，Bcl-2表达增高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。qPCR示：与模型发病组比较，TFRD发病组JAK2、STAT3、SOCS3表达下调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:TFRD可以经JAK2/STAT3/SOCS3通路抑制幼兔激素性股骨头缺血坏死骨组织中促凋亡因子表达，减缓幼兔激素性股骨头缺血坏死病程。

目的:通过检测SLE患者长链非编码RNA（lncRNA）的表达变化，初步探索差异表达的lncRNA与调节性T细胞（Treg）数量间的联系，分析Treg相关lncRNA与SLE患者临床特征间的相关性，预测lncRNA调节Treg分化发育的机制，为SLE的治疗提供新思路。方法:收取9例活动期SLE患者外周血，提取PBMCs，用全转录组测序分析PBMCs的lncRNA表达谱，以9名健康人作为对照组，筛选差异表达的lncRNA，采用Pearson检验分析lncRNA与Treg数的相关性，以及Treg相关lncRNA与SLE患者SLEDAI评分、ESR、C3、C4之间的相关性，用miRcode和Targetscan数据库及共表达网络预测Treg相关lncRNA的靶向基因。结果:与健康对照组相比，SLE患者有240个差异表达lncRNA，包括134个高表达的lncRNA（ P<0.05），106个低表达的lncRNA（ P<0.05），其中ANKRD44-AS1（ r=0.74， P=0.022）、LINC00200（ r=0.70， P=0.037）、AP001363.2（ r=0.78， P=0.014）、LINC02824（ r=0.79， P=0.011）的表达量与外周血Treg数目呈正相关，AP000640.1（ r=-0.72， P=0.028）、AC124248.1（ r=-0.77， P=0.016）、LINC00482（ r=-0.83， P=0.005）、MIR503HG（ r=-0.96， P<0.001）的表达量与外周血Treg数目呈负相关，在这8种Treg相关lncRNA中，LINC00482（ r=-0.73， P<0.05）、MIR503HG（ r=-0.76， P<0.05）的表达量与C3呈负相关。与Treg相关的LINC00200、ANKRD44-AS1、AP000640.1通过竞争性结合miRNA或反式调控机制调控信号传导及转录激活因子5（STAT5）、磷脂酶D1（PLD1）、单一顺式结构蛋白X（HOPX）、Runt相关转录因子3（RUNX3）的表达，进而调控Treg的分化发育。 结论:SLE患者lncRNA表达谱发生变化，差异表达的lncRNA与SLE患者Treg数量和功能异常有关，并且Treg相关lncRNA与SLE疾病活动相关，其可能通过竞争性结合miRNA或反式调控机制影响STAT5、PLD1、HOPX、RUNX3的表达，调节Treg功能，参与SLE的发病和疾病进展。

目的:探讨用小干扰RNA（siRNA）沉默信号传导和转录激活因子6（signal transducer and activator of transcription 6，STAT6），能否抑制小鼠嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎（eosinophilic chronic rhinosinusitis，ECRS）的产生。方法:2022年3—9月期间，48只BALB/c雌性小鼠随机分为Control（对照）组、Vehicle（转染试剂）组、Scramble siRNA（对照siRNA）组和STAT6 siRNA组，每组12只。用卵清蛋白（OVA）联合金黄色葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxin B，SEB）诱导小鼠ECRS，并用siRNA鼻腔滴注进行干预。随后收集外周血以及鼻黏膜组织标本。血细胞分析仪检测外周血嗜酸粒细胞（Eos）的数目及百分比；酶联免疫吸附实验检测外周血总免疫球蛋白E（IgE）和OVA-特异性IgE（OVA-sIgE）水平，以及鼻黏膜组织中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-5、IL-17A和嗜酸粒细胞趋化因子1（Eotaxin-1）的表达量；用苏木精-伊红（HE）染色鼻黏膜组织切片，在高倍视野（HPF）下对Eos进行计数；蛋白免疫印迹检测鼻黏膜中STAT6和磷酸化STAT6（p-STAT6）蛋白水平；免疫荧光染色对鼻黏膜中p-STAT6表达进行定位。采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果:STAT6 siRNA组小鼠外周血Eos计数、Eos百分比、总IgE以及OVA-sIgE水平［（0.318±0.045）×10 3/μl、（3.667±0.479）%、（102.070±13.205）ng/ml和（38.870±7.352）ng/ml］明显低于Vehicle组［（0.532±0.049）×10 3/μl、（6.710±1.061）%、（203.102±29.653）ng/ml和（74.575±6.432）ng/ml， Z值分别为-2.56、-2.24、-2.40、-2.56， P值均<0.05］和Scramble siRNA组［（0.493±0.036）×10 3/μl、（5.858±0.872）%、（189.964±30.042）ng/ml和（80.935±8.358）ng/ml， Z值分别为-2.17、-2.08、-2.24、-2.72， P值均<0.05］，且鼻黏膜组织中IL-5和Eotaxin-1表达量分别为（312.279±34.281）pg/ml和（25.297±4.323）pg/ml，也显著低于Vehicle组［（689.667±31.905）pg/ml、（68.278±6.485）pg/ml， Z值分别为-2.73、-2.88， P值均<0.01］和Scramble siRNA组［（661.783±42.094）pg/ml、（63.015±7.416）pg/ml， Z值分别为-2.72、-2.81， P值均<0.01］。STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜组织Eos计数为（29.132±4.163）/HPF，明显低于Vehicle组［（78.050±7.912）/HPF， Z=-2.88， P<0.01］和Scramble siRNA组［（73.864±8.671）/HPF， Z=-2.72， P<0.01］。STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜组织中STAT6蛋白相对表达水平为0.105±0.021，与Control、Vehicle及Scramble siRNA组（0.232±0.037、0.243±0.039、0.228±0.032）相比显著降低（ Z值分别为-2.25、-2.49、-2.56， P值均<0.05）。与Vehicle组（0.613±0.046）和Scramble siRNA组（0.641±0.050）相比，STAT6 siRNA组p-STAT6蛋白相对水平（0.292±0.038）明显下降（ Z值分别为-2.81、-2.88， P值均<0.01）。免疫荧光染色结果显示，p-STAT6主要位于鼻黏膜上皮细胞及炎性细胞的细胞核中，STAT6 siRNA组小鼠鼻黏膜中表达p-STAT6的绿色荧光弱于Vehicle及Scramble siRNA组。 结论:经鼻滴入STAT6 siRNA可下调鼻黏膜STAT6表达，降低p-STAT6水平，抑制ECRS产生。

目的:观察局部晚期下咽癌患者术前同步放化疗后肿瘤退缩的病理学特点及放化疗抵抗相关分子标志物的表达水平变化。方法:回顾性分析2016年8月至2020年8月山东省耳鼻喉医院头颈外科44例行术前同步放化疗的局部晚期下咽癌患者临床资料。所有患者先行同步放化疗，放化疗结束后行电子喉镜及影像学检查评估肿瘤退缩状况，4周后进行手术治疗，术后对原发灶标本进行连续病理大切片处理，HE染色及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测残存癌灶的分布特点和凋亡情况，免疫组化检测残存癌灶的增殖情况及放化疗抵抗相关分子标志物信号传导与转录激活因子3（STAT3）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、性别决定区Y框蛋白2（SOX2）、p53的表达水平。结果:共纳入44例患者，均为男性，年龄（58.3±3.5）岁。其中梨状窝癌40例，下咽后壁癌4例；T3期29例，T4期15例；Ⅲ期6例，Ⅳ期38例。44例患者同步放化疗后根据实体瘤疗效评价标准（RECIST）原发部位达到完全缓解（CR）13例，部分缓解（PR）22例，疾病稳定（SD）9例。原发灶切除方式包括下咽环周切除19例，全喉部分下咽切除2例；环状软骨上次全喉切除环舌固定术23例。22例PR患者中，大PR（缓解率≥70%）10例，小PR（缓解率<70%）12例。所有原发灶切除患者术后病理大切片HE染色发现残存癌灶的患者30例（68.2%）；其中CR患者中3例检测到残存癌灶（3/13），均为局部癌灶残留；大PR患者中6例检测到残存癌灶（6/10），4例为散在分布，2例为局部癌灶残留；小PR及SD患者均检测到大片残存癌灶。TUNEL法对有残存癌灶的30例标本进行检测均未发现凋亡现象且Ki-67的阳性表达率均<10%。放化疗抵抗相关分子标志物检测发现残存癌灶中19例（63.3%）STAT3（3.40±2.49比5.23±3.02， t=-2.932， P=0.007）及22例（73.3%）HIF-1α（3.73±2.66比6.97±3.05， t=-4.45， P<0.001）表达量高于放化疗前，其余分子标志物在放化疗前后差异无统计学意义（均 P>0.05）。所有患者均随访满3年，2年生存率为59.3%，3年生存率为54.1%。 结论:术前放化疗可使部分局部晚期下咽癌患者在临床评估上达到完全或明显缓解，但病理检测仍可见部分残存癌灶且抗凋亡能力增强、增殖活性降低。

鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)是肺癌的驱动基因，其突变常发生于经表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗后耐药的肺腺癌中，因患者预后较差且尚未有针对性靶向药物而引起关注。近年研究发现KRAS突变可通过影响信号传导和转录激活因子3(STAT3)、G蛋白偶联受体(GPCR)、程序性死亡受体-配体1(PD-L1)的表达、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的活化及多种基因的共突变促进肿瘤进展，影响治疗和预后。新型小分子KRAS G12C抑制剂AMG 510的Ⅰ期临床试验结果为治疗提供了希望。总结KRAS突变肺腺癌的发病机制、预后相关因素、靶向治疗及免疫治疗等，有助于提高对KRAS突变的认识，为后续研究提供思路与依据。

目的:探讨前B淋巴细胞白血病转录因子(PBX1)基因表达对肺癌细胞凋亡、ROS含量和STAT3信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肺癌及癌旁组织中PBX1基因的表达水平，分析PBX1基因表达水平与患者临床病理特征的关系。采用Western blot法检测人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞株中PBX1蛋白的表达水平。应用脂质体法转染空白对照(空白组)、阴性对照(阴性组)和PBX1小干扰RNA(siPBX1组)至A549细胞，采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和ROS含量，采用Western blot检测各组细胞中PBX1、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平。结果:肺癌组织中PBX1信使RNA的表达水平(2.36±0.23)高于癌旁组织(1.02±0.15)，差异有统计学意义( P<0.05)。PBX1基因表达水平与肺癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期均有关(均 P<0.05)。PBX1蛋白在人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞中的表达水平分别为0.454±0.038、0.403±0.034、0.311±0.028和0.377±0.035，与人正常肺MRC-5细胞(0.041±0.007)比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。转染PBX1 siRNA的A549细胞中，PBX1蛋白的表达水平(0.082±0.010)低于空白组(0.704±0.065)，差异有统计学意义( P<0.05)。siPBX1组细胞的凋亡率和ROS含量分别为(30.78±3.64)%和51.55±5.03，与空白组[分别为(3.92±0.27)%和22.36±1.31]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。p-STAT3、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平分别为0.051±0.006、0.202±0.018和0.068±0.008，与空白组(分别为0.172±0.010、0.425±0.041和0.196±0.021)比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:抑制PBX1基因的表达可诱导肺癌细胞凋亡，其机制可能与ROS产生和STAT3信号的下调有关。