目的 基于转录组学探讨参芪抑瘤方对胃癌前病变(PLGC)模型大鼠的干预机制.方法 采用复合因素造模法构建PLGC大鼠模型.将大鼠随机分为空白组、模型组、叶酸组(0.002 g/kg)和参芪抑瘤方高、中、低剂量组(39.6、19.8、9.9 g/kg),每组10只,分别予相应溶液灌胃,连续90 d.观察大鼠一般状况,HE染色观察胃黏膜形态,免疫荧光染色检测胃组织增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,转录组学筛选差异表达mRNA并富集差异表达通路,ELISA检测胃组织Bcl-xL、C-myc、周期蛋白D1(Cyclin D1)含量,RT-qPCR检测胃组织Bcl-xL、C-myc、Cyclin D1 mRNA表达,Western blot检测胃组织白细胞介素-6(IL-6)、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.05),胃黏膜结构紊乱,胃组织PCNA蛋白表达升高(P<0.05),胃组织Bcl-xL、C-myc、Cyclin D1含量及mRNA表达升高(P<0.05),IL-6、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,参芪抑瘤方高、中剂量组大鼠体质量不同程度升高(P<0.05),各给药组大鼠胃黏膜异常形态均有不同程度改善,参芪抑瘤方各剂量组PCNA蛋白表达降低(P<0.05);转录组测序结果显示,JAK-STAT信号通路在空白组与模型组、模型组与参芪抑瘤方高剂量组中均有显著差异;参芪抑瘤方高、中剂量组大鼠胃组织Bcl-xL、C-myc、Cyclin D1含量及mRNA表达降低(P<0.05),IL-6、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达降低(P<0.05).结论 参芪抑瘤方能改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常形态,其机制与调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路从而抑制细胞增殖有关.

目的 观察参芪地黄汤结合重组人促红细胞生成素与左卡尼汀治疗对终末期肾病患者肾功能的影响及Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)途径的调控作用.方法 选择 2019 年 10 月至 2021 年10 月在邢台医学高等专科学校第二附属医院就诊的 144 例终末期肾病患者作为研究对象.将患者按随机数字表法分参芪地黄汤治疗组和常规治疗组,每组 72 例.两组患者均行维持性血液透析,常规治疗组给予重组人促红细胞生成素和左卡尼汀治疗,参芪地黄汤治疗组加用参芪地黄汤(组成:生黄芪、桑寄生、旱莲草、猪苓、茯苓皮、生薏苡仁、丹参、石韦各 30 g,党参、山茱萸、泽兰、淮山药各 15 g,生地黄、荔枝核、蚕砂、莪术各 10 g,决明子 6g),每日 1 次,共治疗 3 个月.观察不同治疗方式两组患者治疗后的临床疗效和肾功能、微炎症状态及血清JAK/STAT途径相关蛋白水平的变化,并记录不良反应发生情况.结果 参芪地黄汤治疗组总有效率高于常规治疗组[90.28%(64/72)比 77.78%(55/72),P＜0.05].两组治疗后残余肾功能(RRF)、24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和炎症因子[超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(LL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平均较治疗前明显降低,参芪地黄汤治疗组治疗后RRF明显高于常规治疗组(mL/min:4.82±1.18比 3.96±1.05),而 24h尿蛋白(mg:62.26±12.16 比 97.71±16.28)、BUN(mmol/L:16.25±3.64 比 20.65±4.13)、SCr(μmol/L:242.25±25.62 比 280.62±26.63)、hs-CRP(mg/L:5.86±1.15 比 7.78±1.32)、IL-6(ng/L:3.26±0.64比 4.62±1.13)、TNF-α(μg/L:29.23±5.64 比 32.66±6.13)含量均明显低于常规治疗组(均P＜0.05).治疗后参芪地黄汤治疗组JAK、STAT均较治疗前呈增加趋势,而磷酸化JAK(p-JAK)、磷酸化STAT(p-STAT)均较治疗前呈降低趋势(均P＜0.05),常规治疗组血清JAK/STAT途径相关蛋白水平变化不显著(均P＞0.05),故参芪地黄汤治疗组治疗后JAK、STAT均明显高于常规治疗组[JAK(μg/L):1.46±0.28 比 1.26±0.26,STAT(μg/L):1.37±0.25 比 0.99±0.24,均P＜0.05],p-JAK、p-STAT均明显低于常规治疗组[p-JAK(μg/L):0.45±0.08 比0.65±0.13,p-STAT(μg/L):0.66±0.13 比 0.82±0.28,均P＜0.05].两组患者不良反应发生率差异无统计学意义[13.88%(10/72)比 9.72%(7/72),P＞0.05].结论 在重组人促红细胞生成素与左卡尼汀治疗基础上服用参芪地黄汤可有效抑制JAK/STAT信号通路,改善终末期肾病患者肾功能以及微炎症状态,从而提高治疗效果.

目的:探究参芪扶正注射液(Shenqifuzheng injection,SFI)联合PD-L1抗体对肿瘤免疫微环境的影响及其疗效研究.方法:构建B16F10-LUC黑色素瘤皮下移植瘤模型,采用免疫组化技术标记抗体 Ki67、CD31、CD8、CD16、CD163、FOXP3、LY6C、LY6G检测肿瘤组织中CD8+T细胞、Treg细胞、NK细胞、MDSCs细胞、中心粒细胞的表达情况,进一步应用流式细胞技术检测脾脏组织中CD11c+、IA/IE+、CD80+细胞的比值,以及肿瘤组织中CD8+T、CD4+T、Treg的比值.结果:免疫组化结果显示,相较于对照组,给药组可以显著抑制肿瘤血管生成、肿瘤细胞增殖,降低免疫抑制细胞因子CD4+T细胞、Treg细胞、MDSCs细胞、中性粒细胞的表达水平,促进CD8、NK的浸润(P＜0.05,P＜0.01).流式结果显示,给药组明显提升了肿瘤组织CD8+T细胞,脾脏中DC细胞的表达水平,抑制CD4+T、Treg细胞的浸润(P＜0.05,P＜0.01).肿瘤体积大小结果显示,给药组明显抑制肿瘤的生长,单用PD-L1抗体抑瘤率优于单用SFI组,联合用药优于单用PD-L1抗体组(P＜0.01).结论:参芪扶正注射液联合PD-L1抗体可以发挥协同抗肿瘤的作用,且可能与增强DC细胞浸润,促进T细胞活化有关,免疫组化结果提示对肿瘤免疫微环境也具有很好的改善.

目的 基于调控VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病(DKD)小鼠的保护作用及机制.方法 将 24 只雄性db/db小鼠随机分为模型组、中药组(补阳还五汤合参芪地黄汤化裁,生药量 24.44 g·kg-1)和西药组(厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1),每组 8 只,另外取 8 只db/m小鼠作为对照组.灌胃给药,每日 1 次,连续 12 周.检测小鼠血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿白蛋白/肌酐比值(ACR)及肾脏指数;采用HE、Masson染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子受体 3(VEGFR3)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、平足蛋白(PDPN)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素 1β(IL-1β)的表达;Western Blot法检测肾脏组织ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达;Real-time PCR 法检测肾脏组织 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠的血清FBG、TG、TC、ACR水平及肾脏指数均明显升高(P＜0.05);肾小球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润,肾小管萎缩,纤维化水平明显升高(P＜0.05);肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达,胞质中VEGF-C蛋白表达及肾小管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显上调(P＜0.05);肾脏组织中ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达均明显上调(P＜0.05);肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA表达水平均明显升高(P＜0.05).与模型组比较,中药组小鼠的血清TG、TC、ACR水平均明显降低(P＜0.05);肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平明显降低(P＜0.05);肾间质中FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达,胞质中VEGF-C蛋白表达及肾小管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显下调(P＜0.05);肾脏组织中ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明显下调(P＜0.05);肾脏组织中FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低DKD小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制可能与调控VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生有关.

目的:探讨参芪抑瘤方联合顺铂经ERK介导C-Myc/PD-L1相协途径对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制.方法:60只SPF级雄性昆明小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其余50只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组[2.5×10-3 g/(kg·3 d)]、参芪抑瘤方低[13.515 g/(kg·d)]、中[27.030 g/(kg·d)]、高剂量[54.060 g/(kg·d)]联合顺铂[2.5×10-3 g/(kg·3 d)]组,每组10只,治疗13 d,末次给药24 h后,麻醉处死小鼠,测定小鼠肿瘤抑制率和脾指数、胸腺指数;HE染色观察小鼠肿瘤组织病理学变化;ELISA试剂盒检测肿瘤组织匀浆液中EGF、IFN-γ含量;IHC法和Western blot法检测肿瘤组织中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达;RT-PCR法检测肿瘤组织中ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达水平.结果:与空白组相比,模型组小鼠平均体质量和脾脏指数均降低(P<0.05);与模型组相比,各治疗组肿瘤抑制效果明显,且参芪抑瘤方联合顺铂组以剂量依赖性方式抑制肝癌小鼠肿瘤生长,提高小鼠平均体质量和脾指数、胸腺指数,促进肿瘤细胞坏死,增加坏死面积,降低肿瘤组织中EGF和IFN-γ含量以及p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达(P<0.05);与顺铂组相比,参芪抑瘤方中、高剂量联合顺铂组治疗效果显著,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,显著下调肿瘤组织中C-Myc与PD-L1蛋白表达,该机制可能通过调控ERK信号通路相关蛋白表达发挥抑瘤作用.

目的:基于网络药理学及动物实验分析参芪解郁方治疗产后抑郁症(PPD)的作用机制.方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和Uniprot数据库对参芪解郁方药物进行成分和靶点的处理收集,再借助GeneCards数据库对疾病靶点进行收集,与药物靶点取"药物-疾病"交集,获得核心靶点,使用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.运用Metascape平台进行基因本体(GO)与京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.最后通过造模和药物对大鼠进行干预后,予以旷场实验、强迫游泳实验和蔗糖水消耗实验进行行为学评估,再利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1 β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果:筛选到57个参芪解郁方相关活性成分,对应产后抑郁症的潜在作用靶点103个,关键成分有槲皮素、β-谷甾醇、植物甾醇等,核心靶点涉及IL-6、TNF、IL-1β等,主要通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、雌激素、T细胞抗原受体等通路发挥药效.动物实验显示参芪解郁方可以提高大鼠旷场实验水平得分、垂直得分及蔗糖水消耗量,减少强迫游泳不动时间,降低大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平.结论:参芪解郁方治疗产后抑郁症具有多通路-多靶点的特性,其机制与参芪解郁方的免疫调节作用有关.

目的 应用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)技术和网络药理学方法,鉴定参芪扶正注射液的主要成分,探究其治疗三阴性乳腺癌(TNBC)的作用机制,为其药效物质基础研究提供依据.方法 ①参芪扶正注射液主要成分鉴定:采用UPLC-Q-TOF-MS技术,结合天然产物高分辨质谱数据库及相关文献,明确参芪扶正注射液的主要成分.②网络药理学研究:基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中草药化合物蛋白质靶标数据库(HIT)、有机小分子生物活性数据库(PubChem)、化合物靶点预测平台(Swiss Target Prediction)、本草组鉴数据库(HERB)获取参芪扶正注射液主要成分的潜在靶点,利用人类基因综合数据库(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、治疗靶点数据库(TTD)获得TNBC疾病潜在靶点,二者相结合得到参芪扶正注射液治疗TNBC的潜在靶点;运用蛋白互作关系数据库(STRING)平台、Cytoscape 3.9.1软件构建蛋白互作网络图并进行网络拓扑分析,获得参芪扶正注射液治疗TNBC的关键靶点;运用R语言进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.③动物实验验证:制备异种移植瘤乳腺癌小鼠模型,分为模型组与参芪扶正注射液低、中、高剂量(20、40、60 mL/kg)组,干预4周后取肿瘤组织,运用Western blot方法检测肿瘤组织中磷酸化磷脂肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂肌醇3激酶(PI3K)、P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)表达情况,并对预测潜在靶点进行实验验证.结果 ①参芪扶正注射液的主要成分为党参炔苷、鸟苷、毛蕊异黄酮苷、壬二酸、黄芪甲苷、美迪紫檀苷等.②网络药理学研究结果显示,参芪扶正注射液的主要成分主要作用于肿瘤蛋白p53(TP53)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、己糖激酶2(HK2)、缺氧诱导因子1亚基α(HIF1A)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(CASP9)、ABCG2、ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、原癌基因(MYC)等关键靶点,调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、T细胞受体等信号通路.③动物实验验证结果显示,参芪扶正注射液降低了实验动物肿瘤组织中p-PI3K水平,抑制了P-gp和ABCG2的表达.结论 参芪扶正注射液中的主要成分为党参炔苷、鸟苷、毛蕊异黄酮苷、壬二酸、黄芪甲苷、美迪紫檀苷等,其抗TNBC的作用机制与其通过调控PI3K信号通路和调节耐药相关蛋白表达有关.

目的 基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及相关免疫指标的影响.方法 50只SPF级雄性KM小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其40只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组(2.5×10-3 g·kg-1)、参芪抑瘤方中药组(27.03 g·kg-1)、参芪抑瘤方(27.03 g·kg-1)联合顺铂组(2.5×10-3 g·kg-1),每组10只,治疗13天,测定抑瘤率、脾指数和胸腺指数;苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)观察肿瘤病理学变化;流式细胞术检测脾组织中CD4+T、CD8+T细胞水平;实时荧光定量PCR(Realtime PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein,HMGB1)/TOLL样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路相关的基因与蛋白表达.结果 ①与空白组相比,模型组小鼠平均体质量及小鼠脾指数、胸腺指数、CD4+T细胞水平以及CD4+T/CD8+T值均显著降低、CD8+T细胞水平升高(P<0.05);②与模型组相比,各治疗组小鼠平均瘤质量降低(P<0.05),瘤体积减小(P<0.05),体质量升高(P<0.05),中药组和联合组小鼠脾指数、胸腺指数、CD4+T细胞水平以及CD4+T/CD8+T比值均升高,CD8+T细胞水平降低,且中药组治疗效果显著(P<0.05),小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低,且联合组效果显著(P<0.05);③与顺铂组相比,联合组小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05);④与中药组相比,联合组小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05).结论 参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长,提高相关免疫指标,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路活化有关.

目的 探讨参芪糖肾安胶囊含药血清对脂多糖(LPS)损伤的肾小管上皮细胞活性、超微结构及NLR蛋白 3(NLRP3)炎性小体的影响.方法 随机将HK-2细胞分为空白组(HK-2+75 μL7.5％空白血清)、LPS组(HK-2+LPS+75 μL 7.5％空白血清)、低浓度组(HK-2+LPS+75 μL2.5％含药血清+75 μL7.5％空白血清)、中浓度组(HK-2+LPS+75 μL 5％含药血清+75 μL5％空白血清)、高浓度组(HK-2+LPS+150 μL 10％含药血清).采用CCK-8法检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用电镜检测细胞的超微结构;采用蛋白质印迹检测细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达.结果 与空白组相比,LPS组细胞存活率降低,凋亡率及细胞中IL-6、IL-1 β、TNF-α水平增高,差异有统计学意义(P＜0.05);与LPS组相比,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞存活率均增高,凋亡率及细胞中IL-6、IL-1 β、TNF-α水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).LPS组较空白组出现明显的程序性坏死,细胞体积变大,胞膜大量破裂,细胞大量坏死;与LPS组相比,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞均有明显改善,坏死的细胞数量减少,仅可见少量细胞线粒体轻度肿胀和空泡样变,且呈剂量依赖性.与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与LPS组相比,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达降低,且高浓度组细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达低于低浓度组和中浓度组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 参芪糖肾安胶囊含药血清可抑制LPS损伤的肾小管上皮细胞凋亡,增加细胞存活率,改善超微结构,抑制NLRP3炎性小体介导的炎性反应,对急性肾损伤发挥保护作用.

目的:探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾小球足细胞凋亡的影响.方法:制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA),复制膜性肾病小鼠模型.将40 只模型小鼠随机分为模型组、参芪蛭龙汤高、低剂量组和雷公藤多苷片组,另取10 只正常小鼠作为正常组.连续给药4 周后,处死小鼠,HE、Masson、PAS染色观察肾组织病理变化;RT-PCR检测肾组织Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Bax(/BCL2-相关 X蛋白)、Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶 3)mRNA表达变化;Western blot检测肾组织Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达变化.结果:HE染色发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组肾小球体积减小,仅有炎性细胞浸润减少;Masson染色可见,与模型组比较,各给药组可见肾小球体积减小,基底膜增厚及组织纤维化减轻;PAS染色可见,各给药组基底膜病变较模型组显著减轻,参芪蛭龙汤高剂量组并未出现明显基底膜增厚等改变.RT-PCR结果显示,与模型组比较,参芪蛭龙汤各组小鼠肾组织Bax、Caspase-3 mRNA表达减少(P＜0.01),Bcl-2 mRNA表达增加(P＜0.01);Western blot结果发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠肾组织 Bax、Caspase-3 蛋白表达减少(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达增加(P＜0.01).结论:参芪蛭龙汤能够改善膜性肾病小鼠肾组织病变,抑制肾小球足细胞凋亡.