目的 确定生地黄Rehmanniae Radix的性味功效物质基础,阐明生地黄及其拆分组分的寒热药性归属以及中药药性的内部精细结构.方法 采用水煎煮法、水提醇沉法和色谱分离技术,对生地黄的主要化学成分进行拆分.在建立寒证大鼠模型的基础上,测定与能量代谢,和物质代谢密切相关的生理生化指标.同时,对大鼠尿液进行代谢组学分析,筛选出各给药组大鼠尿液中的差异代谢物,从而确定潜在的生物标志物和代谢通路.结果 水煎液、多糖、环烯醚萜苷对寒证模型大鼠呈现相同的药性作用倾向,均能降低肝组织Na+,K+-三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活性和血浆中三碘甲状腺原氨酸(3,5,3'-triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、丙酮酸(pyruvic acid,PA)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的水平及琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性,升高血浆中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)活性.低聚糖对寒证模型大鼠呈现相反的药性作用倾向,能升高大鼠肝组织Na+,K+-ATP酶活性和血浆中T3、T4、PA、DA、NE的水平及SDH活性,降低血浆中AchE活性.结论 水煎液、多糖、环烯醚萜苷抑制能量代谢和物质代谢,具有寒凉性;低聚糖促进能量代谢和物质代谢,具有温热性.

目的 研究大苞鞘石斛Dendrobium wardianum茎中的酚类化学成分.方法 运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、半制备液相色谱和制备薄层色谱等分离技术进行分离纯化.通过1H-NMR、13C-NMR、X射线单晶衍射、质谱等波谱数据和理化性质对化合物结构进行鉴定.结果 从大苞鞘石斛茎中共分离得到31个酚类化合物,分别鉴定为4-羟基-3,3',5'-三甲氧基联苄(1)、denbinobine(2)、柚皮素(3)、3,3'-二羟基-5,5'-二甲氧基联苄(4)、3,4'-二羟基-5-甲氧基联苄(5)、5,7-二羟基色原酮(6)、dihydrotricin(7)、4,5-二羟基-3,7-二甲氧基-9,10-二氢菲(8)、1,4,7-三羟基-5-甲氧基芴酮(9)、二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯(10)、4,4'-二羟基-3,5-二甲氧基联苄(11)、(+)-丁香脂(12)、(+)-杜仲树脂酚(13)、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺(14)、丁香酸(15)、二氢松柏醇(16)、苜蓿素(17)、3,5,4'-三羟基-3'-甲氧基联苄(18)、threo-7-O-ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl)propionyl-guaiacylglycerol(19)、balanophonin(20)、ω-hydroxypropioguaiacone(21)、对羟基苯甲醛(22)、3-hydroxy-l-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)propan-1-one(23)、(-)-铁皮石斛素 B(24)、(+)-铁皮石斛素 B(25)、dendrowillol A(26)、香草醛(27)、dihydro-p-cinnamic acid(28)、p-hydroxyphenethyl trans-ferulate(29)、对羟基苯甲酸(30)、对羟基肉桂酸(31).结论 首次获得了铁皮石斛素B的单晶并通过X射线单晶衍射,发现该化合物为一对外消旋体,其绝对构型分别为2S,3S和2R,3R,并对铁皮石斛素B进行了手性拆分.化合物20、25首次从石斛属植物中分离得到,化合物5、6、14、19、24、26、29、31均为首次从大苞鞘石斛中分离得到.

目的 通过探索影响肺腺癌预后、分期和免疫微环境的标志物来预测患者的生存预后.方法 利用R语言Limma包筛选从UCSC基因组网站上获得的差异表达基因(DEGs);应用clusterProfiler包进行GO和KEGG通路富集分析.随机拆分样本方法将数据划分为训练集和验证集(比率=0.6∶0.4).应用LASSO算法和随机森林算法来选择预测因子并构建列线图;研究CACNA2D2和CD79A的免疫浸润与预后的关系并采用ROC曲线和DCA曲线评价列线图的临床应用价值.通过 Western印迹法和qRT-PCR实验分析肺腺癌细胞CACNA2D2、CD79A mRNA和蛋白表达水平.采用免疫组织化学染色检测48例肺腺癌患者肿瘤组织CACNA2D2和CD79A表达情况.结果 共鉴定出42个上调差异基因和19个下调差异基因,只有CACNA2D2和CD79A与肿瘤分期和生存预后高度相关.其中,CD79A的过表达与免疫反应相关.CACNA2D2和CD79A低表达组的肺腺癌患者出现淋巴结转移和较差预后的风险显著增加.构建了基于关键基因的列线图模型,使用ROC曲线和DCA曲线对模型进行验证.实验结果发现肺腺癌细胞与正常支气管上皮细胞相比,CACNA2D2和CD79A表达较低,并且肺腺癌组织CACNA2D2和CD79A阴性更多出现在Ⅲ～Ⅳ期患者以及有远处转移的患者,而强阳性更多出现在Ⅰ～Ⅱ期患者以及未发生远处转移的患者.结论 肿瘤中CACNA2D2和CD79A低表达与肺腺癌患者的肿瘤分期和较差的总生存期相关,CACNA2D2和CD79A可能是肺腺癌的潜在预后标志物和治疗靶点.

文章对合成奈玛特韦的手性中间体(1R,2S,5S)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸甲酯(1)盐酸盐的合成工艺进行了改进.以6,6-二甲基-3-氧杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(2)为起始原料,与脲发生氨化反应生成6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(9).9经过还原反应制得6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(5),5经过含有单胺氧化酶AtMAON-M12的工程菌催化氧化,立体选择性地生成(1R,5S)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烯(6),6再经加成、氰化、Pinner反应后成盐制得1盐酸盐,纯度99.9％,ee值大于99.9％,总收率达60.5％.利用单胺氧化酶AtMAON-M12合成单一构型的化合物6,不需要拆分,符合绿色化学的原子经济性原则.

为了提高BTRCP-CypA融合基因的表达量,对基因密码子进行优化,主要是去除过多富含AT碱基以及提高GC含量.在此基础上提出一种用于基因合成的PCR法.拆分单链寡核首酸长度为59 nt左右,重叠区碱基数14～21 nt,Tm值为46～62℃.具体步骤如下:把拆分的寡核首酸组装成300～500 bp左右的中间片段,再将中间片段拼接成全长基因.结果表明利用该法法合成了BTRCP-CypA融合基因,并提高了表达量.因而改良的PCR法能经济、简便、高效地进行基因合成,具有良好的应用前景.

目的 探讨自由基引发剂对β-环糊精(β-CD)毛细管整体柱手性药物拆分能力的影响.方法 采用水溶性引发剂2,2′-偶氮二异丁腈脒二盐酸盐(AIBA)及常用的脂溶性引发剂偶氮二异丁腈(AIBN),分别制备了2根相近的环糊精整体柱poly(GMA-EDA-β-CD-co-MBA),并系统比较两者的化学性质(差示扫描量热分析和元素分析)、物理性质(通透性、重复性和扫描电镜)及色谱性能(保留机制和手性拆分评估)的差异.结果 亲水性更强的AIBA能加速自由基聚合反应,但对β-环糊精整体柱的手性拆分效果并不优于AIBN.结论 引发剂对手性拆分能力的影响明显,油溶性的AIBN在环糊精聚合物整体柱制备上更具优势.

与手性药物的外消旋体相比,单一光学异构体往往具有更强的选择性和较低的不良反应,已成为药物研发的热点.尽管不对称合成方法学研究蓬勃发展,手性拆分仍是获取手性药物的重要途径.本文重点介绍了手性药物及中间体拆分方法的最新研究进展,包括结晶拆分、化学拆分、动力学拆分等.将拆分与外消旋化过程结合,提高拆分效率,已成为手性拆分方法发展的趋势.此外,还介绍了手性萃取、膜拆分、纳米粒拆分等方法.

L-正缬氨酸是合成抗高血压药物培垛普利的重要中间体,其合成主要通过化学方法,具有产品纯度低、环境污染等缺点.提出一种基于多酶介导拆分DL-正缬氨酸结合不对称还原生产高纯度L-正缬氨酸的方法.首先,将混合型DL-正缬氨酸中的D型经过D-氨基酸氧化酶氧化成相应酮酸,然后利用亮氨酸脱氢酶将酮酸不对称还原生成L-正缬氨酸,同时NADH被氧化成NAD+,最后利用甲酸脱氢酶构建NADH循环再生系统.D-正缬氨酸被氧化过程中会产生副产物过氧化氢(H2O2),通过外源添加过氧化氢酶消除该副产物.基于前期最适转化温度、最适转化pH优化基础上,对过氧化氢酶添加量和单次底物添加量进行优化,利用分批补料策略提高L-正缬氨酸产量.结果显示,在最适条件下,L-正缬氨酸产量达到61.09 g/L对映体过量值(e.e.)和转化率分别为99％和96.1％.本研究合成L-正缬氨酸较之化学方法,具有环境污染少、产品纯度高等特点,为制药行业中光学纯L-正缬氨酸的生产提供了一种有效的方法.

目的 对(R)-(+)-脱水芽子碱甲酯的合成工艺进行研究和结构表征.方法 以托品酮为原料,经克莱森缩合、拆分、还原和消除得到目标产物,并以成盐的方式得到其富马酸盐,以溶剂挥发法培养单晶,采用X射线单晶衍射对结晶形态进行表征.结果 优化了合成工艺,总收率为36％.测试结果表明不对称单位化学计量式为C14H19NO6,相对分子质量为297.30,晶体密度为1.359 g/cm3,该晶胞属于正交晶系,空间群为P212121.结论 本合成工艺简化了实验操作,更适合大规模制备,且为脱水芽子碱的结构确证提供了新的依据.

目的:为更好地促进超临界流体色谱(SFC)技术在药物分析工作中的应用提供参考.方法:以“超临界流体色谱”“SFC”“合相色谱”“UPC”“中药”“Supercritical fluid chromatography”“UltraPerformance convergence chromatography”等为关键词,组合查询在中国知网、万方数据库、维普数据库、Web of Science等数据库中收录的2012年1月-2017年6月发表的相关研究文献,进行归纳和总结.结果与结论:共检索到相关研究文献315篇,其中有效文献38篇.SFC技术实现分离主要原理是根据待测物在固定相和流动相两相中的分配系数不同,继而实现对待测物的先后洗脱.SFC技术在手性药物分析领域的应用主要涉及化学药手性成分拆分和中药手性成分拆分两个方面;在非手性药物分析领域的应用主要涉及天然产物分离及制备、代谢组学研究、维生素分离及测定和指纹图谱研究等方面.具有快速、高效、灵敏、环保等优点的SFC及其联用技术给药物成分的定性与定量分析提供了一条新的思路.