目的 观察增液润燥汤对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺组织相关mRNA和蛋白及外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)表达的影响.方法 将SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组和造模组,造模组通过免疫诱导法建立SS小鼠模型,对照组不予处理,将成模小鼠随机分为模型组、白芍总苷组和增液润燥汤低、中、高剂量组,每组3只.白芍总苷组予白芍总苷溶液0.234 mg/g灌胃,增液润燥汤低、中、高剂量组予增液润燥汤4、8、12 mg/g灌胃,对照组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续60 d.计算小鼠日饮水量、唾液流率、颌下腺指数,HE染色观察小鼠颌下腺组织形态,qPCR检测颌下腺组织同源异形盒基因A1(HOXA1)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、白细胞介素-17(IL-17)、叉头框蛋白P3(FOXP3)mRNA和miR-181c-3p表达,Western blot检测颌下腺组织HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17、FOXP3蛋白表达,流式细胞仪检测外周血Th17、Treg比例.结果 与对照组比较,模型组小鼠日饮水量增加,唾液流率、颌下腺指数降低,颌下腺组织淋巴细胞浸润明显,HOXA1、STAT3、IL-17 mRNA表达升高,FOXP3 mRNA和miR-181c-3p表达降低,HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17蛋白表达升高,FOXP3蛋白表达降低,Th17比例、Th17/Treg升高,Treg比例降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,增液润燥汤各剂量组小鼠日饮水量减少,唾液流率升高,颌下腺组织淋巴细胞浸润均有不同程度减轻,HOXA1、IL-17 mRNA表达降低,FOXP3 mRNA和miR-181c-3p表达升高,HOXA1蛋白表达降低,FOXP3蛋白表达升高,Th17比例、Th17/Treg降低,Treg比例升高,增液润燥汤高剂量组颌下腺指数升高,STAT3 mRNA、蛋白表达及p-STAT3、IL-17蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 增液润燥汤可能通过上调miR-181c-3p、FOXP3表达,下调HOXA1、p-STAT3、STAT3、IL-17表达,调节Th17/Treg细胞平衡,改善SS所致颌下腺功能和组织损伤.

为了克隆努比亚山羊(Capra nubiana)同源异形盒转录因子1(prospero-related homeobox protein 1,PROX1)基因和检测过表达PROX1基因对努比亚山羊骨骼肌成肌细胞分化和肌纤维类型转化相关基因mRNA表达的影响,为研究PROX1基因在骨骼肌发育中的调控作用提供参考,本研究以努比亚山羊背最长肌组织cDNA为模板克隆PROX1基因,构建pEGFP-N1-PROX1真核表达载体,转染至努比亚山羊骨骼肌成肌细胞,24 h后更换分化培养基,收集分化6 d的细胞,通过RT-qPCR检测过表达PROX1基因后细胞分化标志基因、NOTCH信号通路相关基因以及骨骼肌肌纤维类型相关基因的表达情况.研究结果表明努比亚山羊PROX1基因编码区(coding sequence,CDS)序列长度为2 214 bp,编码含737个氨基酸的多肽.RT-qPCR结果表明PROX1基因可以通过抑制NOTCH信号通路,上调细胞分化标志基因表达水平进而促进成肌细胞的分化(P＜0.05),并介导CaN/NFAT信号通路,显著下调MYH2和MYH4基因的mRNA表达水平(P＜0.05).本研究初步确定努比亚山羊PROX1基因参与调控骨骼肌成肌细胞的分化和肌纤维类型的转化,研究结果为进一步丰富肌肉生长发育的分子机制提供理论数据.

目的:检测乳腺癌组织同源异形盒基因A1(HOXA1)和母亲抗肢瘫同系物3(SMAD3)表达并探讨其临床意义。方法:选择2013年1月至2014年12月上饶市人民医院和南昌大学附属第二医院诊治的96例乳腺癌患者为研究对象。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织HOXA1及SMAD3基因mRNA表达。采用链霉亲合素-生物素复合物法检测蛋白表达。分析HOXA1及SMAD3基因蛋白表达相关性及与临床病理因素、生存期的关系。两组间比较采用 t检验，计数资料比较采用 χ2检验。HOXA1与SMAD3蛋白表达相关性采用Spearman秩相关分析。采用Kaplan-Meier生存分析，组间生存比较采用Log-rank检验。 结果:乳腺癌患者中乳腺肿瘤组织HOXA1、SMAD3基因mRNA表达及蛋白表达阳性率均显著高于癌旁组织(HOXA1基因mRNA为0.71±0.12比0.34±0.09，SMAD3基因mRNA为0.86±0.14比0.42±0.11，HOXA1基因蛋白表达阳性率为55.21%比18.75%，SMAD3基因蛋白表达阳性率为59.37%比22.92%)，差异有统计学意义( t＝24.168、24.214， χ2＝27.377、26.347， P<0.05)。Ⅲ期、Luminal B型、低分化乳腺癌患者HOXA1和SMAD3基因蛋白表达阳性率均显著高于Ⅰ+Ⅱ期、Luminal A型、中+高分化乳腺癌患者(HOXA1分别为78.13%比43.75%、64.71%比33.33%、77.14%比42.62%，SMAD3分别为84.38%比46.87%、67.65%比35.90%、82.86%比45.90%)，差异有统计学意义( χ2＝10.194、13.730、10.717、12.437、17.131、12.592， P<0.05)。乳腺癌组织中HOXA1蛋白表达与SMAD3蛋白表达呈正相关( r＝0.577， P<0.05)。HOXA1阳性、SMAD3阳性乳腺癌患者中位生存期显著低于HOXA1阴性、SMAD3阴性患者[中位生存期分别(39.12±5.67)个月比(46.65±7.98)个月、(41.32±6.31)个月比(49.16±8.26)个月]，差异有统计学意义( χ2＝10.629、13.452， P<0.05)。 结论:乳腺癌中HOXA1及SMAD3表达显著增加，与肿瘤分期、分子分型、分化程度密切相关，可作为乳腺癌病情及预后评估的标志物。

Currarino综合征是一种罕见的先天畸形，以骶骨、肛门直肠畸形与骶前肿物为典型表现，可伴多系统异常。根据患儿和成年患者的临床表型差异可分为完全型、轻型和微型。MNX1基因与Currarino综合征的发生密切相关。本文通过文献回顾，收集并分析145种MNX1致病变异携带者(297例)的临床表型及基因型信息，分析其临床特点及基因型-表型关联性。结果表明，Currarino综合征分型与突变位点的位置之间无明显关联，但累及MNX1基因的染色体变异携带者往往表型更重。突变位点的分布在MNX1基因的同源异形盒编码区内较为集中，这可能影响MNX1编码蛋白与特定下游靶基因的结合。罕见的MNX1纯合突变提示应关注Currarino综合征患儿的胰岛细胞功能。同一家系内携带相同MNX1突变的不同个体间表型差异大，提示存在其他调节因子。未来应在与MNX1存在显著相互作用蛋白的编码基因中继续寻找其他候选基因，重点关注参与胰腺、感觉器官发生、生殖结构发育等生物学过程的相关基因。

目的:探讨长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)通过靶向微小RNA-520g-3p(miR-520g-3p)对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞中miR-520g-3p、HOTAIR表达水平；转染HOTAIR小干扰RNA至SW1990胰腺癌细胞中，并分为NC组、siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力，划痕愈合实验检测细胞迁移能力；双荧光素酶报告基因实验验证miR-520g-3p与HOTAIR靶向调控关系，两组之间的定量资料比较采用 t检验。 结果:qRT-PCR结果表明SW1990中HOTAIR mRNA水平明显高于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，3.08±0.33比1.57±0.17， t＝29.830, P<0.01)；miR-520g-3p在SW1990中的表达水平明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE，0.93±0.11比2.63±0.24， t＝22.410, P<0.01)；HOTAIR小干扰RNA转染至SW1990中，72 h后NC组细胞吸光度( A)值明显高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组(3.52±0.99比1.92±0.23、2.36±0.58， t＝6.340、5.150， P<0.01)；降低HOTAIR表达48 h后，NC组细胞划痕愈合面积百分比为显著高于siHOTAIR-1组、siHOTAIR-2组[(85.37±9.82)%比(50.56±5.82)%、(35.28±6.86)%， t＝7.760, 14.750， P<0.01]，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因表明miR-520g-3p可明显降低野生型HOTAIR载体荧光素酶活性。下调miR-520g-3p表达水平后，SW1990细胞增殖及迁移能力高于对照组( t＝13.190、12.480， P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:HOTAIR可通过靶向负调控miR-520g-3p影响胰腺癌细胞增殖、迁移能力。

目的:基于 miR-181 c-3 p/信号转导与转录激活因子 3(STAT3)通路探讨增液润燥汤对干燥综合征(SS)模型小鼠的作用机制.方法:免疫诱导法制备 SS模型小鼠;将BALB/c小鼠随机分为模型组、对照组、白芍总苷组、增液润燥汤低剂量组、增液润燥汤高剂量组、增液润燥汤高剂量+STAT3 通路激活剂(Colivelin)组、增液润燥汤高剂量+miR-181c-3p激动剂组,每组 3 只;测量小鼠日饮水量、唾液流率、颌下腺脏器指数、血沉;ELISA法检测血清免疫球蛋白 G(IgG)水平;观察颌下腺组织病理学变化;实时荧光定量PCR检测颌下腺 miR-181c-3p的表达;Western blot法检测颌下腺同源异形盒基因 A1(HOXA1)、STAT3、磷酸化 STAT3(p-STAT3)、白介素-17(IL-17)和叉头盒蛋白P3(Foxp3)的表达;流式细胞仪检测外周血辅助性 T 细胞 17(Th17)/调节性 T 细胞(Treg)比例.结果:与模型组比较,其余各组小鼠日饮水量、HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17 表达、Th17 细胞比例、Th17/Treg 明显下降,唾液流率、Foxp3、miR-181c-3p表达、Treg细胞比例明显升高(均P<0.05).与增液润燥汤高剂量组比较,增液润燥汤高剂量+Colivelin组Treg细胞比例明显下降,日饮水量、Th17 细胞比例、Th17/Treg 明显升高(均P<0.05).与增液润燥汤高剂量组比较,增液润燥汤高剂量+miR-181c-3p激动剂组日饮水量、血沉、血清 IgG水平、HOXA1、STAT3、p-STAT3、IL-17 表达、Th17 细胞比例、Th17/Treg明显下降,唾液流率、Foxp3、miR-181c-3p 表达、Treg 细胞比例显著升高(均P<0.05).结论:增液润燥汤通过上调 SS模型小鼠颌下腺中 miR-181c-3p 表达,抑制 STAT3活化,从而改善Th17/Treg细胞失衡,发挥治疗作用.

目的:研究同源异形盒基因D10 (homeobox D10, HOXD10)在人胆管癌组织中的启动子甲基化状态,并探讨HOXD10基因启动子甲基化与胆管癌患者预后的关系.方法:采用甲基化特异性PCR法检测87例人胆管癌组织与30例癌旁组织中HOXD10基因启动子的甲基化情况,并进一步采用重亚硫酸盐测序法检测HOXD10基因启动子中27个胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(cytosine-phosphate-guanosine, CpG)位点的甲基化程度.然后,应用Spearman相关检验分析HOXD10基因启动子甲基化与其蛋白表达的相关性,用cut-point生存分析和Kaplan-Meier法检验HOXD10基因启动子区CpG位点甲基化数目与胆管癌患者预后的关系.结果:胆管癌组织中HOXD10基因启动子甲基化率明显高于癌旁组织 (P＜ 0.05),而且癌旁组织中HOXD10启动子区域的CpG位点数目少于胆管癌组织.HOXD10蛋白表达和HOXD10基因启动子甲基化在胆管癌中呈显著负相关性(r=-0.82,P＜ 0.000 1). HOXD10基因启动子区有7个CpG位点甲基化是胆管癌患者生存分析的最佳"截点"(P＜ 0.001), CpG位点数目为0～6个的胆管癌患者生存时间明显长于CpG位点数目≥ 7个的患者(P＜ 0.01).结论:基因启动子甲基化与HOXD10蛋白的表达失活密切相关,HOXD10基因启动子区存在≥ 7个CpG位点甲基化可作为胆管癌患者预后不良的预测指标之一.

目的:探讨同源异形盒基因A1(HOXA1)基因在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者组织中的表达情况与临床特征及预后相关性.方法:从NCBI(美国国立生物技术信息中心)的GEO数据库下载OSCC相关芯片数据(GSE42743),包含74例OSCC样本及29例正常口腔黏膜样本,分析HOXA1基因在二者之间的表达情况;收集73例OSCC组织的基因表达谱及相关临床数据,对样本中的HOXA1基因表达数据及其对应的临床信息进行相关性分析,生存分析HOXA1基因与OSCC总生存期及特异性生存期的相关性;采用基因集富集分析方法探讨HOXA1基因在OSCC中可能的作用机制.结果:OSCC组织中HOXA1基因表达水平明显高于正常黏膜组织(P<0.05);73例OSCC样本中,HOXA1基因表达水平与T分期、CN分期、AJCC分期显著相关(P<0.05);生存分析示HOXA1高表达患者预后明显差于HOXA1低表达组(P<0.05);基因富集分析提示,HOXA1基因高表达样本主要富集了E2F、MYC、mTORC1信号通路及G2M检查点、有丝分裂、蛋白分泌功能基因集,影响OSCC的生物学过程.结论:HOXA1基因高表达与OSCC患者的进展相关,可作为其独立预后危险因素.

目的:研究结肠癌病灶内同源异形盒基因7(HOXB7)基因表达量的变化及其与肿瘤病理特征的相关性.方法:选择2015年3月～2018年2月期间在我院接受根治性切除手术的结肠癌患者作为研究对象,收集结肠癌病灶及癌旁病灶适量,测定HOXB7基因、细胞增殖相关基因Notch1、Hes1、P53、ASPP2、WTX及侵袭相关基因CAT-D、TMEM16a、CBX7、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin的表达量.结果:结肠癌病灶内HOXB7、Notch1、Hes1、CAT-D、TMEM16a、CBX7、ZEB1、N-cadherin的mRNA表达量高于癌旁病灶,P53、ASPP2、WTX、E-cadherin的mRNA表达量低于癌旁病灶;结肠癌病灶内HOXB7基因的mRNA与Notch1、Hes1、CAT-D、TMEM16a、CBX7、ZEB1、N-cadherin的mRNA表达量呈正相关,与P53、ASPP2、WTX、E-cadherin的mRNA表达量呈负相关.结论:结肠癌病灶内HOXB7基因的高表达能够增强增殖及侵袭的肿瘤病理特征.

目的:胚胎生育过程中因肢体发育异常造成的出生缺陷比率不低, 其相关基因表达模式尚不明确.本实验通过建立实时定量PCR芯片 (Real-time quantitative polymerasechain reaction array, qPCR array) 检测方案, 研究C57BL/6品系小鼠后肢发育相关基因的表达谱.方法:以同源异形盒基因家族 (Hox) 、Wnt5a、配对同源结构域基因 (Pitx1) 、成纤维生长因子 (Fgf8) 、音猬因子 (Shh) 等小鼠肢体发育相关的重要基因制作基因检测表达谱, 以C57BL/6品系怀孕雌鼠为材料, 取胚胎肢芽发育的四个关键时期 (E10.5, E11.5, E12.5, E13.5) 的胎鼠后肢, 利用qPCR array方案检测表达谱中基因的相对表达水平差异.结果:通过已建立的qPCR array检测了C57BL/6品系小鼠胚胎后肢发育时期Hox家族、Wnt5a、Pitx1、Fgf8、Shh等基因的表达差异.以E10.5为对照, 检测出在后肢发育时期基因呈三种表达模式, 即Hoxb6、Hoxb8、Hoxc8、Hoxc9、Hoxc10、Hoxd9和Shh基因的表达水平呈上调;Hoxa11、Hoxa13、Hoxc12、Hoxc13、Hoxd13等基因表达出现下调;Hoxc9、Hoxc10、Hoxc11、Hoxd9、Hoxd12、Fgf8和Pitx1等基因的相对表达量呈先上调后下调的曲线表达模式, 且有少部分基因在小鼠后肢发育时期表达水平无明显变化.结论:Hox家族、Wnt5a、Pitx1、Fgf8、Shh等基因在小鼠后肢发育时期表达, 并且表达模式存在明显差异.