发酵作为常用的中药炮制技术之一,是指在一定条件下借助微生物和酶的催化分解作用,改变原有药性、药效的方法.现系统综述双向固体发酵技术的现状、常用的发酵菌种、发酵前后对中药毒性及药效成分的影响,并对中药发酵的发展方向提出了建议,可为后续深入研究和开发利用中药发酵技术提供参考.

目的:探讨经赤芝菌发酵不同时间钩吻（赤芝钩吻）的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱与毒性的关系。方法:用赤芝菌对钩吻进行双向固体发酵炮制，取发酵9、11、13、15、17、19、21、23、25、27 d（第27天取样2次）共10批次（批号S1~S10）赤芝钩吻，采用自行建立的HPLC法测定指纹图谱。将100只无特定病原体级ICR小鼠随机分为10组（每组10只，雌雄各半），以发酵11 d赤芝钩吻对小鼠的半数致死剂量为毒性测定给药浓度配制S1~S10赤芝钩吻溶液，分别给10组小鼠灌胃，观察各组小鼠的死亡情况。根据灰色关联度计算公式计算S1~S10赤芝钩吻指纹图谱共有色谱峰与毒性（对小鼠的致死率）的关联度系数，分析赤芝钩吻毒性的主要贡献成分。结果:S1~S10赤芝钩吻指纹图谱共标定17个共有色谱峰；S1~S10赤芝钩吻对小鼠的致死率分别为1.00、1.00、0.80、0.70、0.60、0.60、0.50、0.40、0、0。灰色关联度分析显示，7、3、6、9、1、8、17、12号共有色谱峰与毒性的关联度系数分别为0.868、0.838、0.830、0.828、0.824、0.820、0.818和0.802，这8个色谱峰所代表的化学成分为赤芝钩吻毒性的主要贡献成分。结论:赤芝钩吻随发酵时间延长毒性逐渐降低，发酵27 d时毒性最低。发酵后钩吻的毒性是多成分共同作用的结果，毒性主要贡献成分的辨识可为发酵钩吻的质量控制和发酵工艺优化提供参考。

目的 以中药固体双向发酵方法,建立至真方的新型发酵工艺.方法 ①通过文献研究拟定候选发酵菌种.对候选发酵菌种进行平板混合实验,考察各菌种间生长兼容性.采用CCK-8 细胞增殖抑制实验,比较不同发酵条件下所得产物对人结直肠癌细胞(HCT-8)的半数抑制浓度(IC50),评判发酵体系的优劣,从而确定发酵菌种、发酵时长等关键发酵参数,建立发酵工艺.②通过 HCT-8 细胞增殖抑制率,以及巨噬细胞(RAW264.7)NO释放率和吞噬活性测定,比较至真方发酵前后的体外药效差异.结果 黑曲霉和酵母菌为最优发酵菌种组合,4 d为最优发酵时长.在此发酵条件下,发酵组对HCT-8 细胞的IC50 为 67.41 μg·mL-1,生药组对HCT-8 细胞的IC50 为 1 032 μg·mL-1;与生药组比较,发酵组能显著抑制RAW264.7 释放炎症因子NO,并显著提升其吞噬活性.结论 该研究建立了至真方固体双向发酵新工艺.在该发酵体系下,至真方的体外抗结直肠癌活性、抗炎活性和促免疫活性得到显著提升.

目的:探究黄芪-茯苓双向固体发酵菌质对高尿酸血症小鼠的整体改善作用.方法:采用含 4%氧嗪酸钾与 20%酵母混合制成的饲料建立高尿酸血症小鼠模型.将 60 只小鼠随机平均分为正常组,模型组,苯溴马隆组(20 mg·kg-1),菌质低剂量(250 mg·kg-1)、中剂量(500 mg·kg-1)、高剂量(1000 mg·kg-1)组,连续灌胃给药42 d后,检测小鼠血清中尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶(AST)、肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)、肾脏白细胞介素(IL)-1β、IL-6 和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;并取小鼠肾脏固定、苏木素-伊红(HE)染色,观察各组组织病理学变化.结果:与正常组相比,高尿酸血症模型组小鼠的UA水平显著升高(P＜0.000 1).菌质各剂量组与高尿酸血症模型组相比,UA水平均有不同程度的下降(P＜0.000 1),其中菌质高剂量组下降幅度最大,但三组之间差异无统计学意义.与正常组相比,高尿酸血症模型组小鼠BUN水平显著升高(P＜0.01),Cr水平显著升高(P＜0.000 1),肝脏XOD活性明显升高(P＜0.000 1),血清AST和ALT水平显著升高(P＜0.001),IL-1β、IL-6 和TNF-α水平显著提高(P＜0.000 1).与模型组相比,菌质中剂量组小鼠BUN水平显著下降(P＜0.01);苯溴马隆阳性组、菌质高、中剂量组小鼠Cr水平显著下降(P＜0.01);苯溴马隆阳性组、菌质各剂量组小鼠的XOD活性均明显降低(P＜0.000 1);菌质各剂量组小鼠血清ALT、AST水平显著下降(P＜0.01);菌质各剂量组的IL-1β、IL-6 水平均显著下降(P＜0.000 1),但TNF-α的水平差异无统计学意义.模型组肾脏病理切片未见明显病变.结论:黄芪-茯苓双向固体发酵菌质可以显著改善高尿酸血症小鼠的病理状态.

中药发酵炮制是借助微生物的作用,在适当的温度、湿度、水分等条件下对药物进行发酵,改变其原有的特性,增强或产生新的药效,扩大应用范围,以满足临床用药的中药炮制方法.自古以来,中医就有将药物制成曲剂,从而达到减毒增效的目的.现代发酵技术在传统发酵技术和现代生物学技术的基础上共同发展而来,按发酵形式可分为固体发酵、液体发酵和双向发酵技术.针对不同发酵类型存在的优缺点,和发酵技术在中药炮制领域的应用以及目前存在的一些问题进行综述.

目的 优选全蝎白术白头翁混合发酵物(MFSAP)的超声水提工艺并进行体外抗肿瘤活性的初步研究.方法 通过球孢白僵菌双向固体发酵技术制备MFSAP,以水溶性总蛋白及总多糖的含量为指标,在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交表考察溶剂用量、超声时间、pH值对超声水提工艺的影响,并研究最佳水提工艺制备的MFSAP对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用.结果 MFSAP的最佳水提工艺为:溶剂用量40倍,超声时间60 min,pH11.在此条件下,水提液中水溶性总蛋白的含量为226.78 mg·g-1(RSD=0.42％),水溶性总多糖的含量为222.99 mg·g-1(RSD=0.35％),综合评分为2.30(RSD=3.40％);MFSAP具有较好的体外抗肿瘤效果.结论 所用工艺优化方法合理可行,所得结果稳定可靠;球孢白僵菌双向固体发酵技术可提高此中药复方的抗肿瘤活性.

本文旨在探究灵芝-黄芪双向固体发酵体系对灵芝多糖生物活性的增效作用.分别以灵芝-黄芪双向发酵菌质和未添加黄芪的灵芝菌发酵菌质为原材料提取多糖,采用热水浸提和离子交换色谱对粗多糖进行分离,得到PG-1和PG-2,添加黄芪发酵的菌质多糖中的PG-1组分相较于未添加黄芪发酵的菌质多糖中的PG-2组分增加了325％的产量.对PG-1和PG-2进行初步的结构鉴定和免疫活性、抗肿瘤活性的研究.运用排阻色谱法测定其分子量,高效液相色谱、紫外光谱和红外光谱等方法分析其单糖组成、官能团、糖苷键构型以及糖分子链链型.PG-1和PG-2都由葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖和阿拉伯糖4种组成,单糖组分摩尔比分别为12∶58∶21∶9和16∶41∶32∶11.分子量分别为9.2×104和8.9×104.PG-1和PG-2均由β-糖苷键连接,二者糖链间有-O-连接.PG-1和PG-2均是具有三螺旋空间构象的分子量相对均一的多糖.体外细胞实验结果显示:加入PG-1和PG-2后,巨噬细胞的增殖作用、巨噬细胞对中性红的吞噬作用、巨噬细胞的保护作用和对肿瘤细胞增殖的抑制作用都显著地提高.在细胞实验中,PG-1显示出比PG-2更强的免疫增强活性和对肿瘤细胞增殖的抑制作用,说明添加黄芪促进了灵芝菌质多糖的分泌,使灵芝多糖的免疫增强活性和抗肿瘤活性增强.

目的 采用固体发酵技术,研究灵芝菌固态发酵感冒清热颗粒药渣过程中的主要活性物质变化,为感冒清热颗粒药渣的再利用提供依据.方法 以多糖、灵芝酸和黄酮类化合物为检测指标,考察药渣粒径、药渣浓度、固液比和培养时间等因素对灵芝菌发酵感冒清热颗粒药渣的影响.结果 结合单因素和正交实验结果表明,当固液比1:2,粒径30目、10％药渣,发酵30 d时,获得的多糖和灵芝酸含量最高.结论 多糖和灵芝酸是灵芝菌固态发酵感冒清热颗粒药渣产生的活性物质,发酵参数的变化显著影响了发酵过程两种活性物质的产量,为中药渣资源的再利用提供了合理依据.

目的 探讨槐耳—板蓝根固体双向发酵过程中物质含量的动态变化及发酵菌质抗炎活性.方法 应用苯酚—浓硫酸比色法、高效液相法测定槐耳—板蓝根固体双向发酵物中多糖、核苷类成分及(R,S)-告依春的含量;采用2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐,CCK-8法检测不同浓度的菌质提取物对RAW 264.7细胞活性的影响;用硝酸还原酶法、酶联免疫吸附法检测细胞分泌的一氧化氮和肿瘤坏死因子的水平.结果 随着发酵时间的延长,双向发酵菌质中鸟苷的含量呈现不规律的变化;水溶性多糖成分呈现先增加后减少的趋势,且发酵30天的菌质含量达到最高,质量分数分别达到29.48 mg/g;腺苷、尿苷及告依春含量呈现逐渐降低的趋势.菌质提取物能明显抑制LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞一氧化氮、肿瘤坏死因子的分泌.结论 槐耳板蓝根双向发酵后,发酵体系中具有抗炎、抗肿瘤作用的多糖和肌苷含量都逐渐升高;此外,发酵菌质还具备良好的抗炎活性.因此,双向发酵作为一种新型中药炮制技术,不仅可以增强药效,而且还能扩大药用范围,其具有良好的应用前景.

近年来,随着人们对所使用中药安全性和药效要求的提高,中药炮制受到广泛关注,而作为其基本方法之一的中药发酵炮制法因其原理及技术方法异于其他方法成为研究热点.中药发酵是在广义发酵的基础上,根据菌种特性选择适宜的中药材进行处理,使药材原有性能发生改变,功效得到增强.常见的发酵方式有固体发酵、液体发酵、双向固体发酵.目前,有关中药发酵方法的研究已引起学者的广泛关注.未来,对发酵微生物的选择及菌种在发酵过程的作用机制等还需深入研究,以为传统中药发酵炮制开辟新途径.