目的:探讨海马γ振荡异常在脓毒症相关性脑病（sepsis-associated encephalopathy, SAE）中的作用。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠（2~3个月龄）70只，采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture, CLP）建立SAE动物模型，根据随机数字表法，随机分为三组：假手术组（sham组），CLP组及CLP +多巴胺4（dopamine 4, D4）受体激动剂RO-10-5824组。于术后第10~14天分别行旷场、新物体识别及条件恐惧实验；行为学结束后取海马组织检测微清蛋白（parvalbumin, PV）与D4受体表达情况；行海马CA1场电位检测，并分析其与大鼠新事物探索时间的关系。计量资料两两比较采用独立 t检验，多组间的差异采用单因素方差分析，多重比较采用Tukey法。相关性分析采用Pearson法。以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与对照组相比，CLP组海马PV（77.54±4.61）%、D4受体（56.36±3.88）%及γ振荡能量（41.1±8.62）%，新事物接触时间（36±3）s、新事物识别率（49±4）%与场景僵直时间（56±7）s均显著降低（ P < 0.05），而RO-10-5824可上调γ振荡能量（92.3±6.7）%，逆转降低的新事物接触时间（44±3） s和新事物识别率（63±4）%。相关分析显示海马CA1区γ振荡能量与新事物接触时间成正相关（ r=0.609 2， P=0.015 9）。然而，各组动物在总探索路程和中央格停留时间差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:海马γ振荡异常在SAE的认知功能障碍中发挥关键作用。

目的:研究多巴胺受体3（dopamine receptor three, D3R）拮抗剂U99194A对睡眠剥夺（sleep deprivation, SD）小鼠认知功能及海马肥大细胞活化的影响。方法:将42只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为3组（每组14只）：对照组（Ctrl组）、睡眠剥夺组（SD组）及睡眠剥夺+U99194A组（U组）。SD组、U组小鼠采用多平台水环境法进行3 d的SD，U组行SD同时每日腹腔注射20 mg/kg U99194A连续3 d，Ctrl组与SD组腹腔注射等量的生理盐水。采用水迷宫检测小鼠认知功能，免疫组织化学法观察海马肥大细胞类胰蛋白酶表达水平，ELISA法测定海马组织IL-6、TNF-α及IL-1β含量。结果:3组小鼠SD前连续5 d定位航行训练逃避潜伏期差异无统计学意义（ P>0.05）。SD组及U组小鼠目标象限（第三象限）空间探索轨迹比Ctrl组局限；U组目标象限探索轨迹比SD组增加。与Ctrl组比较，SD组与U组小鼠逃避潜伏期延长，穿越隐藏平台次数减少，目标象限停留时间缩短；小鼠海马组织类胰蛋白酶平均光密度（ D）值增加；海马组织IL-1β、IL-6及TNF-α含量增加（ P<0.05）。与SD组比较，U组小鼠逃避潜伏期缩短，穿越隐藏平台次数增加，目标象限停留时间延长；小鼠海马组织类胰蛋白酶平均 D值降低；海马组织IL-1β、IL-6及TNF-α含量下降（ P<0.05）。 结论:U99194A改善SD小鼠认知功能可能与抑制肥大细胞活化从而抑制神经炎症有关。

中脑腹侧被盖区(VTA)-伏隔核(NAc)神经环路在睡眠觉醒中扮演重要角色.该环路参与睡眠觉醒的调控主要依赖于VTA脑区多巴胺、γ-氨基丁酸、谷氨酸等神经递质,以及NAc脑区多巴胺D1R、D2R和腺苷A1R、A2AR受体系统参与其中.相较于VTA在维持唤醒方面的作用,NAc中多巴胺与腺苷受体协同参与睡眠觉醒的调控更加值得被关注,这为睡眠觉醒的机制研究提供了新思路.因此,本文就VTA与NAc在睡眠觉醒中的作用进行综述,并简单介绍VTA-NAc环路参与睡眠觉醒调节的上下游神经元投射方式,总结当下存在的问题并做出展望,以期为今后广大学者的深入研究提供借鉴与参考.

目的 分析C型凝集素结构域家族1成员B(C-type lectin domain family 1 member B,CLEC1B)、分泌型蛋白 Dickkopf 1(DKK1)、多巴胺受体 D4(dopamine receptor D4,DRD4)在原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)患者病变组织中的表达及临床意义.方法 回顾性选取2022年1月～2023年1月在四川大学华西医院接受肝癌切除术且经术后病理证实为PHC的138例患者,取其癌组织与癌旁组织石蜡病理标本,分析其CLEC1B、DKK1、DRD4表达情况及和临床病理特征关联性,Pearson法分析CLEC1B、DKK1、DRD4的相关性.结果 肝癌组织中CLEC1B、DRD4表达水平均低于癌旁肝组织,肝癌组织中的DKK1蛋白表达较癌旁肝组织更高(P＜0.05),且3者均主要分布于细胞浆;CLEC1B低表达、DKK1高表达、DRD4 低表达分别 97 例(70.29％)、91 例(65.94％)、78 例(56.52％),PHC 患者的 CLEC1B 低表达与术前AFP水平、血管侵犯、远处转移、肿瘤出血等密切相关(P＜0.05),DKK1高表达与术前AFP水平、BCLC Kinki分期、肿瘤数目、肿瘤大小密切相关(P＜0.05),DRD4低表达与术前AFP水平、肿瘤数目、肿瘤大小、卫星结节、血管侵犯密切相关(P＜0.05);Pearson相关分析显示,PHC患者CLEC1B、DRD4与DKK1表达水平呈负相关(r=-0.809、r=-0.774,P＜0.001),CLEC1B与DRD4表达水平呈正相关(r=0.748,P＜0.001).结论 CLEC1B、DRD4在PHC患者癌变组织中呈低表达,而DKK1呈高表达,且与临床病理参数有关,CLEC1B、DKK1、DRD4可能参与PHC发生发展,有一定检测意义.

目的:基于虚拟筛选-分子对接-活性评价技术探讨四逆汤治疗抑郁症的药效物质基础.方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索四逆汤(甘草、干姜、附子)的活性成分,并根据类药五原则及相关条件进行二次筛选.通过RCSB PDB数据库检索抑郁症的作用靶点.借助Discovery StudioTM 2016 软件对四逆汤活性成分与抑郁症靶点进行分子对接,探索两者的亲和力和结合方式,进而筛选关键活性成分.HT22 细胞分为空白组、模型组、(R)-去甲乌头碱组、甘草素组及山柰酚组.除空白组外,其余各组细胞加入皮质酮(1 mol·L-1,200 μL)培养24h建立体外抑郁模型.然后,加入相应药物(1 mol·L-1,100 μL)干预24 h,光镜下观察细胞形态,TUNEL染色观察细胞凋亡情况.C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、(R)-去甲乌头碱组(10 mg·kg-1)、甘草素组(15 mg·kg-1)、山柰酚组(20 mg·kg-1).除空白组外,其余小鼠采用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)结合孤养的方式建立抑郁模型.造模首日开始给药,每日1 次,连续28 d.末次灌胃后,通过糖水偏爱实验(sucrose preference test,SPT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)与悬尾实验(tail suspension test,TST)检测各组小鼠的抑郁情绪和绝望情绪.结果:四逆汤活性成分 493 个,二次筛选得到 91 个化合物.抑郁症作用靶点 4 个,即单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)、多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)、5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)、组胺H1 受体(histamine receptor H1,H1R).通过分子对接得到15 个四逆汤抗抑郁的关键活性成分,进一步筛选得到 3 个核心成分,即(R)-去甲乌头碱、甘草素、山柰酚.细胞实验显示,空白组细胞光泽度好,突起交错分布且相互连接;模型组细胞光泽度较差,突起连接部分断裂消失,可见细胞变圆皱缩;与模型组比较,(R)-去甲乌头碱组、甘草素组、山柰酚组细胞形态有所改善,突起连接更紧密.空白组基本无细胞凋亡;与空白组比较,模型组细胞凋亡增加;与模型组比较,(R)-去甲乌头碱组、甘草素组、山柰酚组细胞凋亡减少.动物实验显示,与空白组比较,模型组小鼠糖水偏爱度降低(P＜0.05);与模型组比较,(R)-去甲乌头碱组小鼠糖水偏爱度升高(P＜0.05).与空白组比较,模型组小鼠不动时间(TST 和 FST)增加(P＜0.05);与模型组比较,甘草素组小鼠TST不动时间减少(P＜0.05),(R)-去甲乌头碱组、甘草素组小鼠FST不动时间减少(P＜0.05).结论:本研究采用中药新药发现与评价的新模式"虚拟筛选-分子对接-活性评价",深入挖掘四逆汤抗抑郁的物质基础主要为(R)-去甲乌头碱、甘草素及山柰酚.

目的:探讨多巴胺受体D2(dopamine receptor D2,DRD2)在小鼠乳腺癌免疫微环境中的作用及可能的作用机制.方法:采用雌性C57BL/6J小鼠和鼠源性乳腺癌EO771细胞建立乳腺癌移植瘤模型.分别采用腹腔注射DRD2特异性拮抗剂甲硫哒嗪处理移植瘤小鼠(对照组为腹腔注射PBS),以及瘤内注射特异性针对DRD2基因的siRNA(siDRD2)处理移植瘤小鼠[对照组为瘤内注射与DRD2基因无相关性的阴性对照siRNA(siNC)].采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67阳性细胞和CD4+T细胞所占百分比,以及FCM法检测肿瘤组织中CD45+CD4+T细胞、Th1细胞(CD45+CD4+IFNγ+)和 Th17 细胞(CD45+CD4+IL-17+)所占百分比.结果:与对照组相比,甲硫哒嗪治疗组小鼠的肿瘤体积缩小(P＜0.05),肿瘤质量降低(P＜0.001),肿瘤组织中Ki-67阳性细胞所占百分比降低(P＜0.001),CD45+免疫细胞所占百分比和CD4+T细胞所占百分比(P＜0.05和P＜0.001)增加,且Th1 细胞(CD45+CD4+IFNγ+)所占百分比增加(P＜0.001),Th17 细胞(CD45+CD4+IL-17+)所占百分比的变化差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组(siNC)相比,siDRD2组小鼠肿瘤体积减小(P＜0.05),肿瘤质量降低(P＜0.001),肿瘤组织中Ki-67阳性细胞所占百分比降低(P＜0.001),肿瘤浸润CD4+T细胞和Th1细胞所占百分比增加(P均＜0.001),而Th17细胞所占百分比的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在小鼠乳腺癌模型中,下调DRD2表达可促进Th1细胞分化从而抑制乳腺癌细胞的增殖.

评价复方精油吸嗅对小鼠提神醒脑的功效、作用机制及安全性.采用昆明小鼠经鼻吸嗅复方精油,通过自主活动行为学测试、戊巴比妥钠诱导睡眠实验综合评价复方精油提神醒脑的功效;采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血、脑内神经递质多巴胺(DA)和谷氨酸(GLU)含量,Western blot研究复方精油对小鼠不同脑区多巴胺受体D1R蛋白水平的影响,阐明提神醒脑作用机制;单次高剂量吸嗅给药急性毒理学实验考察复方精油安全性,采用气相色谱质谱联用技术(GC-MS)分析复方精油化学成分.动物实验结果表明,与对照组相比,复方精油低、中、高剂量组小鼠吸嗅3 d,每日均能显著提高运动距离(P＜0.01)、平均速度(P＜0.01),缩短休息时间(P＜0.01),显著提高小鼠自主活动;连续吸嗅精油3 d,能显著缩短睡眠总时长(P＜0.01),具有提神醒脑的作用.ELISA结果表明,与对照组相比,复方精油显著提高小鼠血、脑内DA、GLU的含量(P＜0.05,P＜0.05);Western blot结果表明,复方精油均显著上调小鼠海马、下丘脑、前额皮层和其他脑组织D1R蛋白水平(P＜0.05).单次高剂量吸嗅实验,复方精油对小鼠体重、血细胞相关指标、肝肾功能均无显著性影响,HE染色病理切片表明复方精油对脑、鼻、肺、肝、肾等组织无病理性损伤.GC-MS结果显示,复方精油中L-薄荷醇(24.54％)含量最高,其次为丁香酚(16.25％)、L-薄荷酮(7.78％)、冰片(7.30％)、L-石竹烯(5.29％)、1,8-桉叶素(3.40％).复方精油对小鼠具有提神醒脑的功效,同时吸嗅安全性较高,其作用机制可能与提高血、脑内DA和GLU含量,上调不同脑区D1R蛋白水平有关.

目的 探究G蛋白耦联受体激酶(GRK)2 在帕金森病(PD)小鼠纹状体中的作用机制.方法 选用C57BL/J雄性8 周龄小鼠,随机分为对照组和模型组;对照组腹腔注射0.2 ml生理盐水,模型组腹腔注射30 mg/kg的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),2 次/w,共5w.35d后对两组进行爬杆实验和旷场实验检测.行为学检测后,小鼠麻醉后眼球取血、取脑,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组化检测血清和中脑酪氨酸羟化酶(TH)表达,Western印迹和免疫组化检测纹状体GRK2 和多巴胺2 受体(D2R)表达.结果 在旷场实验中,MPTP干预后模型组自发活动总距离、穿越中心格次数和距离比对照组明显减少(均P＜0.001).在爬杆实验中,模型组爬杆时间比对照组明显延长(P＜0.001).ELISA及免疫组化显示,模型组血清和中脑TH值较对照组明显减少(P＜0.001).Western印迹和免疫组化提示,与对照组相比,纹状体D2R表达显著减少,而CRK2 表达显著升高(P＜0.05).结论 GRK2 可能通过D2R参与调控PD的症状,针对GRK2 是潜在的PD治疗靶点.

目的 观察柴胡加龙骨牡蛎汤对多发性抽动症(Tourette syndrome,TS)模型大鼠运动行为和刻板行为,以及纹状体多巴胺(dopamine,DA)、血浆DA和纹状体多巴胺受体(dopamine D2 receptors,D2R)含量的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组,正常组、模型组、硫必利组、中药组,每组10只.腹腔注射3,3-亚氨基二丙腈(3,3'-im inodipropionitrile,IDPN)建立TS大鼠模型.正常组和模型组给予生理盐水,其余2组分别给予盐酸硫必利[37.8 mg/(kg·d)]和柴胡加龙骨牡蛎汤颗粒剂[15.5 g/(kg·d)],连续灌胃4周,每周记录大鼠行为学积分变化.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测纹状体DA、血浆DA及纹状体D2R的含量.结果 (1)造模后模型组运动行为学积分高于正常组(P＜0.01).用药4周后,硫必利组、中药组运动行为和刻板行为学积分低于模型组(P＜0.05).(2)用药4周后,与正常组比较,模型组血浆DA、纹状体D2R含量升高(P＜0.01),纹状体DA降低(P＜0.05);与模型组比较,硫必利组血浆DA含量下降(P＜0.05),纹状体DA含量升高(P＜0.05);中药组血浆DA含量下降(P＜0.05),纹状体DA含量升高(P＜0.05).结论 柴胡加龙骨牡蛎汤对TS模型大鼠的运动行为、刻板行为有显著抑制作用,其抗抽动作用可能与调节外周及脑纹状体DA含量有关.

目的 探讨左归丸、右归丸改善睡眠失衡状态的可能作用机制.方法 25只SD大鼠随机分为正常对照组、失眠模型组、多睡模型组、左归丸组、右归丸组,每组5只.失眠模型组和左归丸组大鼠给予中缝背核内微量注射1A型5-羟色胺(5-HT1A)受体阻断剂WAY 100635建立失眠模型,多睡模型组和右归丸模型组大鼠微量注射5-HT1A受体激动剂8-OH-DPAT建立多睡模型,正常对照组中缝背核微量注射等量的生理盐水,连续3天.于末次注射2h后左归丸组大鼠给予左归丸溶液17.5g/(kg·d)灌胃,右归丸组给予右归丸溶液18.5g/(kg·d)灌胃,其余3组大鼠给予10ml/(kg·d)蒸馏水灌胃,每天1次,共7天.采用高效液相谱法检测各组大鼠血浆中单胺类神经递质多巴胺(DA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量,并计算5-HIAA/5-HT. 结果 与正常对照组比较,失眠模型组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT升高(P＜0.01);多睡模型组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT降低(P＜0.05或P＜0.01).与失眠模型组比较,左归丸组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT均降低(P＜0.05或P＜0.01);与多睡模型组比较,右归丸组大鼠血浆DA、DOPAC、5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT升高(P＜0.05).各组大鼠血浆5-HT含量差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 左归丸能有效降低失眠大鼠兴奋性神经递质,右归丸能有效升高多睡大鼠兴奋性神经递质,二者可能通过平衡神经递质改善睡眠失衡状态.