目的 通过超高效液相色谱—质谱联用(ultra-performance liquid chromatography-orbitrap-mass spectrome-try/mass spectrometry,UPLC-Orbitrap-MS/MS)对通络益晴方的化学成分进行快速分析及初步鉴定.方法 使用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸水梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温35℃;采用电喷雾离子源,正、负离子模式扫描,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片,结合参考文献,对所得成分进行分析与初步鉴定.结果 根据建立的色谱条件,从通络益晴方中初步鉴定出94个化学成分,其中有黄酮类化合物31个、酚酸类化合物14个、脂肪酸类化合物9个、皂苷类化合物6个、异黄酮类化合物5个、氨基酸类化合物4个、三萜类化合物4个、醛类化合物4个、多肽类化合物3个、苯丙素类化合物3个、醇类化合物3个,以及其他类化合物8个;正、负离子扫描模式下得到8个重复的成分.结论 UPLC-Orbitrap-MS/MS技术能快速、初步鉴定出通络益晴方中化学成分,可为通络益晴方物质基础研究和新药研发提供依据.

目的:建立鸡内金氨基酸及特征肽的含量测定方法,对不同产地鸡内金进行质量评价.方法:采用高效液相色谱法对鸡内金的12个氨基酸类成分进行测定,同时采用超高效液相串联三重四级杆质谱法对鸡内金的2个特征肽进行测定,并采用偏最小二乘法分析(PLS-DA)对测定结果进行分析.结果:18批鸡内金的12种氨基酸成分总含量相对标准偏差(RSD)范围为2.84％～14.01％,鸡源多肽Ⅰ、鸡源多肽Ⅱ含量RSD分别为47.13％、14.62％,均呈现一定的波动,PLS-DA分析结果显示,3批产地山西和3批产地辽宁独自分为一类,9批产地山东与3批产地浙江的样品共同分为一类.结论:本研究建立的鸡内金氨基酸及特征肽的含量测定方法,能较好地评价不同产地的鸡内金质量,可为鸡内金及动物类药材的质量评价提供参考.

鹿茸作为传统名贵中药材,医用历史悠久,功效广泛,针对肾阳不足、精血亏虚、阳痿滑精、宫冷不孕、腰脊冷痛、筋骨痿软、崩漏等症状均有良好疗效.研究发现鹿茸的多重功效与其最主要的活性成分鹿茸多肽密切相关.作为代表性动物源中药多肽,鹿茸多肽的相关研究揭示了鹿茸的物质基础和作用机制,不断为我们展现传统中药的现代奥秘.鹿茸多肽的提取方式需要保证活性和营养的最大保存,主要采用酶解法、溶液萃取法、CO2超临界提取法等.笔者通过查阅国内外相关文献,系统性地归纳与总结了鹿茸多肽在人体多个系统中重要的治疗作用和保健价值,对鹿茸多肽修复神经、改善血管心肌、减轻肝细胞损伤、调节骨骼活动等多重功效进行重点介绍.为进一步挖掘开发动物药资源宝库提供理论参考,为源自动物药多肽创新药的研发提供新思路.

目的:研究传统中药材全蝎三种热稳定性多肽BmKcug2、BmKcug2-P1 和Martentoxin-P2 的消化酶抗性.方法:结合重组表达、消化酶耐受实验、高效液相色谱技术及结构分析,评价多肽BmKcug2、BmKcug2-P1 和Martentoxin-P2 的肠胃蛋白酶稳定性.结果:多肽BmKcug2 对胃蛋白酶、胰蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶都有很好的稳定性;多肽BmKcug2-P1 对胃蛋白酶稳定性较好,对胰蛋白酶也具有一定的抗性,但对α-胰凝乳蛋白酶稳定较差;多肽Martentoxin-P2 的酶稳定性谱与BmKcug2-P1 类似.结论:本研究发现了全蝎毒腺中存在多肽能够耐受肠胃蛋白酶的消化作用,阐明了全蝎毒腺中多肽的消化酶稳定性,为深入研究全蝎中有效药用成分提供了思路,为系统研究全蝎多肽活性成分和口服给药途径之间的关系奠定了基础.

目的:探讨胰岛淀粉样多肽（IAPP）对阿尔茨海默病（AD）小鼠脑组织中长链非编码RNA（LncRNA）和信使RNA（mRNA）表达谱的影响。方法:选取7月龄雄性APP/PS1转基因AD模型小鼠10只，体质量20～30 g。将AD模型小鼠按数字表法随机分为IAPP干预组和对照组，每组5只。IAPP干预组小鼠腹腔内注射0.5 μmol/L的IAPP（200 μg/kg），每日1次。对照组小鼠腹腔注射相同剂量的磷酸盐缓冲液。两组小鼠干预时间均为10周。干预完成后，颈椎脱位处死小鼠，开颅剥离完整脑组织提取总RNA。应用基因芯片技术获得2组小鼠脑组织LncRNA和mRNA表达谱，筛选出差异表达的LncRNA和mRNA。在差异表达的LncRNA和mRNA中随机选取6个LncRNA，采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）验证基因芯片结果的可靠性。将筛选出的差异表达的mRNA与基因本体论（GO）数据库的各条目比对，从分子功能、生物过程和细胞成分3个领域行GO富集分析；使用京都基因和基因组百科全书（KEGG）数据库行信号通路富集分析。结果:实验过程中小鼠死亡4只，每组2只。IAPP干预组与对照组比较，显著差异表达的LncRNA共有902个，其中显著上调238个、显著下调664个；显著差异表达的mRNA共555个，其中显著上调236个、显著下调319个。qRT-PCR检测验证LncRNA的表达情况，与对照组比较，IAPP干预组AD小鼠脑组织中AK034056、Spock3表达上调，Map3k8、rgs20、Rint、Ppp2r1b表达下调，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。qRT-PCR检测结果与芯片结果相符。GO富集分析：555个差异表达的mRNA，富集得到2 224个GO条目，其中显著上调的差异表达mRNA具有蛋白质结合、细胞周期等分子功能，与催化复合物、蛋白质复合物等细胞组分相关，参与了细胞代谢、高分子代谢等生物过程；显著下调的差异表达mRNA具有G蛋白偶联受体活性、跨膜信号受体活性等相关分子功能，与细胞黏附复合物、整合素复合物等细胞组分相关，参与G蛋白偶联受体信号通路、生物过程的调节等生物学过程。KEGG通路富集分析：555个差异表达的mRNA，富集得到62个通路，其中显著上调的差异表达mRNA富集评分较高的通路为神经退行性变的途径、阿尔茨海默病通路、氧化磷酸化通路、GABA能突触通路等，显著下调的差异表达mRNA富集评分较高的通路为钙信号通路、趋化因子信号通路、磷酸肌醇代谢通路、神经活性配体-受体相互作用通路、白细胞介素-17信号通路等。 结论:IAPP干预使AD小鼠脑组织 LncRNA、mRNA表达谱发生显著变化。差异表达的mRNA分别参与多种不同的生物学过程，差异表达的LncRNA可能通过调控相关mRNA的表达，发挥其生物学功能。

牙髓坏死可导致牙齿脆性增加，易折裂，并阻碍年轻恒牙牙根持续发育。因此牙髓再生治疗具有重要的临床意义。由于牙髓组织具有复杂、多变的解剖结构且包含神经、血管等多种组织成分，牙髓再生面临诸多挑战。回顾近年来应用组织工程方法探索牙髓组织构建与移植的基础研究和临床应用研究文献，重点讨论适宜支架材料的选择与牙髓组织构建方法。文中述及用于构建牙髓组织的支架材料包括海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸，胶原蛋白、明胶、纤维蛋白、丝素蛋白、多肽和自组装多肽、聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物等，简要介绍了其功能特点以及添加生物基质提取物、生长因子等组成的功能修饰或不同功能互补性材料组成的功能改进。结合临床可操作性要求，进一步讨论了由亲水性复合材料或经亲水基团修饰材料制备可注射水凝胶支架材料的组成设计和功能特点，以期为今后牙髓再生研究探索提供一定的借鉴。

目的:以钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病为核心，探讨血清胆汁酸谱分析在协助该病诊断及其鉴别诊断中的价值。方法:收集整理并分析2015年4月初至2021年12月底暨南大学附属第一医院儿科诊治的66例胆汁淤积性肝病（CLDs）患者的临床资料，包括NTCP缺陷病患者32例(成人16例，儿童16例)、希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）16例、Alagille综合征8例，胆道闭锁10例。同时设立成人和小儿健康对照组（各15例）。通过超高效液相色谱-串联质谱技术对研究对象血清胆汁酸成分进行定性定量分析，利用统计学SPSS 19.0及GraphPad Prism 5.0软件对数据进行作图和比较。用 t检验、Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis H检验等统计学方法，比较NTCP缺陷病与相应健康对照组以及NTCP缺陷病与其他CLDs患儿的临床及胆汁酸谱之间的差异。 结果:与健康对照相比，NTCP缺陷病患者总结合型胆汁酸、总初级胆汁酸、总次级胆汁酸，以及甘氨胆酸、牛磺胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等水平均升高（ P < 0.05）；与NTCP缺陷病成人患者相比，NTCP缺陷病患儿血清总结合型胆汁酸和总初级胆汁酸水平均明显升高（ P < 0.05）；NTCP缺陷病患儿血清牛磺鹅脱氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺猪胆酸和牛磺α鼠胆酸水平明显升高，但甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、石胆酸等胆汁酸降低（ P < 0.05）；NTCP缺陷病患儿血清中石胆酸、脱氧胆酸和猪脱氧胆酸等次级胆汁酸水平明显高于NICCD、Alagille综合征和胆道闭锁等其他CLDs组（ P < 0.05）；总初级胆汁酸/总次级胆汁酸、总结合型胆汁酸/总未结合型胆汁酸，以及牛磺胆酸、血清牛磺鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等指标可有效鉴别NTCP缺陷病和其他非NTCP缺陷病CLDs患儿。 结论:证实血清胆汁酸谱分析对于协助NTCP缺陷病的诊断和鉴别诊断具有重要参考价值，深化了对NTCP缺陷病等CLDs患者血清胆汁酸谱变化特征的科学认识，为深入理解其发病机制提供了代谢组学依据，同时为后续深入研究提供了线索和思路。

多肽具有易合成、易代谢、免疫原性低、毒副作用低等优点，多肽支链上大量的官能团可以和药物偶联，是药物递送系统的重要发展方向。应用多肽偶联中药有效单体成分，可以很好的提高其靶向性、稳定性、利用率，延长在肿瘤区域的作用时间，减缓降解等作用。癌症靶向多肽能够特异性识别肿瘤细胞上的膜受体，提高药物靶向治疗效果，减少毒副作用。文章旨在对现有热点中药成分与多肽偶联修饰治疗肿瘤的研究进行综述，为中医中药依托现代科技优化药物疗效提供新思路。

目的:探寻与卵巢癌诊断相关的血清循环多肽标志物。方法:以2018年3月至2018年9月中国医学科学院肿瘤医院妇瘤科收治的原发卵巢上皮癌患者54例(卵巢癌组)、同期在中国医学科学院肿瘤医院体检中心进行体检的健康女性40例(健康对照组)为研究对象。采用随机数字表法，将例卵巢癌患者和健康对照者各按1∶1随机分为训练集和验证集。采用基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)联合磁珠技术检测血清多肽峰，在训练集中筛选卵巢癌组与健康对照组间的差异多肽峰(评分>5)。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析，在训练集和验证集中，筛选曲线下面积(AUC)均≥0.8、诊断卵巢癌的灵敏度和特异度均>90%的差异多肽峰。采用液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)技术鉴定差异多肽峰的成分。结果:在质荷比1 000~10 000范围内，卵巢癌组和健康对照组之间有102个差异多肽峰。ROC曲线分析显示，在训练集和验证集中，AUC均≥0.8的差异多肽峰有42个，其中19个在卵巢癌组血清中高表达，23个低表达；诊断卵巢癌灵敏度与特异度均≥90%的卵巢癌血清高表达差异多肽峰有15个，质荷比分别为7 744.27、5 913.41、5 329.87、4 634.21、4 202.02、3 879.26、3 273.35、3 253.79、3 234.34、2 950.33、2 664.51、2 018.38、1 893.37、1 498.69和1 287.55；诊断卵巢癌灵敏度与特异度均≥90%的卵巢癌血清低表达差异多肽峰有15个，质荷比分别为9 288.46、7 759.77、5 925.24、4 652.77、4 210.42、3 887.02、3 279.90、3 240.82、2 962.15、2 932.70、2 022.42、1 897.16、1 501.69、1 337.38和1 290.13。在卵巢癌患者血清低表达的15个差异多肽峰中未鉴定出多肽峰的蛋白成分，在卵巢癌患者血清高表达的15个差异多肽峰中鉴定出2个多肽峰的蛋白成分，质荷比为1 498.70者是丝甘蛋白聚糖(SRGN)，质荷比为5 913.42者是纤维蛋白原α链(FGA)，二者在全部研究对象中诊断卵巢癌的灵敏度均为100%，特异度分别为90.9%和100%。结论:SRGN和FGA在卵巢癌患者血清中高表达，可能是潜在的卵巢癌诊断标志物。

目的:运用网络药理学方法和分子对接技术探究红花逍遥片治疗卵巢早衰的作用机制，并进一步实验验证。方法:应用TCMSP、PubChem数据库获得红花逍遥片活性成分及相关靶点，应用GeneCards数据库获得卵巢早衰相关靶点，利用Venn在线工具筛选两者交集基因，采用STRING数据库构建交集靶点PPI网络，通过Metescape数据库对核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，采用Cytoscape 3.7.1软件构建“活性成分-靶点”网络和“中药-活性成分-靶点-关键通路-疾病”网络，并进行分子对接验证。采用随机数字表法将小鼠分为空白组、模型组及红花逍遥片组，每组8只。除空白组外，其余各组小鼠采用透明带多肽3（ZP3）和弗式完全佐剂（FCA）建立免疫性卵巢早衰小鼠模型。红花逍遥片组灌胃红花逍遥片溶液0.56 g/kg，空白组、模型组灌胃等体积生理盐水，连续灌胃4周。采用HE染色观察小鼠卵巢组织病理变化。采用免疫组化染色检测ESR1表达，采用Western blot检测Akt、p-Akt表达。结果:获得红花逍遥片与卵巢早衰交集靶点80个，PPI网络包含核心靶点44个，度值排名前5位的活性成分分别为芒柄花素、槲皮素、白桦脂酸、羟基红花黄A和黄芩苷，排名前5位的靶点分别为PPARG、ESR1、AR、AKT1和IL6。核心靶点分子功能主要为受体配体活性，生物过程主要涉及细胞迁移的正向调节，细胞组分主要包括膜筏，主要涉及信号通路有癌症信号通路、癌症中的蛋白聚糖、PI3K-Akt信号通路及HIF-1信号通路等。“中药-成分-靶点-通路-疾病”网络显示，红花逍遥片处方中8味药具有重要核心成分，其中甘草和红花涉及重要核心成分最多。分子对接结果显示，活性成分与核心靶点亲和力良好。实验验证结果显示，红花逍遥片可促进卵泡发育，提高卵巢组织中ESR1表达，并上调PI3K-Akt信号通路关键因子Akt磷酸化水平。结论:红花逍遥片多种活性成分可能通过作用于PPARG、ESR1等多个靶点，并通过PI3K-Akt、HIF-1等信号通路治疗卵巢早衰，其潜在活性成分主要为芒柄花素、槲皮素等。