目的 通过实验探讨微小核糖核酸(microRNA,miR)-100-5p在甲状腺癌细胞中的表达情况及其对细胞增殖与凋亡的调控作用.方法 使用荧光定量PCR检测miR-100-5p在甲状腺癌细胞系(TPC-1,KTC-1)与甲状腺正常细胞系(Nthy-ori3-1)中的相对表达情况.TPC-1细胞分别转染miR-100-5p模拟物(miR-100-5p mimic)、抑制物(miR-100-5p inhibitor)及相应阴性对照(miR-mimic NC,miR-inhibitor NC)后,用CCK-8检测TPC-1细胞增殖情况,流式细胞仪检测TPC-1细胞凋亡情况.通过miRTarBase和TargetScan7.2数据库对miR-100-5p的靶基因进行预测和功能富集分析,用蛋白印迹实验与双荧光素酶报告基因实验验证miR-100-5p对成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)的靶向调控作用.结果 与Nthy-ori3-1细胞相比,miR-100-5p在TPC-1细胞中表达水平(1.87±0.03 vs 1.00±0.03)与KTC-1细胞中表达水平(6.33±0.47 vs 1.00±0.03)均上调,差异具有统计学意义(t=-34.220,-19.588,均P＜0.05).转染miR-100-5p mimic组在24,48,72h细胞450nm吸光度(A450nm)均高于miR-mimic NC组,差异具有统计学意义(t=-7.516,-17.828,-8.445,均 P＜0.05);转染 miR-100-5p inhibitor组在24,48,72h A450nm 均低于 miR-inhibitorNC 组,差异具有统计学意义(t=6.720,6.782,6.073,均 P＜0.05).与 miR-mimic NC组相比,转染miR-100-5p mimic后凋亡率(7.43％±0.49％vs 10.55％±0.80％)下降(t=5.767,P=0.004),与 miR-inhibitor NC 组相比,转染 miR-100-5p inhibitor后凋亡率(3.19％±0.22％vs 2.64％±0.15％)上升(t=-3.606,P=0.023),差异均有统计学意义.蛋白印迹实验显示,与miR-mimic NC组相比,FGFR3 在 miR-100-5p mimic 组蛋白表达水平(0.78±0.12 vs 1.00±0.00)下调(t=3.071,P=0.037),与 miR-inhibitor NC组相比,FGFR3 在 miR-100-5p inhibitor 组蛋白表达水平(1.17±0.07 vs 1.00±0.00)上升(t=-4.509,P=0.046),差异均有统计学意义.与miR-mimic NC相比,miR-100-5p mimic没有降低FGFR33'UTR野生型组荧光素酶活性(1.01±0.17 vs 1.00±0.00)与突变型组荧光素酶活性(0.99±0.11 vs 1.00±0.00),差异无统计学意义(t=-0.057,0.181,P=0.96,0.873).结论 miR-100-5p在甲状腺癌细胞中表达上调,可促进甲状腺癌细胞增殖、抑制细胞凋亡,其可能成为甲状腺癌诊疗中新的生物标志物与调控靶点.

目的 探讨血清微小核糖核酸-503(miR-503)和微小核糖核酸-520h(miR-520h)对妊娠期糖尿病(GDM)患者并发子痫前期(PE)的诊断价值.方法 选取2019年12月至2021年12月于唐山中心医院产科定期产检并建档的GDM患者102例作为研究对象,根据疾病类型分为GDM+PE组(53例)、GDM组(49例).另选取同期于唐山中心医院进行定期产检并分娩的57例健康孕妇作为正常妊娠组.比较3组糖脂代谢相关指标[甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PG)]水平及血清miR-503、miR-520h表达水平、血清胱抑素C(CysC)、同型半胱氨酸(Hcy)水平;比较3组不良妊娠结局.采用多因素Logistic回归分析GDM患者并发PE的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-503、miR-520h单独及2项指标联合检测对GDM并发PE的诊断价值.结果 3组孕周、年龄、孕前体质量指数、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).GDM+PE组TC、TG、FFA水平均明显高于GDM组和正常妊娠组,HDL-C水平明显低于GDM组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(P＜0.05).GDM组TC、FFA水平均明显高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P＜0.05).GDM+PE组和GDM组FINS、FBG、2 h PG、HbA1c水平均明显高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P＜0.05).GDM+PE组血清miR-503、miR-520h表达水平、CysC和Hcy水平均明显高于GDM组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(P＜0.05),GDM组血清miR-503、miR-520h表达水平及CysC和Hcy水平均明显高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P＜0.05).GDM+PE组不良妊娠结局总发生率为62.26％(33/53),GDM 组为40.82％(20/49),正常妊娠组为10.53％(6/57),GDM+PE组不良妊娠结局总发生率明显高于GDM组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(x2=4.692、32.125,P＜0.05),GDM组不良妊娠结局总发生率明显高于正常妊娠组,差异有统计学意义(x2=13.059,P＜0.05).3组孕妇不良妊娠结局中产后出血、早产或过期产、胎盘早剥、新生儿窒息、宫内生长受限的发生率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,CysC水平升高、Hcy水平升高、miR-503表达水平升高和miR-520h表达水平升高均为GDM并发PE的危险因素(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-503、miR-520h单独及2项指标联合检测诊断GDM 并发PE的曲线下面积(AUC)分别为0.755、0.847、0.935,2 项指标联合检测的 AUC 大于 miR-503、miR-520h 单独检测(Z2项联合miR503=4.210、Z2项联合-miR-520h=2.708,P＜0.001、0.007).结论 GDM 并发 PE 患者血清 miR-503、miR-520h 表达水平升高,与妊娠不良结局呈正相关,二者联合检测对诊断GDM并发PE具有重要意义.

目的 探讨下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)组织微小核糖核酸204(mi-croRNA-204,miR-204)、miR-504表达与临床病理特征和预后的关系.方法 选取2018-04/2020-04月作者医院收治的122例HSCC患者为研究对象.收集所有患者术中癌组织及癌旁组织标本(距肿瘤切缘≥2 cm),采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction.RT-PCR)检测癌组织及癌旁组织中 miR-204、miR-504 相对表达量.分析miR-204、miR-504表达与HSCC患者临床病理特征的关系.对HSCC患者进行3年随访.采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析HSCC患者预后的影响因素.绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析miR-204、miR-504低表达和高表达HSCC患者3年总生存情况.结果 与癌旁组织比较,HSCC癌组织miR-204、miR-504表达显著降低(P均＜0.05).不同性别、年龄、吸烟史、饮酒史、T分期、发病部位、淋巴结个数、结外侵犯、术后同步放化疗的HSCC患者miR-204、miR-504表达差异无统计学意义(P＞0.05),N1～N3期、低分化程度HSCC患者的miR-204、miR-504表达显著低于N0期、中高分化程度HSCC患者(P均＜0.05).Cox回归分析结果显示,T分期和N分期升高、阳性淋巴结个数＞2个、伴结外侵犯、低分化程度、miR-204表达降低、miR-504表达降低是HSCC患者预后不良的危险因素(P＜0.05).122例HSCC患者随访3年期间失访5例,最终获得随访117例.Kplan-Meier生存曲线分析显示,miR-204、miR-504 低表达组 3 年总生存率低于高表达组[54.29％(38/70)vs.70.21％(33/47),P＜0.05;50.68％(37/73)vs.77.27％(34/44,P＜0.05].结论 HSCC组织中miR-204、miR-504均呈低表达,二者低表达与HSCC患者的T分期和N分期升高、低分化程度及预后不良有关.

目的:分析彩色多普勒超声与微小核糖核酸(miRNA)-19a(miR-19a和miR-210)在颈动脉狭窄中的应用价值.方法:选取2020年10月至2022年10月在沧州市人民医院诊治的102例颈动脉狭窄患者纳入病例组,另选取同期在医院体检需行彩色多普勒超声检查的102名健康体检者纳入健康对照组.病例组均在入院1周内行彩色多普勒超声检查和数字减影血管造影(DSA)检查,两组均行血清指标检测.比较两组miR-19a、miR-210,以及病例组不同狭窄程度miR-19a、miR-210,分析彩色多普勒超声与miR-19a、miR-210及其联合对颈动脉狭窄的诊断价值.结果:病例组102例患者经彩色多普查超声颈总动脉检测,正常15例,轻度狭窄15例,中度狭窄21例,重度狭窄33例,完全闭塞18例.病例组miR-19a明显高于健康对照组,miR-210明显较低于对照组,差异有统计学意义(t=10.755、-5.903,P＜0.05).病例组不同狭窄程度miR-19a比较:轻度狭窄＜中度狭窄＜重度狭窄＜完全闭塞,miR-210比较:轻度狭窄＞中度狭窄＞重度狭窄＞完全闭塞,差异均有统计学意义(F=160.399、147.462,P＜0.05).受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,彩色多普勒超声、miR-19a及miR-210联合诊断颈动脉狭窄的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.892、0.842、0.729和0.978,联合诊断的灵敏度为97.1%,特异度为95.1%.结论:彩色多普勒超声与miR-19a、miR-210联合对颈动脉狭窄具有较高的诊断价值.

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码 RNA(long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小 RNA-33a-5p(miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值.方法 选取2021年8月～2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR 和 miR-33a-5p 水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清 LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素.结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p(1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34％)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36％),差异具有统计学意义(t/x2=14.835,15.140,23.011,均P＜0.05).不良妊娠结局组血清 LncRNADANCR 水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p(2.00±0.58),FBG(8.97±0.66mmol/L),FINS(18.63±1.31pmol/ml)和 HOMAIR(7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895～17.961,均P＜0.05).LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897.GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P＜0.05),miR-33a-5p 与 FBG,FINS,HOMA-IR 呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均 P＜0.05).LncRNA DANCR 是影响 GDM 患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95％CI:0.693～0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95％CI:1.444～5.225,P=0.002).结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素.

目的 分析乙型肝炎孕产妇微小核糖核酸(miR)-33a、miR-20a、miR-122表达水平及新生儿感染情况.方法 选取2020年1月-2022年2月黄冈市中心医院收治的165例乙型肝炎孕妇设为感染组,另收集同期于医院产检的无乙型肝炎病毒(HBV)感染孕妇184名设为对照组;比较两组及不同病毒载量HBV孕妇miR-33a、miR-20a及miR-122表达情况,分析HBV不同病毒载量孕妇新生儿HBV感染情况.结果 感染组miR-33a、miR-20a及miR-122水平高于对照组(P＜0.05);感染组HBV-脱氧核糖核酸(DNA)阳性孕妇miR-33a、miR-20a及miR-122表达水平高于HBV-DNA阴性孕妇(P＜0.05),感染组HBV-DNA阳性孕妇新生儿HBV感染率高于HBV-DNA阴性孕妇(P＜0.05).结论 乙型肝炎孕妇miR-33a、miR-20a及miR-122表达增加,且随着HBV-DNA载量增加miR-33a、miR-20a及miR-122表达、新生儿HBV病毒感染率均升高.

目的 构建膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BLCA)具有预后价值的内源竞争性核糖核酸(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络,分析关键信使RNA(messenger RNA,mRNA)与免疫功能的关系.方法 UCSC Xena数据库下载 404 例BLCA患者和 28 例正常人的mRNA表达数据,通过差异分析筛选关键mRNA.ENCORI数据库中查找与关键mRNA结合的微小核糖核酸(micro RNA,miRNA)以及与miRNA结合的长链非编码核糖核酸(long non-coding RNA,LncRNA).TCGA数据库下载miRNA和LncRNA的表达数据,对关键mRNA与所有miRNA以及miRNA与所有LncRNA进行共表达分析,筛选出关键的miRNA和LncRNA.根据关键mRNA,miRNA和LncRNA在肿瘤患者和正常人之间表达量的差异进行生存分析,最后构建了ceRNA调控网络.借助TIMER 2.0 数据库,分析关键mRNA与免疫细胞、免疫检查点(CD274,PDCD1,CTLA4)以及免疫细胞标记基因(immunomarker genes,IG)的相关性.结果 筛选出关键mRNA*共 22 个,其中差异显著性最高的是脯氨酸 3-羟化酶 4(proline 3-hydroxylase 4,P3H4).在BLCA中,P3H4 表达高,在高表达组患者的生存时间较短.以关键mRNA为中心环节,共筛选出 33 个miRNA和 14 个LncRNA.经过共表达分析和生存分析后,筛选出具有预后价值的关键miRNA和关键LncRNA分别为hsa-miR-151a-3p和MIR100HG.上述分析结果差异具有统计学意义(均P＜0.05).综合以上结果,构建了包含 1 个mRNA,1 个miRNA和 1 个LncRNA的ceRNA调控网络.免疫分析首次在BLCA肿瘤微环境中发现了与P3H4表达量呈显著正相关的双阳性T细胞.此外还有3种免疫细胞(肿瘤相关性中性粒细胞、肿瘤相关巨噬细胞、树突状细胞)、3 个免疫检查点(CD274,PDCD1,CTLA4)以及 15 个IG与P3H4 相关度显著,这些差异具有统计学意义(均P＜0.01).结论 该研究有助于揭示BLCA的进展机制,构建的ceRNA网络及免疫分析,可为BLCA患者的诊断、治疗、预测提供新的生物学靶点和方向.

目的 探讨解毒复正汤(JieduFuzhengdecoction,JDFZ)通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factorβ Receptor 3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响.方法 利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异;并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量,从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性.利用生物信息学网站重叠分析,初步预测到miR-223-3p与TGFBR33'UTR具有潜在的结合位点序列.接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系.体外培养肺癌A549细胞,采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列(miR-223-3p-mimics)及携带TGFBR3全基因的重组载体(Over-expression-TGFBR3,OE-TGFBR3)分别转染至肺癌细胞,以转入无关序列的模拟剂(Negative control-mimics,NC)作为对照组,收集各组稳转细胞,Transwell小室检测转染处理后及JDFZ作用后的细胞迁移能力;收集各组细胞蛋白,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞中EMT相关蛋白的表达.结果 肺癌组织中miR-223-3p的表达量显著低于癌旁组织;肺癌患者血浆miR-223-3p表达水平明显低于健康正常人.不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)中的miR-223-3p表达量亦低于正常人肺上皮细胞BEAS-2B.利用生物信息学网站及荧光素酶报告基因实验证实了miR-223-3p与TGFBR3的靶向调控关系.与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组的细胞迁移能力均下降(P<0.05),上调TGFBR3和加入解毒复正汤均能有效增强miR-223-3p对A549细胞迁移的负向调节作用;Westenblot结果 发现,与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组E-Cadherin的表达水平上调,N-Cadherin及Vimentin的表达水平下升(P<0.05),两组均在不同程度上抑制EMT的发生;上调TGFBR3和加入解毒复正汤作用能有效增加miR-223-3p对细胞迁移相关蛋白的负向调节作用(P<0.05).结论 解毒复正汤对肺癌A549细胞的侵袭迁移有抑制作用,其机制可能是通过调节miR-223-3p并靶向调控TGFBR3及其下游EMT相关指标的表达来实现的.

胆固醇稳态受多种因素的密切调节,而胆固醇代谢紊乱与2型糖尿病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝病等多种疾病的发生、发展密切相关.微小RNA(microRNA,miRNA)是脂代谢的转录后调控因子,miRNA-185-5p、miRNA-758-5p、miRNA-33a、miRNA-21、miRNA-122和miRNA-370与胆固醇的合成有关,miRNA-33、miRNA-144、miRNA-26、miRNA-758-3p、miRNA-106b、miRNA-10b、miR-NA-302、miRNA-145、miRNA-27a/b和miRNA-613与胆固醇的转运有关,多种microRNA共同参与调控胆固醇代谢中关键蛋白的表达,调控胆固醇的稳态平衡.

目的 探讨CHB患者血清微小核糖核酸(microRNA ,miRNA)-122相对表达水平与肝纤维化分期及临床指标的相关性.方法 选取138例CHB患者和30名健康对照者作为研究对象,应用实时荧光定量PCR检测血清miRNA-122的相对表达水平.检测CHB患者血清ALT 、AST 、γ-GT 、碱性磷酸酶(phosphatase ,ALP) 、TBil 、白蛋白、PT 、HBV DNA的水平,并分析其与血清miRNA-122的相关性.以受试者工作特征(receiver operating characteristic ,ROC )曲线下面积(area under carve , AUC)来评价miRNA-122的诊断价值.组间比较采用 t检验、非参数检验.结果 CHB患者和健康对照者血清miRNA-122相对表达水平分别为4 .41 ± 1 .32和1 .47 ± 0 .58 ,差异有统计学意义(t＝ 3 .16 , P＜0 .01) .G0～G4期CHB患者血清 miRNA-122的相对表达水平分别为2 .31 ± 0 .00 、4 .83 ± 0 .26 、4 .72 ± 0 .85 、5 .45 ± 0 .97 、5 .98 ± 0 .67 ,差异有统计学意义(F＝2 .71 ,P＜0 .05) . S0～S4期CHB患者血清miRNA-122的相对表达水平分别为5 .44 ± 0 .94 、5 .20 ± 0 .35 、4 .29 ± 1 .39 、3 .82 ± 1 .26 、3 .26 ± 0 .88 ,差异有统计学意义(F＝0 .72 ,P＜0 .05 ) .与轻度肝纤维化组(S0～S1)相比,显著性肝纤维化组(S2～S4)的血清miRNA-122水平显著下降.血清miRNA-122表达水平与血清 ALT (r＝ 0 .45 ,P＜ 0 .01)、AST(r＝0 .37 ,P＜0 .05)、TBil(r＝0 .62 ,P＜0 .01)、HBV DNA(r＝0 .32 ,P＜0 .05)和肝组织炎症分级(r＝0 .33 ,P＜0 .05)呈显著正相关,与肝纤维化分期呈显著负相关(r＝ －0 .56 ,P＜0 .01) ,与血清ALP (r＝0 .13)、γ-GT(r＝0 .16)、PT(r＝ －0 .31)和白蛋白(r＝0 .02)的水平无相关性(均 P＞0 .05).血清miRNA-122区分健康对照组和 CHB患者组的 AUC为0 .92 ,预测显著性肝纤维化及早期肝硬化的AUC分别为0 .78 、0 .81 .结论 CHB患者血清miRNA-122与HBV的复制、肝损伤程度及肝纤维化分期密切相关,可能在HBV复制及肝纤维化的发生发展中起抑制作用.