目的 研究艾滋病(AIDS)患者血清微小RNA(miR)-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p的检测意义.方法 选取2020年5月至2023年5月鹤壁市传染病医院收治的100例AIDS患者作为研究对象,设为AIDS组.另选取同期健康志愿者100例设为参考组.比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p水平.根据AIDS患者预后将AIDS组分为预后不良组、预后良好组,比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p、miR-296-5p水平.采用多因素Logistic回归分析AIDS患者预后不良的影响因素.结果 AIDS组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于参考组,miR-296-5p水平低于参考组,差异具有统计学意义(P＜0.05).预后不良组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于预后良好组,miR-296-5p水平低于预后良好组,差异具有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,miR-210-5p、miR-23a-3p水平升高及miR-296-5p水平降低均是AIDS患者预后不良的危险因素(P＜0.05).结论 AIDS患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平异常升高,miR-296-5p水平异常降低,其均对AIDS患者的预后具有一定的评估作用.

目的:探讨微小RNA-296（miR-296）在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞（HFb）的作用。方法:采用实验研究方法。将12只雌雄不限成年新西兰长耳兔按完全随机法分为正常对照组和瘢痕组，每组6只。瘢痕组根据文献制作兔耳增生性瘢痕模型，正常对照组兔不行任何处理。于瘢痕组建模后60 d，采用苏木精-伊红染色法观察2组兔耳瘢痕/皮肤组织中成纤维细胞（Fb）生长与排列，采用实时荧光定量反转录PCR法检测2组兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和转化生长因子β 1（TGF-β 1）的mRNA表达量，另对miR-296与TGF-β 1mRNA表达量的相关性进行Pearson回归分析。取2批HFb，第1批分为TGF-β 1野生型+miR-296阴性对照组和TGF-β 1野生型+miR-296模拟物组，第2批分为TGF-β 1突变型+miR-296阴性对照组和TGF-β 1突变型+miR-296模拟物组，分别转染对应的序列。转染后48 h，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测每组细胞TGF-β 1的荧光素酶和肾荧光素酶的表达，以其比值反映基因表达水平。取2批HFb，每批细胞均分为miR-296阴性对照组和miR-296模拟物组，分别转染对应序列。第1批细胞转染后0（即刻）、12、24、36、48 h，采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况。第2批细胞转染后24 h，采用蛋白质印迹法检测细胞中TGF-β 1和Ⅰ型胶原蛋白表达情况。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、独立样本 t检验。 结果:瘢痕组建模后60 d，瘢痕组兔耳瘢痕组织中Fb过度增生且排列紊乱，正常对照组兔耳皮肤组织中Fb生长与排列无异常；瘢痕组兔耳瘢痕组织中miR-296的mRNA表达量（0.65±0.11）显著低于正常对照组兔耳皮肤组织（1.19±0.12， t=5.175， P<0.01），瘢痕组兔耳瘢痕组织中TGF-β 1的mRNA表达量（1.47±0.06）显著高于正常对照组兔耳皮肤组织（1.10±0.03， t=12.410， P<0.01）。Pearson回归分析显示，12只兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和TGF-β 1的mRNA表达量呈明显负相关（ F=7.278， P<0.05）。转染后48 h，TGF-β 1野生型+miR-296模拟物组细胞TGF-β 1的基因表达明显低于TGF-β 1野生型+miR-296阴性对照组（ t=35.190， P<0.01），2个TGF-β 1突变型组TGF-β 1基因表达相近（ P>0.05）。miR-296模拟物组细胞增殖能力在转染后12、24、36、48 h明显低于miR-296阴性对照组（ t=3.275、11.980、10.460、17.260， P<0.05或 P<0.01）。转染后24 h，miR-296阴性对照组细胞TGF-β 1和Ⅰ型胶原的蛋白表达量均明显高于miR-296模拟物组（ t=3.758、29.390， P<0.05或 P<0.01）。 结论:兔增生性瘢痕中miR-296表达下调，miR-296能够通过下调TGF-β 1的表达抑制HFb的增殖和Ⅰ型胶原蛋白的表达。

目的:探讨微小RNA(miR)-296-3p靶向Notch同源物2(Notch2)对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移及侵袭的影响。方法:收取南通市第一人民医院胸外科2022年4月至2023年3月间手术的50例，50～65岁间的肺腺癌患者的癌及癌旁组织，其中男30例，女20例，术后病理均无淋巴结及远处转移，应用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测上述组织中miR-296-3p的表达。利用慢病毒构建miR-296-3p过表达的A549/miR-296-3p，对照组为A549/miRNA。利用Transwell实验检测miR-296-3p过表达对A549细胞迁移及侵袭的影响；通过蛋白质印迹法(Western blot)检测各组A549细胞中Notch2的表达。利用双荧光素酶报告实验验证Notch2是否为miR-296-3p的靶基因。组间数据比较采用 t检验。 结果:qRT-PCR结果提示，miR-296-3p在非小细胞肺癌癌旁组织中的表达水平(4.215±1.600)显著高于癌组织(1.931±0.700)，差异有统计学意义( t＝9.539， P<0.01)。在细胞层面，miR-296-3p在支气管上皮细胞BEAS-2B中的表达水平(1.018±0.075)显著高于在A549细胞(0.581±0.014)，差异有统计学意义( t＝9.842， P<0.01)。对照组A549/miRNA细胞中miR-296-3p的表达水平(0.846±0.047)显著低于A549/miR-296-3p组(2.266±0.073)，差异有统计学意义( t＝28.200， P<0.01)。Transwell迁移实验结果，A549/miRNA对照组每视野A549迁移细胞数为(242.560±7.550)，显著高于A549/miR-296-3p组为(86.120±5.570)，差异有统计学意义( t＝28.800， P<0.01)。A549/miRNA对照组，每视野A549侵袭细胞数为(114.700±6.510)，显著高于A549/miR-296-3p组为(48.000±3.610)，差异有统计学意义( t＝15.520， P<0.01)。生物信息学结果提示Notch2可能为miR-296-3p的靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验证实。 结论:miR-296-3p通过调节靶基因Notch2蛋白的表达水平，而调节非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。

目的:研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌（简称舌鳞癌）细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法:以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照，实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1（NUPR1） mRNA的表达，蛋白印迹法检测NUPR1蛋白表达水平。CAL27细胞分为对照组（NC组）、miR-con组、miR-296-3p组、si-con组、si-NUPR1组、miR-296-3p+pcDNA组和miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组，细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测细胞活性，Transwell检测细胞迁移和侵袭，蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CAL27细胞中miR-296-3p与NUPR1的调控关系。结果:与HOK细胞相比，在舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p的含量显著降低（0.54 ± 0.08、0.38 ± 0.05、0.59 ± 0.07比1.04 ± 0.12， t = 10.401、15.231、9.718， P均<0.05），NUPR1 mRNA （5.94 ± 0.40、4.48 ± 0.45、5.19 ± 0.48比0.94 ± 0.12， t = 35.918、22.803、25.769）和NUPR1蛋白（0.79 ± 0.09、0.54 ± 0.05、0.62 ± 0.08比0.28 ± 0.04， t = 15.535、12.182、11.404）表达量均显著升高（ P均<0.05）。与NC组、miR-con组相比，miR-296-3p组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低（ P均<0.05）。与NC组、si-con组相比，si-NUPR1组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低（ P均<0.05）。miR-296-3p在CAL27细胞负调控NUPR1表达。与miR-296-3p+pcDNA组相比，miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组CAL27细胞活性（138.34 ± 5.73比98.54 ± 5.89， t = 14.530）、迁移数（95.28 ± 7.56比67.92 ± 5.23， t = 8.929）、侵袭数（184.53 ± 17.57比101.26 ± 10.64， t = 12.162）及PCNA （0.68 ± 0.07比0.35 ± 0.06， t = 10.738）、MMP-2（0.43 ± 0.05比0.29 ± 0.04， t = 6.559）和MMP-9（0.58 ± 0.06比0.33 ± 0.08， t = 7.500）的蛋白表达均升高（ P均<0.05）。 结论:miR-296-3p通过靶向负调控NUPR1表达抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:检测微小RNA(miR)-296在三阴性乳腺癌(TNBC)组织及细胞株中的表达，探讨miR-296对TNBC细胞增殖，凋亡的影响及其机制。方法:TNBC细胞株人乳腺癌细胞-231(MDA-MB-231)，人乳腺癌细胞-453(MDA-MB-453)及人正常乳腺上皮细胞(MCF10A)购自中国科学院上海细胞生物学研究所，miR-296的过表达及干扰质粒分别转染至细胞株中，细胞分组为MDA-MB-231、MDA-MB-231-mimics、MDA-MB-231-anti-sh296及MDA-MB-453、MDA-MB-453-mimics、MDA-MB-453-anti-sh296；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-296在各组细胞中的相对表达量；使用LipofectamineTM 2000脂质体转染miR-296至细胞中，Real-time PCR证实转染成功后；通过细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测对细胞生存率的影响；通过集落形成实验检测细胞的增殖能力；流式细胞实验检测miR-296对细胞凋亡的影响。应用SPSS 16.0统计软件分析。结果:与癌旁组织比较，miR-296在TNBC组织中的含量明显降低(0.48±0.23比1.00±0.25， t＝10.89， P<0.01)。miR-296在TNBC细胞株MDA-MB-231，MDA-MB-453中的表达明显低于正常乳腺上皮细胞MCF10A(0.19±0.08比1.00±0.26， t＝8.36， P<0.01；0.46±0.19比1.00±0.26， t＝4.68, P<0.01)；与对照组比较，过表达miR-296后MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-mimics细胞生存率低于转染前[(65.81±10.49)%比(99.39±22.58)%， t＝3.82， P<0.01]，[(73.17±11.81)%比(100.13±19.35)%， t＝3.36， P<0.01]；而给予干扰miR-296后细胞生存率较转染前升高；过表达miR-296后，细胞MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-mimics的克隆相对值明显低于对照组(0.23±0.10比0.99±0.23， t＝8.12, P<0.01)，(0.43±0.16比1.01±0.20， t＝6.44, P<0.01)；而干扰miR-296后的克隆相对值明显高于对照组；过表达miR-296后，MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-mimics细胞的凋亡百分数高于对照组[(25.76±2.83)%比(6.73±1.09)%， t＝17.72， P<0.01]，[(21.16±2.92)%比(5.56±0.87)%， t＝14.47， P<0.01]，干扰miR-296后细胞的凋亡百分数下降。过表达miR-296后，细胞MDA-MB-231-mimics和MDA-MB-453-的CX3趋化因子受体1(CX3CR1)的表达量低于对照组(0.36±0.14比1.00±0.20， t＝7.45， P<0.01)，0.43±0.10比1.00±0.16， t＝8.48, P<0.01)；而干扰miR-296后，细胞MDA-MB-231-sh-296和MDA-MB-453-sh-296的CX3CR1的表达量高于对照组(5.91±1.57比1.00±0.20， t＝8.79， P<0.01)，(4.89±1.08比1.00±0.16， t＝10.03， P<0.01)。 结论:抑制miR-296的表达，可以通过靶向作用提高TNBC细胞的生存率，降低凋亡百分数，提示miR-296可能通过CX3CR1在TNBC中发挥抑癌作用。

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白667反义RNA1(ZNF667-AS1)下调微小RNA(miRNA，miR)-296对胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移的影响。方法:双荧光素酶鉴定ZNF667-AS1与miR-296的靶向关系。实验分为对照组、空载体质粒组、sh-ZNF667-AS1组、sh-ZNF667-AS1＋阴性对照组、sh-ZNF667-AS1＋miR-296 mimic组。空载体质粒组转染pEGFPN1空载体，sh-ZNF667-AS1组转染pEGFPN1-sh-ZNF667-AS1，质粒转染成功后，在sh-ZNF667-AS1组基础上，sh-ZNF667-AS1＋阴性对照组转染miR-296 mimic NC，sh-ZNF667-AS1＋miR-296 mimic组转染miR-296 mimic。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZNF667-AS1、miR-296水平；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；Transwell检测细胞侵袭和迁移；蛋白质免疫印迹实验检测细胞中迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白水平。多组间比较行单因素方差分析，进一步两两比较行SNK- q法。 结果:生物信息学软件(Starbase)分析显示ZNF667-AS1序列上存在miR-296潜在结合位点，且经荧光素酶实验验证，miR-296与ZNF667-AS1呈正相关( P<0.05)。0 h各组细胞吸光度( A450)值差异无统计学意义( F＝1.071， P>0.05)，12、24、36、48 h各组细胞 A450值比较，差异有统计学意义( F＝17.238、93.997、48.271、60.646， P<0.05)。细胞处理48 h，对照组、空载体质粒组、sh-ZNF667-AS1组、sh-ZNF667-AS1＋阴性对照组、sh-ZNF667-AS1＋miR-296 mimic组中ZNF667-AS1水平分别为1.01±0.12、0.98±0.14、0.44±0.09、0.46±0.07、0.76±0.12；miR-296水平分别为1.01±0.14、1.02±0.13、0.39±0.06、0.42±0.05、0.72±0.09；侵袭细胞数量分别为(83.25±6.05)、(84.37±8.76)、(39.49±4.15)、(42.15±7.42)、(63.18±7.13)个；迁移细胞数量分别为(126.60±8.79)、(124.49±9.12)、(76.16±6.48)、(79.44±12.15)、(118.18±6.86)个，且差异有统计学意义( F＝36.498、55.130、58.771、47.314， P<0.05)。 结论:降低ZNF667-AS1表达可下调miR-296表达抑制胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移，而过表达miR-296可逆转上述过程。

目的:探究微小RNA-296-5p(miR-296-5p)对脑梗死(CI)后神经功能损伤的影响及其与血管紧张素转换酶2(ACE2)信号通路介导的内皮祖细胞(EPC)活力的调节关系.方法:选取本院70例确诊为CI且伴有神经功能损伤的患者血清标本(CI组)和70例健康志愿者的血清标本(健康组),RT-qPCR法检测两组血清miR-296-5p、ACE2和Mas mRNA的表达.构建大鼠CI模型,将SD大鼠随机分为健康对照组、模型对照组、sh-miR-296-5p组和ACE2过表达组(OE-ACE2组).对各组大鼠进行神经功能损伤严重程度评分(NSS).TTC染色法观察各组大鼠CI情况.RT-qPCR法检测大鼠血清miR-296-5p、ACE2和Mas的mRNA表达.分离并常规培养EPC,将EPC随机分为对照组(control组)和sh-miR-296-5p组、OE-ACE2组、OE-miR-296-5p+OE-ACE2组和sh-miR-296-5p+sh-ACE2组.CCK-8法测定EPC活力情况.流式细胞术检测EPC凋亡情况.RT-qPCR法检测EPC中miR-296-5p、ACE2和Mas mRNA的表达.双萤光素酶报告基因实验验证miR-296-5p和ACE2的关系.结果:(1)临床试验:与健康组相比,CI患者血清miR-296-5p水平显著上升(P<0.05),ACE2和Mas的 mRNA表达水平显著降低(P<0.05).(2)动物实验:与健康对照组相比,模型对照组大鼠的NSS评分、CI面积、血清miR-296-5p水平和Mas mRNA表达水平显著上升(P<0.05),ACE2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05).与模型对照组相比,sh-miR-296-5p组和OE-ACE2组大鼠NSS评分、CI面积、血清miR-296-5p水平和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05),ACE2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05).(3)细胞实验:与control组相比,sh-miR-296-5p组和OE-ACE2组EPC细胞的A450和miR-296-5p水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著升高(P<0.05).与sh-miR-296-5p组相比,sh-miR-296-5p+sh-ACE2组细胞的A450和miR-296-5p水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05).与OE-ACE2组相比,OE-miR-296-5p+OE-ACE2组细胞的A450、miR-296-5p水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05).结论:敲减miR-296-5p可能通过介导ACE2信号通路,抑制EPC活力,减轻CI后神经功能损伤.

目的 探讨白术内酯Ⅲ(A Ⅲ)通过微小RNA-296-5p(miR-296-5p)对自发性高血压大鼠(SHR)脑卒中的作用及可能机制.方法 使SHR连续2个月自由饮用0.9％氯化钠溶液,然后给予1％氯化钠溶液喂养,构建SHR脑卒中模型.将模型大鼠分为模型组(Model组)、A Ⅲ低剂量组(A Ⅲ-L组)、A Ⅲ高剂量组(A Ⅲ-H组)、阳性药物尼莫地平组(Nim组)、miR-296-5p 激动剂组(miR-296-5p agomir 组)、agomir NC 组、A Ⅲ-H+miR-296-5p agomir 组、A Ⅲ-H+agomir NC 组,每组 12只.检测并记录大鼠神经症状评分、平均动脉压、存活时间、血小板黏附率变化,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠脑组织海马CA1区病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测海马CA1区中miR-296-5p表达.结果 与NC组比较,Model组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤严重,差异有统计学意义(P＜0.05);与Model组比较,A Ⅲ-L组、A Ⅲ-H组、Nim组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达降低,存活时间延长,海马CA1区病理损伤减轻,差异有统计学意义(P＜0.05);与Model组、agomir NC组比较,miR-296-5p agomir组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤加剧,差异有统计学意义(P＜0.05);与A Ⅲ-H组、A Ⅲ-H+agomir NC组比较,A Ⅲ-H+miR-296-5p agomir组大鼠神经症状评分、平均动脉压、血小板黏附率、miR-296-5p表达升高,存活时间缩短,海马CA1区病理损伤严重,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 A Ⅲ可能通过抑制miR-296-5p表达对SHR脑卒中起到治疗作用.

目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37％:76.80％),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.

目的 对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者外周血血清miRNA差异表达分析,为筛选出T2DM发生发展有关的miRNA分子标记物奠定基础,从而为T2DM预防、早期诊断和治疗方案提供指导.方法 采用Gene-ChipTM miRNA 4.0 Array筛选3组受试者外周血血清(T2DM组、T1DM组、对照组)的差异miRNA,并对差异miRNA进行靶基因预测和靶基因信号通路富集分析(KEGG).结果 T2DM组分别与对照组,T1DM组相比,hsa-miR-505-3p和hsa-miR-548an均上调,hsa-miR-296-3p,hsa-miR-3160-5p,hsa-miR-33a-5p,hsa-miR-572和hsa-miR-96-5p均下调.通过靶基因预测和Pathway分析,筛选出5个miRNA(hsa-miR-505-3p,hsa-miR-548an,hsa-miR-296-3p,hsa-miR-3160-5p,hsa-miR-33a-5p,hsa-miR-572和hsa-miR-96-5p)、7个基因(MTOR,SLC2A2,PRKCE,IRS2,IRS1,MAPK8,MAPK10)可能与2型糖尿病胰岛素抵抗相关.结论该研究筛选出的5个miRNA和7个基因,可为2型糖尿病胰岛素抵抗的研究提供理论基础.