目的:探讨水通道蛋白3（AQP3）在皮肤光老化过程中的作用及机制。方法:将正常人皮肤成纤维细胞（NHDF）分为NHDF组（未转染）、AQP3 cDNA组（转染AQP3 cDNA）、AQP3 siRNA组（转染AQP3 siRNA）、核内不均一核糖核蛋白Q（hnRNPQ）cDNA组（转染hnRNPQ cDNA）、hnRNPQ siRNA组（转染hnRNPQ siRNA）、AQP3-hnRNPQ cDNA组（转染AQP3 cDNA和hnRNPQ cDNA）、AQP3-hnRNPQ siRNA组（转染AQP3和hnRNPQ siRNA）、cDNA空载体组（转染cDNA空载体）、siRNA空载体组（转染siRNA空载体）。用长波紫外线（UVA，10 J·cm -2·d -1）连续照射已经转染或未转染的NHDF 3 d来建立细胞衰老模型，同时以未接受UVA照射的NHDF作为对照。用细胞计数法评估各实验组细胞增殖活性，衰老相关-β半乳糖苷酶染色试剂盒对各实验组进行染色来评估HDF的衰老水平，用荧光素酶报告基因技术检测p53转录调控活性，用Western印迹分析NHDF中AQP3、hnRNPQ及衰老相关蛋白p53、p21的表达水平。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用ANOVA检验。 结果:用UVA连续照射各组NHDF 3 d后，NHDF中p53、p21的表达水平和β半乳糖苷酶阳性细胞百分率明显高于未照射的对照组（ P<0.05），但是AQP3的表达水平和照射后第5、6、7天细胞增殖活性明显低于对照组（ P<0.05）。在接受UVA连续照射3 d后，AQP3 siRNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型较siRNA空载体组明显加重，两组间p53、p21、hnRNPQ的表达水平和β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性、细胞增殖活性差异均有统计学意义（均 P<0.05），进一步沉默hnRNPQ能够逆转上述反应。与siRNA空载体组相比，hnRNPQ siRNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显减轻，两组间p53、p21表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性差异均有统计学意义（均 P<0.05）。在接受UVA连续照射3 d后，cDNA空载体组中p53、p21、hnRNPQ的表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性分别为0.56 ± 0.08、0.70 ± 0.07、0.92 ± 0.03、（81.53 ± 7.62）%、7.16 ± 0.25、（2.15 ± 0.23）× 10 6/ml，而AQP3 cDNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显轻于cDNA空载体组，其上述指标分别为0.25 ± 0.06、0.23 ± 0.06、0.82 ± 0.09、（31.23 ± 6.54）%、2.52 ± 0.36、（2.93 ± 0.33）× 10 6/ml，两组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05），进一步过表达hnRNPQ能够逆转上述效应。在接受UVA连续照射3 d后，hnRNPQ cDNA组中p53、p21的表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性分别为1.41 ± 0.09、1.42 ± 0.06、（91.06 ± 4.24）%、12.35 ± 0.88、（1.23 ± 0.41）× 10 6/ml，与cDNA空载体组相比，hnRNPQ cDNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显加重，两组比较，上述指标差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:AQP3可能通过调控hnRNPQ下调p53的表达来减缓UVA诱导的NHDF衰老。

目的:探讨血浆核内不均一核糖核蛋白A2/B1（heterogeneous nuclear rib nucleoprotein A2/B1，hnRNP A2/B1）、β淀粉样蛋白42（amyloid-β 42，Aβ 42）及磷酸化tau 蛋白（phosphorylated tau protein，P-tau）水平在术前诊断老年患者轻度认知功能障碍（mild cognitive impairment，MCI）的应用价值。 方法:纳入2020年6月至2021年3月于天津市第三中心医院行择期手术患者200例，年龄65~80岁。根据国际MCI工作组标准及欧洲阿尔茨海默病联合会工作组标准将患者分为MCI组（ n=100）与对照组（ n=100），每组男58例、女42例。术前检测患者血浆hnRNP A2/B1、Aβ 42及P-tau水平，计算其诊断MCI的灵敏度、特异度及准确度，绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估各指标的诊断价值。 结果:MCI组血浆hnRNP A2/B1、Aβ 42及P-tau水平［ M（ Q1， Q3）］分别为310.0（275.1，344.2）、34.5（24.9，42.5）、190.4（150.4，301.7）ng/L，显著高于对照组的272.7（239.6，291.5）、18.7（14.7，26.6）、140.0（101.8，217.5）ng/L（均 P<0.05）。以国际MCI工作组标准为金标准，血浆hnRNP A2/B1预测MCI的灵敏度、特异度与ROC曲线下面积（area under the ROC curve，AUC）分别为80%、61%、0.781，Aβ 42预测MCI的灵敏度、特异度与AUC分别为78%、73%、0.744，P-tau预测MCI的灵敏度、特异度与AUC分别为51%、79%、0.675。hnRNP A2/B1与Aβ 42预测MCI的灵敏度、特异度与AUC差异均无统计学意义（均 P>0.05），但两者灵敏度均高于P-tau（均 P<0.001）；与P-tau相比，血浆hnRNP A2/B1预测MCI的AUC较高（ P<0.05）。当3种指标联合时，其灵敏度为82%，AUC为0.842，均为最高，但特异度（71%）降低（均 P<0.05）。 结论:血浆hnRNP A2/B1、Aβ 42及P-tau三者联合可提高术前诊断老年患者MCI的灵敏度和准确度，诊断效能最大，有一定临床应用价值。

目的:探讨hnRNP E1对HPV16早期基因E2、E6表达的调控及宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法:采用体外细胞实验方法，对HPV16阳性人宫颈鳞癌SiHa细胞株采用hnRNP E1cDNA质粒上调hnRNP E1表达，于上调前、后采用Real-time PCR和Western blot分别检测各组细胞HPV16 E2、E6 mRNA和蛋白表达水平，同时，应用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡。采用SPSS 22.0和Graphpad Prism 7.0软件进行相关资料分析。结果:随着转染时间的增加（24、48、72 h），hnRNP E1过表达组的SiHa细胞活性及处于增殖状态的细胞数逐渐减少（ P<0.05），而G0/G1期细胞比例增高，S、G2/M期细胞比例及增殖指数降低（ P<0.05），晚期凋亡率和细胞总凋亡率逐渐增加（ P<0.05）。hnRNP E1过表达组HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空质粒组，差异有统计学意义（ P<0.05），且随着HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平的降低，SiHa细胞增殖指数下降，而总凋亡率有增加趋势。3组间HPV16 E2 mRNA表达量差异无统计学意义（ P=0.427），HPV16 E2蛋白未被检测到。 结论:hnRNP E1可抑制HPV16 E6的转录和翻译，进而抑制宫颈癌细胞增殖，促使凋亡，hnRNP E1可作为抑制宫颈癌变的潜在靶标。但本研究未发现hnRNP E1与HPV16 E2在SiHa细胞中的关系。

目的:探讨核不均一核糖核蛋白A1(hnRNPA1)和白细胞分化抗原44(CD44)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及临床意义。方法:利用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库检索hnRNPA1和CD44 mRNA在CRC组织中的表达，收集2015年1月至2017年1月咸宁市中心医院联合遵义医科大学附属医院经病理确诊的155例CRC癌组织及50例癌旁组织，采用免疫组织化学方法检测当中组织hnRNPA1和CD44蛋白表达， χ2检验分析两者与患者临床病理特征、生存情况的关系。 结果:GEPIA数据库分析结果表明hnRNPA1与CD44 mRNA在CRC癌组织中高表达。免疫组织化学结果显示hnRNPA1、CD44蛋白在CRC癌组织中的表达明显高于其癌旁组织(hnRNPA1: χ2＝31.230， P<0.01；CD44: χ2＝21.150， P<0.01)。hnRNPA1蛋白的表达与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及癌胚抗原(CEA)相关( χ2＝9.913、7.958、11.932、22.627、25.981、22.670， P<0.05)；与患者性别及年龄无关( χ2＝0.284、0.164， P>0.05)。CD44蛋白的表达与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及CEA相关( χ2＝4.645、4.626、6.095、6.371、13.821， P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤大小无关( χ2＝0.251、0.103、2.524， P>0.05)。Spearman相关分析提示hnRNPA1与CD44在CRC中的表达呈正相关( r＝0.272， P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析发现hnRNPA1、CD44高表达组5年总生存率均低于其低表达组(hnRNPA1： χ2＝23.92， P<0.01；CD44: χ2＝15.15， P<0.01)。Cox分析hnRNPA1[风险比( HR)＝2.714，95%可信区间( CI)＝1.305~5.646， P< 0.01]、CEA( HR＝2.538，95% CI＝1.599~4.030， P<0.01)及TNM分期( HR＝3.978，95% CI＝1.253~12.629， P<0.05)作为影响结直肠癌手术后总生存率的独立预后因子。 结论:hnRNPA1可能协同CD44参与CRC发生发展过程，并作为CRC潜在预后标志物。

目的:采用细胞实验评价核转运蛋白β2 (Kapβ2)介导的核不均一性核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)核转位与七氟烷脑神经毒性的关系。方法:采用小鼠海马细胞系HT22细胞，以2×10 5/孔和1×10 6/孔的密度接种于共聚焦培养皿和六孔培养板，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：携带绿色荧光蛋白(GFP)空载腺病毒转染的对照组(GFP-C组)、携带GFP空载腺病毒转染的七氟烷组(GFP-Sev组)、Kapβ2基因过表达腺病毒转染的对照组(Kapβ2-C组)和Kapβ2基因过表达腺病毒转染的七氟烷组(Kapβ2-Sev组)。细胞常规培养48 h后，转染携带GFP的空载腺病毒(GFP-C组和GFP-Sev组)和Kapβ2基因过表达的腺病毒(Kapβ2-C组和Kapβ2-Sev组)。转染48 h后GFP-C组和Kapβ2-C组继续常规培养48 h；GFP-Sev组和Kapβ2-Sev组采用3%七氟烷孵育3 h，随后常规培养48 h。采用Western blot法测定细胞Kapβ2、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、hnRNPA2/B1表达，并计算hnRNPA2/B1核质比。采用免疫荧光实验进行hnRNPA2/B1亚细胞定位。 结果:与GFP-C组比较，GFP-Sev组SYP、PSD95表达下调，hnRNPA2/B1核质比降低，细胞质hnRNPA2/B1表达上调，Kapβ2-C组Kapβ2表达上调( P<0.05)；与Kapβ2-C组比较，Kapβ2-Sev组SYP、PSD95表达下调，hnRNPA2/B1核质比降低，细胞质hnRNPA2/B1表达上调( P<0.05)；与GFP-Sev组比较，Kapβ2-Sev组Kapβ2、SYP、PSD95表达上调，hnRNPA2/B1核质比升高，细胞质hnRNPA2/B1表达下调( P<0.05)。 结论:Kapβ2介导的hnRNPA2/B1核转位可能是七氟烷脑神经毒性的内源性保护机制。

目的:研究RNA结合蛋白核不均一核糖核蛋白U（hnRNP U）在急性髓系白血病（AML）中临床意义及致病机制。方法:基于数据库（GEPIA）和本中心数据比较hnRNP U在AML患者及健康对照者中表达情况；通过Cbioportal数据库下载Beat AML数据集（158例），按照hnRNP U表达水平分为高表达组（89例）和低表达组（69例）并对两组临床特征进行比较；选择hnRNP U高表达的Kasumi-1和MOLM-13细胞系，敲低hnRNP U后通过CCK-8检测细胞增殖能力，利用Annexin Ⅴ-APC/7-AAD抗体检测细胞凋亡情况，通过定量分析DNA含量（PI染色）检测细胞周期变化及克隆形成实验检测细胞集落形成能力等方面研究hnRNP U对人AML细胞系生物学行为的影响；利用Western blot法研究敲低hnRNP U后对DDR（DNA Damage Response）通路蛋白cleaved-PARP、p-H2A.X表达的影响。结果:①泛癌分析发现hnRNP U在AML中高表达，AML患者外周血单个核细胞中hnRNP U mRNA表达水平显著高于健康对照者（0.0315±0.0042对0.0195±0.0006， P<0.01）；②hnRNP U高表达组中位发病年龄为56（2~87）岁，hnRNP U低表达组中位发病年龄为65（8~85）岁，hnRNP U高表达组较低表达组发病年龄更早（ t=-2.681， P=0.007），且合并FLT3突变比例更高（ χ2=4.069， P=0.044）；③敲低hnRNP U后Kasumi-1、MOLM-13细胞增殖受抑，细胞凋亡率增高，集落形成能力减弱，细胞周期阻滞在G 2/M期，与对照组比较，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）；④敲低hnRNP U可引起DDR通路上cleaved-PARP、p-H2A.X蛋白表达上调。 结论:hnRNP U在AML中高表达，敲低hnRNP U后可抑制AML的发生发展，其可能是通过激活DDR通路发挥作用。

核内不均一核糖核蛋白属于RNA结合蛋白中的一类，具有高度保守的结构。其中，核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)参与转录、翻译等多种过程。近年来，神经退行性疾病研究领域发现，hnRNPA2/B1促进细胞质内纤维蛋白聚集，参与神经元内应激颗粒形成，调节多种认知功能相关过程，与肌萎缩侧索硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病等神经退行性疾病存在密切联系。本文综述相关研究，对hnRNPA2/B1在神经退行性疾病中的重要作用与机制进行总结，为未来神经退行性疾病诊断及治疗提供帮助。

目的 探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1 和miR-409-3p表达水平.双荧光素酶检测 LncRNA CBR3-AS1 和 miR-409-3p及 hnRNPA2B1 和miR-409-3p的靶向关系.将Hep G2 细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1 组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组.平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9 蛋白的表达变化.小鼠移植瘤实验检测LncRNA CBR3-AS1对肝癌肿瘤生长及miR-409-3p/hnRNPA2B1 的影响.结果 与癌旁组织比较,癌组织中LncRNA CBR3-AS1 表达显著升高,miR-409-3p表达显著降低(P<0.05).StarBase预测显示LncRNA CBR3-AS1 与miR-409-3p有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与LncRNA CBR3-AS1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组LncRNA CBR3-AS1 表达明显下降,miR-409-3p表达明显上升(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组miR-409-3p表达明显下降(P<0.05).与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+ anti-miR-409-3p组Hep G2 细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).生物信息学分析显示miR-409-3p与hnRNPA2B1 有靶向结合位点.双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与hnRNPA2B1-WT共转染Hep G2 细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组miR-409-3p表达明显上升,hnRNPA2B1 表达明显下降(P<0.05);与 miR-409-3p mimics+pcDNA 组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组 hnRNPA2B1 表达明显上升(P<0.05),与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1 组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,小鼠注射转染si-CBR3-AS1 的细胞后,移植瘤体积生长缓慢.与si-NC组比较,si-CBR3-AS1 组移植瘤中LncRNA CBR3-AS1 表达水平下降,miR-409-3p表达水平升高(P<0.005).免疫组化检测结果显示,si-CBR3-AS1 组移植瘤中,hnRNPA2B1 蛋白表达水平显著降低(P<0.005).结论 LncRNA CBR3-AS1 在肝癌中表达升高,下调LncRNA CBR3-AS1 的表达,可上调miR-409-3p表达,从而下调hnRNPA2B1 表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡.

目的:分析核不均一性核糖核蛋白A1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependentkinase 2,CDK2)在口腔鳞状细胞癌中的表达.抑制hnRNP A1 表达对CDK2 以及口腔癌细胞增殖的影响.观察CDK2 抑制剂(Dinaciclib)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响.方法:免疫组化分析口腔癌组织以及癌旁组织中hnRNP A1、CDK2 的表达.体外培养口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27 进行ShRNA转染构建稳定表达细胞系,qRT-PCR与Western Blot法检测细胞hnRNP A1、CDK2 的mRNA表达以及蛋白表达水平.以CDK2 抑制剂(Dinaciclib)梯度浓度处理CAL27 细胞,CCK-8 法检测细胞活性以选择最佳给药浓度.以最佳药物浓度Dinaciclib处理CAL27 细胞,作用 24 h和 48 h进行细胞计数,qRT-PCR和Western Blot法检测CDK2 的mRNA和蛋白质表达水平.结果:与癌旁组织相比,hnRNP A1、CDK2 在口腔癌组织中的表达水平显著增高.稳定转染降低CAL27 细胞中hnRNP A1 表达后,与对照组相比,CDK2 的表达随之降低,细胞增殖受到抑制.Dinaciclib可通过抑制CDK2 的表达而抑制口腔癌细胞的增殖.结论:HnRNP A1-CDK2 的表达水平与口腔鳞状细胞癌的生长密切相关,CDK2 抑制剂(Dinaciclib)有望通过抑制hnRNP A1-CDK2 信号通路而调控口腔癌的进展.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制.方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)和血管内皮生长因子A(VEGFA)的结合位点.HBMECs进行OGD/R处理构建脑缺血细胞模型,分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+siNC组、OGD/R+沉默MALAT1(OGD/R+siMALAT1)组和OGD/R+siMALAT1+过表达VEGFA(OGD/R+siMALAT1+VEGFA)组.采用小干扰RNA(siRNA)沉默MALAT1的表达,采用pcDNA载体构建VEGFA过表达载体,将构建的siMALAT1和pcDNA VEGFA载体分别或同时转染至HBMECs中.利用管形成实验检测各组细胞血管形成能力,Western blotting法检测各组细胞中VEGFA蛋白表达水平.6周龄健康雄性C57BL/6 J小鼠20只,随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)模型组、MCAO+NC空载体(MCAO+NC)组和MCAO+过表达MALAT1(MCAO+MATAL1)组,每组5只,除假手术组外,其余各组小鼠利用线栓法构建MCAO小鼠模型,MCAO+NC组和MCAO+MATAL1 组小鼠右脑室内分别注射NC空载体和MALAT1过表达载体.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组小鼠脑梗死面积百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中VEGFA蛋白表达水平.结果:生物信息学预测,MALAT1与hnRNPK及hnRNPK与VEGFA均存在结合位点.管形成实验和Western blotting法检测,与对照组比较,OGD/R模型组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OGD/R模型组比较,OGD/R+siMALAT1组细胞成管数明显减少(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+siMALAT1 组比较,OGD/R+ siMALAT1+VEGFA组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01).在MCAO模型小鼠实验中,TTC染色和Western blotting法检测,与假手术组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死面积百分率和脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与MCAO模型组比较,MCAO+MALAT1组小鼠脑梗死面积百分率明显降低(P<0.01),脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论:LncRNA MALAT1可增强靶基因VEGFA的稳定性并上调其表达,进而促进缺血性脑卒中小鼠的脑血管生成,为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路.