目的 鉴定鬼点灯正丁醇提取物的成分,探讨其止咳作用机制.方法 采用液相色谱-质谱(LC-MS)法对其成分进行检测,并结合自建数据库进行结构鉴定.通过中草药系统药理学平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)、Batman-TCM数据库收集成分靶点,通过GeneCard,OMIM,DisGeNET,TTD数据库筛选疾病相关靶点基因,通过Venny 2.1.0 软件获取成分-疾病共有靶点,通过Cytoscape 3.8.0 软件进行可视化处理,构建成分-疾病-靶点网络,通过String数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,通过R 4.4.1 软件进行基因功能(GO)分析、京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析.结果 鉴定出 55 个成分,主要包括有机酸类17 个、黄酮类 16 个、苯酚类 12 个、香豆素类 5 个、苯丙素类 2 个、氨基酸类 1 个、醌类 1 个、醇类 1 个.网络药理学分析结果显示,共筛选出 319 个共有靶点,活性较强的成分为白藜芦醇、木犀草素、表儿茶素、刺芒柄花素、刺槐素等,止咳作用的关键靶点蛋白为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(AKT1)、白细胞介素 6(IL-6)、ALB、Jun、胱天蛋白酶 3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)等;共筛选出 218 个分子功能条目,包括磷酸酶结合、转录共调节因子结合、AKT活性等;共筛选出 189 条信号通路,包括癌症、脂质与动脉粥样硬化、前列腺癌、乙型肝炎、麻疹、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终产物受体(AGE-RAGE)、磷脂酰肌醇-3-激酶-AKT(PI3K-AKT)信号通路等.结论 鬼点灯正丁醇提取物主要含有有机酸类、黄酮类、苯酚类、香豆素类、苯丙素类等化合物,其止咳作用可能主要与癌症、脂质与动脉粥样硬化、乙型肝炎、糖尿病并发症中的AGE-RAGE、PI3K-AKT信号通路等有关.

为探究藏药萨嘎尔(坚硬黄耆)正丁醇部位的化学成分,该研究采用HP-20 大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、ODS柱层析及半制备高效液相(PHPLC)对坚硬黄耆乙醇提取物正丁醇部位进行分离纯化,并采用NMR和HR-ESI-MS等波谱方法对所分离化合物进行结构鉴定.结果表明:从坚硬黄耆正丁醇部位分离得到 19 个黄酮衍生物和 1 个倍半萜苷,其结构分别为 7-O-methylorobol-4′-O-β-D-葡萄糖苷(1)、mildiside A(2)、柚皮素(3)、樱黄素4′-O-β-D-葡萄糖苷(4)、orobot(5)、山柰酚-3-O-β-D-(6′-乙酰)葡萄糖苷(6)、5,7-二羟基-4′-甲氧基异黄酮-2′-O-β-D-葡萄糖苷(7)、amarantholidoside IV(8)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖(1→2)-β-D-葡萄糖苷(9)、山柰酚(10)、5,7,4′-三羟基异黄酮(11)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(12)、(S)-mucronulatol(13)、毛蕊异黄酮(14)、槲皮素(15)、红车轴草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(16)、2′-羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷(17)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(18)、5,7,4′-三羟基-3′-甲氧基黄酮醇-3-O-芸香糖苷(19)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(20).化合物 1-9 为首次在黄耆属中分离得到,其余化合物均为首次在坚硬黄耆中分离得到.该结果为坚硬黄耆的药效物质研究提供了基础数据,为未来合理开发利用该植物资源提供了理论依据.

基于转录组学研究白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)含药血清通过调控表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对光滑念珠菌刺激下阴道上皮细胞的保护作用及机制.首先构建外阴阴道念珠菌病(VVC)模型小鼠,然后将该组小鼠连同空白对照组与BEPD干预组小鼠的阴道黏膜组织进行转录组测序分析基因表达差异,同时制备BEPD含药血清与氟康唑含药血清.将人阴道上皮细胞系(A431 细胞)分为对照组、模型组、空白血清组、氟康唑含药血清组、BEPD含药血清组、EGFR激动剂组、EGFR抑制剂组.以细胞增殖与活性检测(CCK-8)法分别确定光滑念珠菌、含药血清及药物对A431 细胞的安全浓度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、趋化因子配体 20(CCL20)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平;革兰染色观察光滑念珠菌黏附阴道上皮细胞;流式细胞术检测光滑念珠菌对A431 细胞凋亡的影响;根据转录组学结果,以免疫荧光检测细胞p-EGFR、p-ERK1/2 蛋白的表达,免疫印迹法检测细胞中p-EGFR、p-ERK1/2、p-C-Fos、p-P38、Bax、Bcl-2蛋白的表达.转录组测序显示,相对于模型组,BEPD治疗后出现 1 075 个基因上调和 927 基因下调,主要富集于包括MAPK等在内的免疫炎症相关通路.细胞学实验显示,BEPD含药血清能够降低细胞上清液中IL-1β、IL-6、GM-CSF、G-CSF、CCL20 炎症因子的水平,缓解由光滑念珠菌引起的细胞中LDH的释放,减少光滑念珠菌对A431 细胞的黏附,降低光滑念珠菌诱导的细胞凋亡,下调促凋亡相关蛋白Bax和上调抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并显著下调p-EGFR、p-ERK1/2、p-C-Fos与p-P38 的表达.该研究提示,BEPD对光滑念珠菌所致VVC的干预效应可能与其通过调节EGFR/MAPK通路保护阴道上皮细胞有关.

目的:通过研究翻白草不同部位提取物对常见致病菌的抗菌活性,筛选翻白草抗菌的活性部位,并揭示其发挥抗菌作用的活性成分.方法:采用溶剂萃取法获得翻白草不同部位提取物,采用微量稀释法开展抑菌活性研究,采用Spearman分析揭示各部位化学成分与抑菌活性的相关关系.结果:翻白草不同部位提取物中总黄酮和总酚含量差异显著,均以乙酸乙酯部位最高,正丁醇部位次之.抗菌活性结果表明,翻白草各部位提取物对受试菌株均具有抑菌效果,对革兰氏阳性细菌的抗菌效果优于革兰氏阴性细菌;不同部位提取物抗菌活性以乙酸乙酯部位最强,正丁醇部位次之,水部位最弱.相关性分析结果显示,总黄酮含量与所有受试菌株的抑菌活性呈显著相关,总酚含量仅与部分受试菌株的抑菌活性具有显著相关性.结论:翻白草不同部位提取物均具有一定的抗菌活性,其中以乙酸乙酯部位最强,且其发挥抑菌作用的活性成分为黄酮和酚类成分.研究结果为翻白草用于临床抗菌以及其药用价值的开发利用提供了理论依据.

为了解金钗石斛乙醇提取物正丁醇部位的化学成分,通过硅胶、凝胶、反相硅胶和高效液相等各种色谱技术进行分离纯化得到 3 个化合物,并根据核磁共振、质谱等波谱手段确定其结构分别为 2,11-epoxy-11,13-dihydroxypicrotoxano-3(15)-lactone(1)、2,4,6-三甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷(2)和3-methylbutan-1-ol β-D-glucopyranoside(3).其中化合物1 是一个新的木防己毒烷型倍半萜,该类化合物是金钗石斛中具有代表性的倍半萜类型.所有化合物均没有 α-葡萄糖苷酶和酪氨酸酶抑制活性,同时化合物1 也没有神经保护活性.

目的 基于BV-2小胶质细胞模型导向分离糙叶五加Acanthopanax henryi根的化学成分.方法 采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞建立神经炎症模型,以MTT法测定细胞毒性,对糙叶五加根的正己烷、醋酸乙酯、正丁醇提取部位进行活性筛选,确定活性部位,根据筛选结果对最佳活性部位进一步采用柱色谱、D101大孔树脂、半制备液相等方法进行分离纯化,根据理化性质和所得到的光谱数据,鉴定化合物的结构.并对其中得到的部分化合物进行活性验证.结果 糙叶五加醋酸乙酯提取物部位的活性最佳,从中分离得到17个化合物,分别鉴定为(+)-芝麻素(1)、松柏醛(2)、acuminatolide(3)、芝麻素酮(4)、10-二十九烷醇(5)、(±)-N-甲基-4-羟基癸酰胺(6)、罗汉松脂素(7)、(1 R,2S,5R,6S)-6-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-(3,4-methylenedioxyphenyl)-3,7-dioxabicyclo[3,3,0]octane(8)、1-辛烯(9)、胡椒醇(10)、(-)-松脂醇(11)、榕醛(12)、丁香醛(13)、丁香脂醇(14)、(-)-表丁香脂素(15)、原儿茶醛(16)、原儿茶酸(17).其中分离得到的(+)-芝麻素和丁香醛在细胞耐受浓度(5～80μmol/L)下能减少LPS诱导的BV-2小胶质细胞中一氧化氮(NO)的释放,且呈剂量相关性.结论 化合物3～10、12、15首次从五加科植物中分离得到,化合物2～12、15～16首次从糙叶五加中分离得到.糙叶五加根中的化合物芝麻素和丁香醛具有潜在的抗神经炎活性.

目的 观察雾水葛提取物对人泪腺上皮细胞活力和炎症的影响,鉴定活性单体并探索药理机制.方法 选取宁波市眼科医院收治的一位25岁女性泪腺炎患者,分离培养其人泪腺上皮细胞,免疫荧光法检测细胞标志物表达以鉴定细胞,不同剂量脂多糖(LPS)诱导细胞炎症反应,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)检测细胞活力筛选LPS最佳剂量.使用水、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别提取雾水葛活性成分,MTT法检测不同溶剂和剂量雾水葛提取物对人泪腺上皮细胞活力的影响.通过电喷雾质谱和核磁共振谱图确定氯仿提取物中活性成分的结构,将鉴定得到的5种化合物(LF1～5)进行药物靶标的预测,Western Blot法检测5种化合物的雾水葛提取物对人泪腺上皮细胞炎症相关蛋白表达的影响.结果 (1)细胞鉴定:角蛋白(CK)14、CK7、E-钙黏蛋白(E-cadherin)等阳性表达确定得到的是人泪腺上皮细胞和少量肌上皮细胞.(2)剂量筛选:处理48 h和72 h后,当LPS浓度为80 mg/L时,细胞活力开始低于对照组,差异有统计学意义(t48 h=6.827、t72 h=6.222,均P=0.002),故LPS浓度80 mg/L、处理时间为24 h为最佳诱导方法 .高浓度下,不同雾水葛提取物都具有对细胞活力的抑制作用,2.5、5、10、20 μg/mL为提取物的适宜浓度.(3)雾水葛氯仿提取物中物质鉴定:LF-1为(-)-Epicatechin,LF-2为8-(2-Pyrrolidinone-5-yl)-(-)-epicatechin,LF-4为3'-Demethylicariside E3,LF-3、LF-5为首次发现.(4)药物靶标筛选:5种氯仿提取物中,一共有5个共同靶点,分别为花生四烯酸5-氧化酶活化蛋白(ALOX5)、白细胞介素(IL)-2、IL-6、核因子κB1(NF-κB1)和血管内皮生长因子A(VEGFA).(5)炎症相关蛋白:5种雾水葛的氯仿提取物都能不同程度地抑制炎症相关蛋白的水平,其中以LF-3的抑制效果最佳.结论 雾水葛提取物能够抑制LPS诱导的人泪腺上皮细胞的炎症反应,其中以氯仿提取物中的LF-3成分的药理活性最佳.

目的 探究沙棘果不同极性部位体外抗氧化能力及体内抗氧化作用,明确有效部位,为拓展沙棘果研发利用、优化制备工艺提供依据.方法 以沙棘果为原料,95%乙醇提取后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到不同极性部位提取物,采用清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法、超氧阴离子自由基(O2·-)法及羟自由基(·OH)法,比较不同极性部位体外抗氧化作用.将110只小鼠随机分为空白组(Control),模型组(Model),沙棘果乙酸乙酯层低剂量组(YD,0.015 g/kg)、沙棘果乙酸乙酯层中剂量组(YZ,0.045 g/kg)、沙棘果乙酸乙酯层高剂量组(YG,0.135 g/kg),沙棘果正丁醇层低剂量组(ZD,0.04 g/kg)、沙棘果正丁醇层中剂量组(ZZ,0.13 g/kg)、沙棘果正丁醇层高剂量组(ZG,0.39 g/kg)及沙棘果醇提取物低剂量组(SD,0.16 g/kg)、沙棘果醇提取物中剂量组(SZ,0.5 g/kg)、沙棘果醇提取物高剂量组(SG,1.5 g/kg),每组10只.除Control外,其余各组每日腹腔注射浓度为0.05 g/mL D-半乳糖(D-gal)溶液,剂量为10 g/0.1 mL,Control注入等量生理盐水,连续60 d.造模第11天开始灌胃给药,给药组分别灌胃沙棘果不同极性部位提取物低、中、高剂量,Control与Model灌胃蒸馏水.末次给药后,考察小鼠体质量变化、脏器指数,对比各组小鼠的血清抗氧化能力,包括血清总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,观察心脏、肺脏、肾脏的病理变化.结果 沙棘果不同极性部位均可清除DPPH·、O2·-、·OH,具有体外抗氧化活性,其中沙棘果醇提取部位对DPPH·清除率高达76.09%,清除效果最强;体内实验结果显示,YG、ZZ、ZG、SZ、SG血清GSH-PX、SOD、T-AOC水平增高(P<0.05),且均可抑制MDA的积累(P<0.01).其中SG血清GSH-PX抗氧化水平为(872.73±165.39)U/mL、SOD为(180.02±12.33)U/mL、T-AOC为(9.25±1.45)U/mL,高于Model(P<0.01),MDA水平为(4.93±2.07)nmol/mL,相比于Model有所下降(P<0.05).HE染色结果表明,沙棘果不同极性部位对心脏、肺脏、肾脏组织细胞及结构损伤具有较好的修复作用.结论 沙棘果不同极性部位均具有一定的抗氧化作用,其中沙棘果醇提取物抗氧化能力最强,其余各部位抗氧化能力与极性呈正相关.

目的:研究半枫荷叶正丁醇部位的化学成分.方法:采用柱色谱和半制备高效液相色谱分离技术对半枫荷叶丙酮提取物的正丁醇部位进行分离纯化,并通过化合物的理化性质和一维核磁共振波谱数据进行化合物结构鉴定.结果:从半枫荷叶丙酮提取物的正丁醇部位中分离得到 13 个化合物,分别鉴定为:新绿原酸(1)、4-羟基-2-甲氧基苯酚-1-O-β-D-(6'-O-没食子酰基)-葡萄糖苷(2)、4-羟基-3-甲氧基苯酚-1-O-β-D-(6'-O-没食子酰基)-葡萄糖苷(3)、芦丁(4)、金丝桃苷(5)、异槲皮苷(6)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(7)、紫云英苷(8)、杨梅素-3-O-(6"-没食子酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(10)、二氢杨梅素(11)、紫云英苷-6"-O-没食子酸酯(12)、杨梅素-3-O-(6"-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(13).结论:以上 13 个化合物均为首次从该植物中分离得到.

[目的]研究植物内生菌Wickerhamomyces sp.KLBMP0506对拟南芥(Arabidopsis thaliana)的促生作用及潜在的促生机制.[方法]本研究以野生型拟南芥为试验材料,将其与菌株KLBMP0506进行平板共培养及盆栽接种试验,并测定拟南芥鲜重、干重、主根长、侧根数、叶绿素含量和可溶性糖含量等生长、生理指标,同时对筛选的与拟南芥侧根、主根形成及生长素合成和运输相关的11个基因进行实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析.[结果]接种目的菌株KLBMP0506后,平板试验的拟南芥鲜重及侧根、盆栽试验的拟南芥鲜重、干重、茎长、叶绿素含量和可溶性糖含量均有一定程度的增加;分隔平板试验及菌株KLBMP0506发酵液中促生活性物质分析显示,该菌株产生的挥发性有机物质及其发酵液中的正丁醇和乙酸乙酯提取物均对拟南芥有明显的促生作用;此外,qRT-PCR分析显示KLBMP0506处理后,拟南芥中与侧根形成相关基因ABI4、FLA1的表达出现不同程度的下调,与生长素合成、运输相关基因AUX1、EIR1、YUC4的表达整体呈上调趋势,表明菌株KLBMP0506可能通过调控拟南芥中与侧根形成以及与生长素合成和运输相关基因的表达,而实现对拟南芥的促生作用.[结论]本研究明确了菌株KLBMP0506对模式植物拟南芥的促生作用,为其开发成为微生物菌肥提供理论依据.