目的 掌握内蒙古包头市典型牧区环境中隐孢子虫污染情况.方法 于2016年12月,采集包头市牧区土壤、牧草、饲料和饮用水、地表水、地下水、污水处理厂出厂水水样进行镜检,阳性样本利用巢式PCR扩增后进行基因测序,分析隐孢子虫种属特性.结果 牛粪中隐孢子虫感染率为34.6％(72/208),水样隐孢子虫污染率为28.6％(2/7),土壤和植物样本均未检出隐孢子虫.4.2％(9/208)牛粪样本和28.6％(2/7)水样样本扩增出目标片段.测序比对结果显示11个PCR扩增阳性样本中隐孢子虫均为安氏隐孢子虫.结论 包头地区牛粪及水样等环境中检出的隐孢子虫在种属上为安氏隐孢子虫,当地卫生部门应关注畜牧业对环境的影响.

本文以黑水虻Hermetia illucens为研究对象,探索不同废弃物对其幼虫生长、营养组成及生产性能的影响.结果表明,黑水虻幼虫可将餐厨垃圾(FW)、厨余垃圾(KW)、蔬菜废弃物(VW)、猪粪(PM)、牛粪(DM)、鸡粪(CM)等转化成优质蛋白质和脂肪.以FW和KW作为基质养殖10 d后,幼虫体长(19.0 mm、17.1 mm)与单头重(171.54mg、136.82 mg)显著高于其它处理.虫粉粗蛋白含量受废弃物种类影响相对较小.不同废弃物处理虫粉均显示出良好氨基酸谱.尽管各处理虫粉总必需氨基酸含量低于鱼粉和豆粕,但FW、KW和CM处理虫粉缬氨酸含量高于鱼粉和豆粕,VW处理虫粉异亮氨酸和缬氨酸含量高于鱼粉和豆粕,PM处理虫粉组氨酸和缬氨酸含量高于鱼粉和豆粕.以FW和KW作为基质养殖10d后,尽管虫粉不饱和脂肪酸和必需脂肪酸比例低于采食PM和DM的处理,但远高于其它处理的虫粉粗脂肪含量(42.13％、37.49％),虫粉不饱和脂肪酸和必需脂肪酸含量也最高;料虫比(6.06、7.90)显著低于其它处理,幼虫转化率(59.40％、52.07％)显著高于其它处理;废弃物减量化率(89.53％、84.46％)仅低于VW处理(94.86％).利用黑水虻幼虫处理FW和KW,幼虫生长性能和营养组成优于其它废弃物处理,且生产性能最好.

目的 从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定.方法 用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacryl-amine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化.绘制病毒生长动力学曲线.结果 分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL.VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒.PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化.电镜检测到典型的轮状病毒颗粒.病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6h已经开始复制.结论 本研究成功分离到G6 P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6 P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考.

目的 了解内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况.方法 2022年8月至2023年3月在乌审旗嘎鲁图、苏力德苏木、乌兰陶勒盖、乌审召和图克镇采集牛、羊血样和粪样,间接ELISA检测血清抗肝片形吸虫抗体,随机抽取部分血清抗体检测样品对应的牛、羊粪样,采用虫卵沉淀法定性检查虫卵,对血清抗体检测和粪样虫卵检查结果进行一致性检验.2023年4月,在嘎鲁图、苏力德苏木和图克镇因感染片形吸虫死亡牛、羊尸首的肝脏和胆汁中采集片形吸虫成虫和虫卵,提取虫体和虫卵DNA,PCR扩增片形吸虫核糖体内转录间隔区2(ITS2)并测序,在NCBI数据库中进行BLAST比对分析,采用邻接法构建系统进化树.采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,不同地区的阳性率的比较采用x2检验.结果 共采集825份牛、羊血样,其中295份血清肝片形吸虫抗体阳性,总阳性率为35.8％(295/825),羊、牛阳性率分别为34.7％(227/655)、40.0％(68/170).羊血清阳性率以苏力德苏木最高[81.8％(45/55)],乌审召镇最低[22.0％(27/123)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(x2=73.93,P＜0.05).牛血清抗体阳性率以嘎鲁图镇最高[65.1％(28/43)],图克镇最低[19.2％(5/26)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(x2=21.50,P＜0.05).共抽取88份牛、羊粪样(羊粪样59份,牛粪样29份)检查,其中1份羊粪样、5份牛粪样检出肝片形吸虫虫卵,4份牛粪样检出同盘吸虫虫卵.88份牛、羊血样、粪样样品中,血清肝片形吸虫抗体的阳性率为29.5％(26/88),粪样肝片形吸虫卵的阳性率为6.8％(6/88),kappa值为0.086,两种方法的一致性为微弱.从2头牛体内收集到成虫和虫卵,从2头羊体内收集到成虫.共取5条成虫和2份虫卵提取DNA,PCR扩增共获得7条约550 bp的条带.BLAST比对分析结果显示,4条序列与来自中国的巨片形吸虫ITS2(GenBank:HQ700438)的序列一致性分别96.62％、95.91％、95.74％和92.97％,鉴定为巨片形吸虫;3条序列与来自中国的肝片形吸虫ITS2(GenBank:JF496717)的序列一致性分别为95.69％、99.80％和99.23％,鉴定为肝片形吸虫.系统进化树分析结果显示,本研究鉴定的肝片形吸虫与来自中国(GenBank:JF496717)、肯尼亚(GenBank:MZ396926)、埃及(GenBank:MW620063)的肝片形吸虫聚在同一分支上;巨片形吸虫与来自中国(GenBank:HQ700438)和印度(GenBank:OL691113)的巨片形吸虫聚在同一分支上.结论 内蒙古乌审旗地区牛、羊均存在肝片形吸虫和巨片形吸虫感染,片形吸虫的感染率较高.

目的 探讨泌乳期、干奶期反刍动物粪便的纤维素降解能力和菌群变化.方法 采集娟姗牛和荷斯坦牛泌乳期、干奶期的粪便,通过滤纸崩解实验分析牛粪纤维素降解能力,利用二代测序技术观察泌乳期和干奶期牛粪在滤纸崩解实验前后粪便菌群的结构变化.结果 滤纸崩解实验发现,娟姗牛泌乳期和干奶期粪便菌群纤维素降解能力无显著差异,而荷斯坦牛干奶期粪便菌群纤维素降解能力显著强于泌乳期.二代测序结果表明,荷斯坦牛在干奶期时粪便菌群alpha多样性低于泌乳期,而滤纸崩解后2种牛的粪便菌群alpha多样性均显著升高,且荷斯坦牛干奶期粪便菌群的alpha多样性高于泌乳期;Beta多样性分析显示同种牛在泌乳期和干奶期粪便菌群结构有显著差异.滤纸崩解前2种牛泌乳期和干奶期粪便菌群均以Proteobacteria为优势菌门,但在滤纸崩解后泌乳期和干奶期粪便菌群均以Bacteroidota和Firmicutes为优势菌门.滤纸崩解后,2种牛泌乳期和干奶期粪便菌群属水平组成相似,均以Rikenellaceae_RC9_gut_group、UCG-005、Christensenellaceae_R-7_group和UCG-010为优势菌属,且粪便菌群结构趋同.结论 干奶期荷斯坦牛粪便的纤维素分解效果显著.在反刍动物粪便样本中进行纤维素降解功能菌分离筛选时,应于动物干奶期进行自然样本的集中采集.

削减粪尿储存过程中氨(NH3)排放与氮素(N)损耗,是减少养殖业废弃物排放大气污染物和资源高效利用的重要举措.以青藏高原集约化养殖过程中新鲜牛粪尿混合物为研究对象,通过向粪尿中添加脲酶抑制剂(正丁基硫代磷酸三胺,NBPT)、硝化抑制剂(3.4-二甲基吡唑磷酸盐,DMPP)及明矾,测定不同抑制剂添加后短期储存过程中(22天)粪尿NH3释放量及不同形态养分含量,并利用结构方程模型分析影响粪尿储存过程中NH3排放和N转化的各因素效应.结果表明:(1)DMPP和明矾处理下NH3累积排放量及氮素损失量均与对照组无差异,而NBPT处理比对照组NH3累积排放量降低25.07％;(2)NBPT处理使粪尿短期储存过程中总有机氮含量平均值较对照增加43.86％,而铵态氮含量下降39.15％,同时粪尿C:N平均值比对照增加20.99％;(3)粪肥储存期间高含水量有利于削减NH3排放,脲酶抑制剂通过降低总有机氮分解和C:N,进而减少铵态氮生产并降低粪尿短期储存中NH3逸散.总之,脲酶抑制剂能够通过控制铵的生成有效减缓牛粪尿混合物储存过程中N的损耗和NH3释放,而硝化抑制剂及明矾的最优施用条件有待深入研究.

目的 明确宁夏银川地区奶牛毕氏肠微孢子虫的感染情况及其主要基因型.方法 2021年8月—2022年8月,在银川市及周边县6个规模化奶牛场采集奶牛新鲜粪样(包括腹泻粪样和非腹泻粪样),提取粪样基因组DNA,用毕氏肠微孢子虫内部转录间隔区(ITS)引物进行巢式PCR,回收PCR产物后送测序并进行BLAST比对,鉴定毕氏肠微孢子虫基因型.采用SPSS 25.0软件进行分析,不同月龄奶牛毕氏肠微孢子虫阳性率差异的比较采用x2检验.结果 共采集奶牛粪样772份,巢式PCR扩增结果显示,奶牛毕氏肠微孢子虫阳性率为8.7％(67/772),目的条带大小约为400 bp.不同牧场的奶牛毕氏肠微孢子虫阳性率为4.8％(6/124)～11.5％(18/156),差异有统计学意义(x2=30.828,P＜0.05).5～7月龄犊牛的阳性率最高(15.6％,23/147),12月龄以上育成牛的最低(3.4％,5/149),不同月龄的奶牛阳性率差异有统计学意义(x2=59.529,P＜0.05).腹泻粪样中毕氏肠微孢子虫的阳性率为10.6％(42/398),高于非腹泻粪样(6.7％,25/374)(x2=3.419,P＜0.05).测序共检出66条毕氏肠微孢子虫序列,分为CHN4、BEB4、J、I型等4种基因型,提交GenBank获得的登录号分别为OR352930、OR352929、OR352932 和 OR352931.其中 CHN4 型 3 条(占 4.5％),与 G1 亚群 CHN4 基因型(HM992511)的序列一致性为98.4％;BEB4型18条(占27.3％),与G2亚群BEB4基因型(AY331008)的序列一致性为96.3％;J型22条(占33.3％),与G2亚群J基因型(AF135837)的序列一致性为93.1％;I型23条(占34.9％),与G2亚群I基因型(AF135836)的序列一致性为91.1％.不同月龄奶牛感染的毕氏肠微孢子虫的优势基因型不同,BEB4型、J型和I型毕氏肠微孢子虫在奶牛的各个月龄段均存在,3种基因型的总和分别占阳性腹泻粪样和阳性非腹泻粪样的88.1％(37/42)和60.0％(15/25),二者差异有统计学意义(x2=3.419,P＜0.05).结论 宁夏银川地区奶牛存在毕氏肠微孢子虫感染,主要基因型为BEB4、J和I基因型.

目的 分离鉴定牛粪中的链霉菌,观察其抗菌活性.方法 采用稀释涂布法从牛粪中分离菌株,通过固定琼脂块法以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌为指示菌筛选抗菌活性较强的菌株,并对菌种进行生理生化鉴定及16S rDNA序列测定;采用纸片扩散法测定活性菌株发酵液抗菌活性,菌株发酵液抗菌活性物质进行水饱和正丁醇萃取,并通过Molish反应、双缩脲反应及茚三酮反应进行抗菌活性物质定性鉴别.结果 从牛粪中分离出8株菌株,并筛选出1株抗菌活性较强菌株B5-2,鉴定为链霉菌.活性菌株发酵液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、费氏柠檬酸杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌均具有较强抑菌作用.抑菌结果显示,菌株B5-2抑菌活性物质均为水溶性物质.Molish反应、双缩脲反应及茚三酮反应结果显示,菌株B5-2的抑菌活性物质均初步鉴定为糖类和蛋白质类.结论 筛选分离的链霉菌对临床致病菌有较强的抑制作用.

[目的]研究可降解成年泌乳奶牛粪中主要酸臭物的微生物群落的组成及动态变化.[方法]利用牛粪堆肥环境中的微生物进行了发酵优化、菌种驯化以及酸臭有机物降解规律的研究,结合rDNA高通量测序技术对有益微生物的组成及相对生物量进行了分析.[结果]实验发现,奶牛排泄物中的臭味来源主要为短链有机酸,堆肥自然环境中的微生物可以有效地对有机酸等污染物进行去除,经从低到高浓度的有机酸臭物(W/V,0.1％-0.2％)驯化发酵后,培养物中原核微生物以芽孢杆菌居多,而真核微生物主要由红曲霉及粉状毕赤酵母组成.[结论]进一步推测这几种微生物是耐受并降解有机酸臭物的优势微生物,可以应用于奶牛养殖过程中酸臭排泄物的生物控制.

对云南省大理苍山火烧遗迹地土壤中的捕食线虫真菌资源进行调查过程中,发现一株能自发产生孢子捕食器官的捕食线虫真菌,编号WZ27,经形态和分子鉴定为细颈亚隔指孢Dactylellina parvicolla.该株菌的主要特征为不需要经过任何物质的诱导即可自发产生孢子捕食器,其自发形成孢子捕食器官的百分率达到18.3％,通过线虫与牛粪的诱导,孢子捕食器官的形成明显增加.同时与细颈亚隔指孢D.parvicolla参考菌株相比,捕食器官生成时间要更短(P＜0.001),且捕食率高于参考菌株(P=0.003).