目的 掌握内蒙古包头市典型牧区环境中隐孢子虫污染情况.方法 于2016年12月,采集包头市牧区土壤、牧草、饲料和饮用水、地表水、地下水、污水处理厂出厂水水样进行镜检,阳性样本利用巢式PCR扩增后进行基因测序,分析隐孢子虫种属特性.结果 牛粪中隐孢子虫感染率为34.6％(72/208),水样隐孢子虫污染率为28.6％(2/7),土壤和植物样本均未检出隐孢子虫.4.2％(9/208)牛粪样本和28.6％(2/7)水样样本扩增出目标片段.测序比对结果显示11个PCR扩增阳性样本中隐孢子虫均为安氏隐孢子虫.结论 包头地区牛粪及水样等环境中检出的隐孢子虫在种属上为安氏隐孢子虫,当地卫生部门应关注畜牧业对环境的影响.

目的:了解大理白族自治州居民蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫和人芽囊原虫的感染情况，并对样本检测结果进行基因分析。方法:2022年9月6至12日，在大理白族自治州2个县设置采样点。共收集808份人粪便样本。采用巢式聚合酶链反应（PCR）法扩增隐孢子虫核糖体小亚基RNA和蓝氏贾第鞭毛虫β-giardin基因，PCR法扩增人芽囊原虫核糖体小亚基RNA。阳性产物送测序，采用BLAST分析比对，运用MEGA 11软件基于邻接法构建进化树，确定基因型。采用SPSS 24.0软件对数据进行分析。结果:居民隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫和人芽囊原虫总感染率为1.61%（13/808）。人芽囊原虫感染率为0.99%（8/808），其中白族居民感染率为0.88%（4/452），低于汉族居民感染率4.17%（4/96）（ χ2=12.533， P=0.049）；烹饪时砧板食物生熟不分开者感染率为1.95%（7/359），高于分开者感染率0.22%（1/449）（ χ2=6.071， P=0.035）；饮生水居民感染率为3.68%（5/136），高于不饮生水居民感染率0.45%（3/672）（ χ2=12.038， P=0.003）；养殖家畜居民感染率为1.67%（8/478），高于不养殖者（ χ2=5.578， P=0.045）。隐孢子虫感染率为0.37%（3/808）。蓝氏贾第鞭毛虫感染率为0.25%（2/808）。基因鉴定后分别为猪隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AⅡ亚型和兔人芽囊原虫ST7型感染。 结论:大理白族自治州居民存在肠道猪隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AⅡ亚型和兔人芽囊原虫ST7型感染，感染率处于较低水平。

目的:探讨BioFire公司FilmArray胃肠道感染检测卡(FGP)在急性胃肠炎住院患儿中实际应用的临床意义。方法:纳入2018年10月~2020年9月住院，医生采用FGP化验粪便样本的患儿，统计患儿的一般资料、临床信息和粪便化验结果，进行回顾性分析。结果:评估依据FGP检测结果调整患儿抗生素治疗方案的临床意义。140例腹泻患儿中，传统法检出24例患儿中的25种病原体，FGP鉴定出56例患儿中的75种病原体( P<0.05)。FGP检出弯曲菌、志贺菌、轮状病毒、蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫的阳性率较高。FGP对于17/140腹泻患儿(12%)具有临床意义，在既往体健(19%)和实体器官移植(15%)患儿中临床意义较高。 结论:研究发现FGP检测可以提高腹泻住院患儿尤其是既往健康及器官移植患儿的病原检出率，并影响临床决策。

目的 寄生虫感染与癌症的关系已成为研究热点之一.目前胃肠癌患者肠道单一原虫感染已有报道,但共感染报道较少见.本研究旨在明确胃肠癌患者肠道原虫共感染情况.方法 根据人五毛滴虫、十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、人芽囊原虫、脆弱双核阿米巴和毕氏肠微孢子虫特异的基因序列设计引物进行巢氏PCR扩增,检测195例临床胃肠癌患者肠道原虫共感染情况.结果 巢氏PCR检测结果显示胃肠癌患者肠道原虫总感染率为48.72％(95/195).其中2种原虫共感染23例(8例:人五毛滴虫+人芽囊原虫;11例:人五毛滴虫+微小隐孢子虫;3例:人五毛滴虫+十二指肠贾第虫;1例:十二指肠贾第虫+微小隐孢子虫),占肠道原虫感染的24.21％.3种原虫共感染为3例(1例:人五毛滴虫+微小隐孢子虫+人芽囊原虫;2例:人五毛滴虫+十二指肠贾第虫+微小隐孢子虫),占原虫感染的3.16％.1种原虫感染67例(56例:人五毛滴虫;9例:微小隐孢子虫;1例:人芽囊原虫;1例:脆弱双核阿米巴),占原虫感染的70.52％,未检测到毕氏肠微孢子虫感染.结论 胃肠癌患者存在肠道原虫共感染且感染率较高.单因素方差分析发现人五毛滴虫单独感染病例显著高于含人五毛滴虫的2种原虫共感染(P=0.0022)以及3种原虫共感染病例(P=0.0019),而2种和3种原虫共感染病例的感染率间无明显差异(P=0.2775),表明胃肠道癌症患者中人五毛滴虫单独感染病例高于2种或以上原虫共感染病例.BLAST和单核苷酸多态性分析发现,不同感染原虫的基因序列除个别与GenBank参考序列同源性为100％外,其他基因序列在不同位点出现不同程度的碱基突变、插入或丢失现象.该研究结果为今后胃肠癌患者病因学以及诊断和防治提供了重要参考.

目的 了解广西部分城市、乡镇的水源水、出厂水及污水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫污染情况,为医疗卫生、水利部门制定科学合理的防控措施提供理论依据.方法 于2015年12月-2023年3月以广西地区珠江流域、红河流域、桂南沿海诸河的9条江以及中部3个县的18个镇为采样点,使用《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750.12-2023)中的多孔海绵滤膜模块采样及快速淘洗步骤对原水和出厂水进行采集并做隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测,同时对水厂进行基本情况调查,检测39份出厂水中的水质相关指标,包括色度、浊度、pH、菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、氯化物、硫酸盐、溶解性总固体、总硬度、耗氧量和氨氮.结果 采集水样193份,隐孢子虫检出率为17.6％,贾第鞭毛虫检出率为14.5％;39份出厂水的其他水质检测指标超标率情况,色度为5.1％,浊度为2.6％,pH为5.1％,菌落总数为10.3％,总大肠菌群与耐热大肠菌群均为15.4％,耗氧量为5.1％,氨氮为10.3％,氯化物、硫酸盐、溶解性总固体、总硬度未超标.隐孢子虫与原水氯化物(r=-0.35,P＜0.05)、原水硫酸盐(r=-0.34,P＜0.05)、原水溶解性总固体(r=-0.45,P＜0.05)、原水总硬度(r=-0.38,P＜0.05)成负相关,与出厂水菌落总数(r=0.38,P＜0.05)、原水浊度(r=0.34,P＜0.05)成正相关;贾第鞭毛虫与原水溶解性总固体(r=-0.32,P＜0.05)、原水总硬度(r=-0.39,P＜0.05)、出厂水总硬度(r=-0.35,P＜0.05)、出厂水pH(r=-0.35,P＜0.05)成负相关,与出厂水菌落总数(r=0.34,P＜0.05)成正相关.结论 调查地区的部分原水和出厂水受到隐孢子虫和贾第鞭毛虫的污染,山泉水、水库水、江河水和地下水均有受到污染的风险,完善的水厂处理工艺可以有效地去除水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫.

目的 了解2022年省、市、县疾控机构(Center for Disease Control and Prevention,CDC)对《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)中规定的106项指标的检测能力,分析省、市、县各指标检测能力不足的主要原因.方法 收集2022年度全国各级CDC水质检测能力数据,对省级、地市级CDC的42项常规指标、64项非常规指标和对县级CDC的42项常规指标不具备检测能力的机构占比及不能检测的原因占比进行分析.结果 省级CDC检测能力不足主要体现在总α放射性、总β放射性(4个省级,占比14％)和贾第鞭毛虫、隐孢子虫(6个省级,21％),主要原因均为设备配置不到位(100％),其次是无检测人员(50％～75％).地市级CDC常规指标检测能力不足主要体现在总α放射性和总β放射性,占比均为47％;其次是消毒剂指标和消毒副产物指标(臭氧、总氯、C1O2、甲醛、溴酸盐、亚氯酸盐和氯酸盐),占比为6％～22％,不具备检测能力的原因包括无设备、无标准品、无试剂和无检测人员;非常规指标中,除了氨氮(1％)外的63项指标不具备检测能力的机构占比均≥19％,其中贾第鞭毛虫和隐孢子虫不具备检测能力的机构占比最高(65％),主要原因为无设备(88％),其次为无检测人员(42％～43％)、无试剂(40％)和无标准品(38％);其余61项指标不能检测的原因为无设备、无标准品、无试剂和无检测人员(占比分别为60％～76％、45％～62％、42％～53％、51％～67％).县级CDC常规指标中,放射性指标检测能力最弱(总α放射性和总β放射性,占比均为85％),其次是消毒剂指标和消毒副产物指标(臭氧、总氯、ClO2、甲醛、溴酸盐、氯酸盐、亚氯酸盐、四氯化碳和三氯甲烷),不具备检测能力的主要原因以无设备(83％～94％)和无检测人员(53％～76％)为主.结论 省、市、县CDC常规指标检测能力不足主要体现在放射性指标(省、市、县CDC),消毒剂指标(臭氧、总氯、ClO2)、消毒副产物指标(甲醛、溴酸盐、亚氯酸盐、氯酸盐)(市、县CDC),以及四氯化碳、三氯甲烷(县CDC);非常规指标中氨氮检测能力较好(省、市CDC),检测能力不足主要体现在贾第鞭毛虫和隐孢子虫(省、市CDC),及其他指标(市CDC).检测能力不足的主要原因是设备配置不到位,今后应该重点从增配设备着手,增强水质检测能力.

顶复门原虫可引起严重疾病威胁人类健康,如每年导致近100万人死亡的疟原虫,感染全球约1/3人口的弓形虫以及导致新生儿腹泻的隐孢子虫等.这3种顶复门原虫对全球的生物安全和公共卫生构成巨大隐患,且目前在临床上有效治疗药物有限.双膦酸盐临床上广泛用于治疗骨代谢疾病,但其化合物可有效抑制顶复门原虫生长,作用机制为竞争性抑制寄生虫类异戊二烯分子生物合成的2 C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径(MEP途径)中的法尼基焦磷酸合酶,干扰类异戊二烯化合物的合成而发挥作用.本文综述了双膦酸盐化合物在疟原虫、弓形虫和隐孢子虫方面的相关研究,以期为临床治疗相关疾病提供理论基础.

目的 初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900)829～1 099aa片段(GP900829～1099)通过核因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用.方法 从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP900829～1099氨基酸序列进行生物信息学分析.以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900829～1099基因片段,构建pET-32a-gp900829～1099重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达.纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素.采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00 μg/ml的GP900829～1099重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用.以0.16、0.80、4.00 μg/ml的GP900829～1099重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1 μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平.采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平.结果 GP900829～1099蛋白二级结构中β转角占比9.23％,无规则卷曲占比64.58％,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位.表达的GP900829～1099重组蛋白的相对分子质量约为49000.CCK-8结果显示,GP900829～1099对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00 μg/ml作为作用浓度.流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)％、(18.670±0.657)％、(20.470±1.271)％,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)％(t=3.818、3.872,P＜0.05).qPCR结果显示,0.16、0.80和 4.00 μg/ml组 RAW264.7 细胞的 IL-6 mRNA 相对转录水平分别为 1.409±0.050、2.052±0.098 和 3.284± 0.097,均高于对照组的 1.010±0.096(t=3.700、7.595、16.700,均P＜0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021 和2.378±0.037,后两者均高于对照组 1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P＜0.05).ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00 μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400± 17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940)mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630)mg/L(t=3.193、5.809、3.339,P＜0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800± 10.540)mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070)mg/L(t=4.125、10.830,P＜0.05).蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00 μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714± 0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的 1.0±0.0(t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P＜0.05).结论 不同浓度GP900829-～1099重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节.

目的 探讨高IgM综合征(HIGM)患者的临床、分子及免疫特点,提高临床诊治的认识.方法 回顾分析首都医科大学附属北京儿童医院免疫科2021年4月至2021年8月收治的3例HIGM患者的病例资料,文献复习97例HIGM患者的临床、分子及免疫特点.结果 纳入的3例患者感染的病原菌有大肠埃希菌、草绿色链球 菌、结核杆菌及乙肝病毒;感染部位有呼吸道、消化道、神经系统、口腔和耳,其中1例为首次报道的HIGM合并肠结核病例;1例有IgM升高,均有中性粒细胞及记忆B细胞减少;2例基因型为错义突变,1例为拷贝数变异,其中基因型CD40L exon5 deletion,为国内外首次报道的拷贝数变异的新突变.97例HIGM患者男女比例为5∶1,起病中位年龄1岁,感染最常累及的5个部位为:下呼吸道(73.2％)、上呼吸道(36.08％)、消化道(29.9％)、血液系统(23.71％)、口腔(16.49％).最常感染的病原菌有:耶氏肺孢子菌(12.4％)、白色念珠菌及其他真菌(11.3％)、巨细胞病毒(10.3％)、铜绿假单胞菌(9.3％)、链球菌(6.2％)和隐孢子虫(6.2％).免疫学特点:血IgM升高者占51.5％,血IgA降低者占83.5％,血IgG降低者占82.5％.基因型中,CD40L基因突变占82.5％,AICDA基因突变为14.4％,CD40基因突变占2.1％,1％为UNG基因突变.结论 对于反复感染,IgM高或不高,IgA、IgG低于正常水平,记忆性B细胞减少伴或不伴中性粒细胞减少者需警惕HIGM可能.

本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征.设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位.通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理,通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性.结果显示,成功获得并纯化抗 CpGAPDH 抗体;Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为 40 kDa;IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内,部分呈现颗粒状.利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性;在两种辅酶中,CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应.结果表明,本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.