患儿,男,13岁,云南临沧云县人,2023年10月20日因"发热、右上腹疼痛2天余"至当地市人民医院就诊,腹部CT平扫示肝内多发斑片状稍低强化,考虑感染性病变,予头孢曲松等(剂量疗程不详)抗感染、吡喹酮驱虫治疗无好转.11月9日转至昆明市儿童医院住院治疗.入院查体:剑下稍隆起,右上腹压痛,右侧腹直肌外缘可触及约3 cm × 2.5 cm的包块,肝于右肋下4 cm,剑下5 cm可及.血常规检查示嗜酸粒细胞计数升高(1.02×109/L)、C反应蛋白升高(68.54 mg/L).血生化检测示丙氨酸转氨酶(90 U/L)、天冬氨酸转氨酶(51U/L)、γ-谷氨酰转移酶(296 U/L)、碱性磷酸酶(794 U/L)、免疫球蛋白G(34.55 g/L)升高,血沉加快(67 mm/h),血培养阴性,粪样镜检未查见虫卵.腹部CT平扫+增强示肝实质内多发低密度灶,肝内胆管扩张并胆管炎可能.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测示血清片形吸虫抗体阳性.静脉血宏基因组二代测序,检出肝片形吸虫序列5条、铜绿假单胞菌序列8条,未检出真菌、病毒等其他病原体序列.患者居住于农村,有食用凉拌水芹菜和饮生水史.结合患者流行病学调查、体格检查及相关辅助检验结果,最终诊断为肝片形吸虫合并铜绿假单胞菌感染,予三氯苯达唑(500 mg/d,每天1次)口服2d,美罗培南[60 mg/(kg·d),每天3次]抗感染治疗2周后,未再发热、腹痛,好转出院.出院后3个月随访、复查,未再触及腹部包块,血常规检测示嗜酸粒细胞计数正常,腹部CT平扫示大部分病灶较前减小.

目的:观察华支睾吸虫感染大鼠肝脏组织微小RNA（miR）-122的表达变化及其与血清炎症细胞因子表达水平的相关性。方法:选择24只SPF级Wistar雄性大鼠，采用随机数字表法按体质量（100~120 g）分为对照组（100 μl生理盐水灌胃）、感染4周组（100个华支睾吸虫囊蚴灌胃）、感染8周组（100个华支睾吸虫囊蚴灌胃），每组8只。感染第3周开始收集大鼠粪便，采用生理盐水直接涂片进行华支睾吸虫感染Wistar大鼠动物模型鉴定；感染4、8周组大鼠分别于感染4、8周后处死，对照组大鼠分别于感染4、8周后各处死4只，采集各组大鼠心脏血及左叶肝脏组织。采用苏木精-伊红（HE）染色光镜下观察肝脏病理损伤情况，实时荧光定量PCR检测肝脏miR-122表达水平，Luminex 200液相悬浮芯片检测血清炎症细胞因子[肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）]表达水平；利用Pearson相关分析miR-122与炎症细胞因子的相关性。结果:光镜下，对照组大鼠肝细胞形态正常，未见炎症细胞浸润；感染4周组大鼠肝脏组织汇管区周围有淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润；感染8周组大鼠肝细胞排列紊乱、出现不同程度肿胀，细胞质疏松浅染，部分肝细胞呈水样变性，肝脏组织内可见胆管扩张、胆管壁增厚。对照组和感染4、8周组大鼠肝脏miR-122（1.00 ± 0.32、2.57 ± 0.60、3.63 ± 1.63），血清TNF-α[（0.14 ± 0.06）、（0.43 ± 0.09）、（0.61 ± 0.10）ng/ml]、IL-6表达水平[（0.03 ± 0.01）、（1.06 ± 0.24）、（1.48 ± 0.33）ng/ml]比较，差异均有统计学意义（ F = 13.36、69.99、82.23，均 P < 0.001）；IL-1β表达水平比较差异无统计学意义（ F = 2.15， P = 0.141）。Pearson相关分析结果显示，肝脏miR-122与血清TNF-α和IL-6表达水平均呈正相关（ r = 0.67、0.80，均 P < 0.001）。 结论:华支睾吸虫感染可引起宿主肝脏miR-122表达升高，且miR-122与血清炎症细胞因子TNF-α、IL-6表达水平密切相关。

2022年于卫氏并殖吸虫流行区湖北兴山县和保康县分别采集34只和27只溪蟹,捣碎后用NaOH消化法提取DNA.根据卫氏并殖吸虫5.8S核糖体RNA序列,使用Primer Explorer V5软件设计卫氏并殖吸虫环介导等温扩增(LAMP)特异引物,建立卫氏并殖吸虫LAMP检测方法,评价该方法的特异性、灵敏度、扩增效率及现场应用效果,并与沉淀镜检法比较.结果显示,建立的LAMP检出限可达1个卫氏并殖吸虫囊蚴,且与日本血吸虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫、肝毛细线虫、钩虫等虫种无交叉反应.检测4份卫氏并殖吸虫囊蚴DNA样品,出现浊度时间(Tt值)和浊度速率峰值(Df)均值为29.0 min和0.237.LAMP检出兴山和保康县卫氏并殖吸虫阳性溪蟹分别为24只和0只,阳性率分别为70.6％(24/34)和0(0/27);沉淀镜检法检出囊蚴阳性溪蟹分别为23只和0只,阳性率分别为67.6％(23/34)和0(0/27),两种方法结果差异无统计学意义(x2=0.2,P＞0.05).建立的卫氏并殖吸虫LAMP检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可用于淡水蟹卫氏并殖吸虫流行区现场调查或筛查.

目的 了解内蒙古乌审旗地区牛、羊片形吸虫感染情况.方法 2022年8月至2023年3月在乌审旗嘎鲁图、苏力德苏木、乌兰陶勒盖、乌审召和图克镇采集牛、羊血样和粪样,间接ELISA检测血清抗肝片形吸虫抗体,随机抽取部分血清抗体检测样品对应的牛、羊粪样,采用虫卵沉淀法定性检查虫卵,对血清抗体检测和粪样虫卵检查结果进行一致性检验.2023年4月,在嘎鲁图、苏力德苏木和图克镇因感染片形吸虫死亡牛、羊尸首的肝脏和胆汁中采集片形吸虫成虫和虫卵,提取虫体和虫卵DNA,PCR扩增片形吸虫核糖体内转录间隔区2(ITS2)并测序,在NCBI数据库中进行BLAST比对分析,采用邻接法构建系统进化树.采用SPSS 25.0软件进行统计学分析,不同地区的阳性率的比较采用x2检验.结果 共采集825份牛、羊血样,其中295份血清肝片形吸虫抗体阳性,总阳性率为35.8％(295/825),羊、牛阳性率分别为34.7％(227/655)、40.0％(68/170).羊血清阳性率以苏力德苏木最高[81.8％(45/55)],乌审召镇最低[22.0％(27/123)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(x2=73.93,P＜0.05).牛血清抗体阳性率以嘎鲁图镇最高[65.1％(28/43)],图克镇最低[19.2％(5/26)],不同地区血清抗体阳性率差异有统计学意义(x2=21.50,P＜0.05).共抽取88份牛、羊粪样(羊粪样59份,牛粪样29份)检查,其中1份羊粪样、5份牛粪样检出肝片形吸虫虫卵,4份牛粪样检出同盘吸虫虫卵.88份牛、羊血样、粪样样品中,血清肝片形吸虫抗体的阳性率为29.5％(26/88),粪样肝片形吸虫卵的阳性率为6.8％(6/88),kappa值为0.086,两种方法的一致性为微弱.从2头牛体内收集到成虫和虫卵,从2头羊体内收集到成虫.共取5条成虫和2份虫卵提取DNA,PCR扩增共获得7条约550 bp的条带.BLAST比对分析结果显示,4条序列与来自中国的巨片形吸虫ITS2(GenBank:HQ700438)的序列一致性分别96.62％、95.91％、95.74％和92.97％,鉴定为巨片形吸虫;3条序列与来自中国的肝片形吸虫ITS2(GenBank:JF496717)的序列一致性分别为95.69％、99.80％和99.23％,鉴定为肝片形吸虫.系统进化树分析结果显示,本研究鉴定的肝片形吸虫与来自中国(GenBank:JF496717)、肯尼亚(GenBank:MZ396926)、埃及(GenBank:MW620063)的肝片形吸虫聚在同一分支上;巨片形吸虫与来自中国(GenBank:HQ700438)和印度(GenBank:OL691113)的巨片形吸虫聚在同一分支上.结论 内蒙古乌审旗地区牛、羊均存在肝片形吸虫和巨片形吸虫感染,片形吸虫的感染率较高.

目的 建立一种灵敏、特异的基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-规则成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的日本血吸虫核酸检测方法.方法 以日本血吸虫SjR2基因片段作为靶序列,设计LAMP引物、gRNA和ssDNA探针,建立并优化LAMP-CRISPR反应体系.用LAMP-CRISPR方法检测含有SjR2靶序列的10倍梯度稀释的重组质粒,不同发育阶段日本血吸虫基因组DNA,以及肝片形吸虫、曼氏血吸虫、肥胖带绦虫、华支睾吸虫、似蚓蛔线虫、美洲钩口线虫、卫氏并殖吸虫、细粒棘球绦虫等蠕虫基因组DNA,评价其灵敏度和特异度.用LAMP-CRISPR方法分别检测15份血吸虫感染的阳性钉螺样本以及30份未感染的阴性钉螺样本,并与LAMP检测结果比较,以评价LAMP-CRISPR方法用于筛查感染性钉螺的应用效果.结果 建立的基于LAMP-CRISPR的核酸检测方法可特异性扩增并检测出日本血吸虫目的基因片段.其最适反应温度为37℃,反应体系中gRNA的最佳反应浓度为40 nmol/L,Cas12a蛋白的最佳反应浓度为40 nmol/L.该方法与肝片形吸虫等蠕虫基因组DNA均无交叉反应;以 10 倍梯度稀释的重组质粒为模板,该方法检测限为10拷贝/μL;此外,该方法能够准确检测出日本血吸虫虫卵、毛蚴、胞蚴、尾蚴、童虫及成虫基因组DNA.45份钉螺样本检测结果显示,LAMP-CRISPR与LAMP检测感染性钉螺的结果差异无统计学意义(χ2=0.05,P>0.05);与金标准比较,LAMP-CRISPR方法的灵敏度为100.00%(15/15),特异度为96.67%(29/30),LAMP方法的灵敏度为100.00%(15/15),特异度为93.33%(28/30).结论 本研究建立了一种灵敏性和特异性均较高的基于LAMP-CRISPR的日本血吸虫核酸检测方法,具有用于日本血吸虫感染快速检测及风险监测的潜力.

目的 建立基于荧光重组酶聚合酶核酸扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术快速检测粪样中美洲钩虫卵的方法,并评价其效能,为快速检测粪样中美洲钩虫卵提供技术支撑.方法 根据美洲钩虫的cox1基因序列设计荧光RPA引物及探针并进行筛选,建立荧光RPA检测方法.将美洲钩虫卵基因组DNA稀释至100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL、1 fg/μL、0.1 fg/μL等7个浓度梯度以测定荧光RPA法的最低检出值,利用荧光RPA法检测日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫DNA样本进行交叉反应实验.采集44例人粪样并进行DNA提取,运用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz)、半巢式PCR法、荧光RPA法同时检测,评价荧光RPA法的灵敏度和特异度.结果 建立的荧光RPA法可在20 min内特异性扩增出美洲钩虫cox1基因长度为194 bp的片段,最低检出值为10 fg/μL,与日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫均无交叉反应.通过对44份人粪便样本进行检测,Kato-Katz法和半巢式PCR法均检出26例阳性样本,荧光RPA法检出27例阳性样本,其中1号样本荧光曲线在反应后期略高于阴性对照,但未出现与阳性对照相似反应趋势,因此判定为疑似阴性样本.荧光RPA法与Kato-Katz法和半巢式PCR法相比,其灵敏度均为100.00%,特异度均为94.44%,检测结果一致性较好(Kappa=0.953>0.75).结论 荧光RPA法可在短时间内实现对美洲钩虫高效、敏感、特异的检测,有望应用于美洲钩虫感染的监测及预警.

肝硬化是指肝脏部位大量细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成,导致肝小叶结构破坏和假小叶形成,肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化[1].该疾病属于临床上常见的肝疾病,发病原因有多种,例如病毒性肝炎、酒精中毒、营养障碍、药物和毒物中毒、循环障碍、代谢障碍、胆汁淤积、血吸虫病等[2].目前,在治疗乙肝肝硬化中治疗重点就是进行抗病毒和抗肝纤维化.恩替卡韦是临床常用的抗病毒药物,对乙肝病毒多聚酶具有显著的抑制作用,且耐药率极低.复方鳖甲软肝片主治软坚散结,化瘀解毒,益气养血,主要用于慢性肝炎肝纤维化,以及早期肝硬化属瘀血阻络,气血亏虚患者,其能减少胶原蛋白合成,有效溶解和吸收已形成的肝纤维化组织,抑制贮脂细胞增殖,减少胶原蛋白合成,降低胶原蛋白在Diss腔过量沉积,及溶解和吸收已形成的肝纤维化作用,还可有效地抑制肝纤维化a2(Ⅰ) mRNA的表达,对肝早期纤维化有明显阻断作用[3].本研究对所有关于恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片治疗乙肝肝硬化的随机对照研究进行Meta分析,以期为临床上治疗乙肝肝硬化合理用药提供循证医学支持.报告如下.

患者女,60岁,因反复上腹部疼痛2个月于2016年12月13日人住玉溪市人民医院.患者2个月前无明显诱因出现上腹部隐痛,向腰背部放射,伴恶心、呕吐、出汗等,无发热、黄疸、反酸、嗳气、腹泻、腹胀、胸闷、心悸、胸痛等.患者于当地医院被诊断为“胆囊结石”,经治疗(具体不详)后腹痛仍然不缓解,遂转至玉溪市人民医院普外科行磁共振胰胆管造影(magnetic resonance cholangiopancreatography,MRCP),诊断为“胆囊结石、胆总管结石”,经抗炎对症治疗后病情好转,备行经内镜逆行性胰胆管造影术(endoscopic retrograde cholangio-pancreatography,ERCP)、胆总管取石术入住消化内科.

目的 探讨肝大片形吸虫病的影像学特点及临床特点.方法 回顾本院38例患者中,全部行腹部CT检查,5例行腹部彩超检查,10例行MRI平扫及CT增强扫描检查,2例行肝脏穿刺活检.结果 38例CT平扫示肝大,实质内斑片状低密度影,边界欠清,13例腹腔有低密度影(腹腔积液),其中10例CT增强病灶不均匀轻度强化.5例腹部彩超示:肝回声不均质声像,肝脏多发实质杂乱回声区及不规则液性暗区声像,脾大声像,其中2例患者腹腔有大量积液.10例MRI平扫示肝大,实质弥漫性异常信号灶,脾大.2例穿刺病理活检表现为寄生虫性肉芽肿与坏死,周围大量单核细胞和嗜酸性粒细胞浸润.临床特点:均有发热,大部分有腹痛、肝区压痛等.其中25例恶心、呕吐、食欲缺乏,15例腹腔积液,5例有心包积液,5例有肺实质变,个别有全身水肿、大便中带血,极个别患者有皮疹,瘙痒等症状.结论 人体肝大片形吸虫感染的CT、MRI表现为肝包膜下多发微小脓肿,部分呈簇状或隧道样特点;临床表现特点包括发热、腹痛、肝区压痛明显.结合寄生虫检查,有助于早期诊断.

肝吸虫病起病隐匿,早期临床症状不典型,没有特异性体征[1],轻症者常无症状,虫卵检出率低,易漏诊、误诊.现将1例曾被误诊为肝占位(肝内胆管细胞癌可能性大)的肝吸虫病的病例报道如下.1 病例资料患者女性,54岁,内蒙古乌兰浩特人,因"咳嗽、咳痰1个月,发现肝脏占位性病变10 d"于2017年4月8日入院.患者缘于2017年3月无明显诱因出现咳嗽,偶有咳痰,就诊于乌兰浩特市人民医院呼吸科,行相关检查提示双肺慢性炎症、肝脏占位性病变,遂行肝脏核磁共振检查提示肝内胆管细胞癌可能性大,为求进一步诊治入住本院肿瘤科.病程中近6个月体质量下降3 kg.既往史:10年前因肠结核行手术治疗.吸烟20余年,20支/d.查体:体温36.7℃,全身皮肤、巩膜无黄染,未见肝掌及蜘蛛痣,腹部无明显阳性体征,全身浅表淋巴结未触及肿大.辅助检查:肝功能:GGT 278.0 U/L,ALP 52.3 U/L,Alb 35.6 g/L;肿瘤标志物:CA19-9 57.52 U/ml.血常规、凝血常规、尿常规、大便常规+潜血、肾功能、电解质、空腹血糖、转铁蛋白、CRP、心磷脂抗体、外科综合未见异常.肝脏MRI平扫+增强(乌兰浩特市人民医院):肝S7段可见一大小约2.4 cm×3.4 cm近类圆形稍长T1稍长T2信号灶,T2SPAR及磁共振扩散加权成像(DWI)为高信号改变,增强扫描病灶动脉期强化不明显,门静脉期及延时扫描边缘和中心见轻度强化,其内可见局限扩张胆管.肝内可见多发大小不一类圆形长 T1长 T2信号灶, T2SPAIR呈高信号改变,增强扫描无强化,最大者位于肝S6段,直径约0.9 cm.腹腔未见明显肿大淋巴结、未见积液.诊断意见:(1)肝S7段占位性病变,伴其内及邻近肝内胆管局限性扩张,考虑为肝内胆管细胞癌可能性大.(2)肝内多发囊肿.全腹部多排CT平扫+三期增强:(1)肝右叶后段隧道样异常密度影,考虑为孤立性坏死结节,周围胆管扩张,倾向于寄生虫所致(图1),请结合临床,建议复查或进一步检查;(2)肝脏多发小囊肿;(3)不除外胆囊壁水肿;(4)左肾小囊肿.粪便寄生虫检测报告结果:肝吸虫感染;镜检:发现肝吸虫卵(图2);染色镜检:未发现其他虫卵、滋养体及包囊.诊断为肝吸虫病,给予喹酮1g,3次/d,口服,连服3d.第4天开始保肝治疗1周,复查肝功能正常,临床好转出院.1个月后复查粪便未发现虫卵,肝功能正常,嘱继续密切监测肿瘤标志物,定期复查腹部CT.